一种猪轮状病毒的抗原组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种猪轮状病毒的抗原组合及其应用，涉及生物医药技术领域。所述抗原组合包括P7型VP4蛋白和P23型VP4蛋白，所述P7型VP4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述P23型VP4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明专利技术以正在呈上升趋势流行的两种血清型猪轮状病毒的P7型VP4和P23