用于检测或辅助检测幽门螺杆菌的引物探针组合物以及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了用于检测或辅助检测幽门螺杆菌的引物探针组合物以及试剂盒。引物探针组组合组成：序列1所示引物H48

【技术实现步骤摘要】
用于检测或辅助检测幽门螺杆菌的引物探针组合物以及试剂盒


[0001]本专利技术涉及用于检测或辅助检测幽门螺杆菌的引物探针组合物以及试剂盒。

技术介绍

[0002]幽门螺旋杆菌(H.Pylori)是世界上最常见的病原体之一。幽门螺旋杆菌是引起消化性溃疡和慢性活动性胃炎的主要病因，也是世界卫生组织于2012年认定其为胃癌第一类致癌原。及时地诊断并根除幽门螺旋杆菌是治愈胃病的前提。
[0003]细胞毒素相关基因(cytotoxin associated geneA,cagA)是幽门螺杆菌中重要的毒力基因，编码表达细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin associated protein A,CagA)，是幽门螺杆菌产生细胞毒性的重要效应蛋白，其与严重的胃炎、萎缩(atrophy)、异型增生(dysplasia) 及胃腺癌有更高的相关性。cagA基因具有多态性，这种多态性可导致检测方法的敏感性差异，造成假阳性和假阴性结果的出现。
[0004]在临床应用方面，幽门螺杆菌的检查方法主要为经典的PCR方法，一般只用1对或2对引物进行PCR扩增。一方面，幽门螺旋杆菌的DNA突变性非常高，存在大量的变异，具有高度不一致性，单一引物PCR常常不能检测到DNA突变的菌种，很容易造成假阴性的结果。另一方面，只用一对PCR引物会有很高的概率与其他菌种或生物体的DNA片段具有同源性，而导致假阳性结果(例如目前常用的16S亚基序列虽具有保守性比较高的优点，但是它的特异性相对较低，因为所有的细菌核糖体中均有16S亚基序列，虽然在胃酸这一强腐蚀性的液体中能存活的细菌大多为幽门螺旋杆菌，但是在取样和DNA提取的过程中若发生细菌污染，则会影响检测结果，造成假阳性)。因此，现有方法的临床敏感性不是十分理想。
[0005]幽门螺杆菌分为西方型和东亚型，其中东亚型又称东亚高危型。东亚型的幽门螺杆菌毒力更高，更容易引起胃病的发展以及胃癌的发生。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供用于检测或辅助检测幽门螺杆菌的引物探针组合物以及试剂盒。
[0007]本专利技术提供了一种特异引物探针组组合(引物探针组组合甲)，由如下四个引物探针组组成：引物探针组H48、引物探针组H51、引物探针组H53和引物探针组H54；
[0008]引物探针组H48由引物H48
‑
F、引物H48
‑
R和探针H48
‑
P组成；引物H48
‑
F为序列表的序列1所示的单链DNA分子，引物H48
‑
R为序列表的序列2所示的单链DNA分子，探针H48
‑
P 的核苷酸序列如序列表的序列3所示；
[0009]引物探针组H51由引物H51
‑
F、引物H51
‑
R和探针H51
‑
P组成；引物H51
‑
F为序列表的序列4所示的单链DNA分子，引物H51
‑
R为序列表的序列5所示的单链DNA分子，探针H51
‑
P 的核苷酸序列如序列表的序列6所示；
[0010]引物探针组H53由引物H53
‑
F、引物H53
‑
R、探针H53
‑
P2和探针H53
‑
P3组成；引物
H53
‑
F 为序列表的序列7所示的单链DNA分子，引物H53
‑
R为序列表的序列8所示的单链DNA分子，探针H53
‑
P2的核苷酸序列如序列表的序列9所示，探针H53
‑
P3的核苷酸序列如序列表的序列10所示；
[0011]引物探针组H54由引物H54
‑
F、引物H54
‑
R和探针H54
‑
P组成；引物H54
‑
F为序列表的序列11所示的单链DNA分子，引物H54
‑
R为序列表的序列12所示的单链DNA分子，探针H54
‑
P 的核苷酸序列如序列表的序列13所示。
[0012]各个引物和探针的摩尔配比如下：H48
‑
F 0.3：H48
‑
R 0.3：H48
‑
P 0.15：H51
‑
F 0.15： H51
‑
R 0.15：H51
‑
P 0.1：H53
‑
F 0.45：H53
‑
R 0.45：H53
‑
P2 0.1：H53
‑
P3 0.1：H54
‑
F 0.45： H54
‑
R 0.45：H54
‑
P 0.45。
[0013]探针的5
’
末端具有荧光基团，3
’
末端具有荧光淬灭基团。
[0014]引物探针组组合甲中，四种探针的荧光基团各不相同。
[0015]本专利技术还保护引物探针组组合甲的应用，为如下(g1)和/或(g2)和/或(g3)和/或(g4) 和/或(g5)和/或(g6)和/或(g7)和/或(g8)和/或(g9)和/或(g10)和/或(g11)和 /或(g12)：
[0016](g1)制备用于检测受试者是否感染幽门螺杆菌的试剂盒；
[0017](g2)制备用于检测生物样本中是否含有幽门螺杆菌的试剂盒；
[0018](g3)制备用于鉴定幽门螺杆菌的试剂盒；
[0019](g4)制备用于检测受试者是否感染东亚型幽门螺杆菌的试剂盒；
[0020](g5)制备用于检测生物样本中是否含有东亚型幽门螺杆菌的试剂盒；
[0021](g6)制备用于鉴定东亚型幽门螺杆菌的试剂盒；
[0022](g7)检测受试者是否感染幽门螺杆菌；
[0023](g8)检测生物样本中是否含有幽门螺杆菌；
[0024](g9)鉴定幽门螺杆菌；
[0025](g10)检测受试者是否感染东亚型幽门螺杆菌；
[0026](g11)检测生物样本中是否含有东亚型幽门螺杆菌；
[0027](g12)鉴定东亚型幽门螺杆菌。
[0028]本专利技术还保护一种试剂盒，包括引物探针组组合甲；所述试剂盒的功能为如下(h1)和/ 或和/(h2)和/或(h3)和/或(h4)和/或(h5)和/或(h6)：
[0029](h1)检测受试者是否感染幽门螺杆菌；
[0030](h2)检测生物样本中是否含有幽门螺杆菌；
[0031](h3)鉴定幽门螺杆菌；
[0032](h4)检测受试者是否感染东亚型幽门螺杆菌；
[0033](h5)检测生物样本中是否含有东亚型幽门螺杆菌；
[0034](h6)鉴定东亚型幽门螺杆菌。
[0035]所述试剂盒还包括PCR反应液。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异引物探针组组合，由如下四个引物探针组组成：引物探针组H48、引物探针组H51、引物探针组H53和引物探针组H54；引物探针组H48由引物H48
‑
F、引物H48
‑
R和探针H48
‑
P组成；引物H48
‑
F为序列表的序列1所示的单链DNA分子，引物H48
‑
R为序列表的序列2所示的单链DNA分子，探针H48
‑
P的核苷酸序列如序列表的序列3所示；引物探针组H51由引物H51
‑
F、引物H51
‑
R和探针H51
‑
P组成；引物H51
‑
F为序列表的序列4所示的单链DNA分子，引物H51
‑
R为序列表的序列5所示的单链DNA分子，探针H51
‑
P的核苷酸序列如序列表的序列6所示；引物探针组H53由引物H53
‑
F、引物H53
‑
R、探针H53
‑
P2和探针H53
‑
P3组成；引物H53
‑
F为序列表的序列7所示的单链DNA分子，引物H53
‑
R为序列表的序列8所示的单链DNA分子，探针H53
‑
P2的核苷酸序列如序列表的序列9所示，探针H53
‑
P3的核苷酸序列如序列表的序列10所示；引物探针组H54由引物H54
‑
F、引物H54
‑
R和探针H54
‑
P组成；引物H54
‑
F为序列表的序列11所示的单链DNA分子，引物H54
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R为序列表的序列12所示的单链DNA分子，探针H54
‑
P的核苷酸序列如序列表的序列13所示。2.权利要求1所述特异引物探针组组合的应用，为如下(g1)和/或(g2)和/或(g3)和/或(g4)和/或(g5)和/或(g6)和/或(g7)和/或(g8)和/或(g9)和/或(g10)和/或(g11)和/或(g12)：(g1)制备用于检测受试者是否感染幽门螺杆菌的试剂盒；(g2)制备用于检测生物样本中是否含有幽门螺杆菌的试剂盒；(g3)制备用于鉴定幽门螺杆菌的试剂盒；(g4)制备用于检测受试者是否感染东亚型幽门螺杆菌的试剂盒；(g5)制备用于检测生物样本中是否含有东亚型幽门螺杆菌的试剂盒；(g6)制备用于鉴定东亚型幽门螺杆菌的试剂盒；(g7)检测受试者是否感染幽门螺杆菌；(g8)检测生物样本中是否含有幽门螺杆菌；(g9)鉴定幽门螺杆菌；(g10)检测受试者是否感染东亚型幽门螺杆菌；(g11)检测生物样本中是否含有东亚型幽门螺杆菌；(g12)鉴定东亚型幽门螺杆菌。3.一种试剂盒，包括权利要求1所述特异引物探针组组合；所述试剂盒的功能为如下(h1)和/或(h2)和/或(h3)和/或(h4)和/或(h5)和/或(h6)：(h1)检测受试者是否感染幽门螺杆菌；(h2)检测生物样本中是否含有幽门螺杆菌；(h3)鉴定幽门螺杆菌；(h4)检测受试者是否感染东亚型幽门螺杆菌；(h5)检测生物样本中是否含有东亚型幽门...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟祥珠，
申请(专利权)人：沈阳祥伴科技有限公司，
类型：发明
国别省市：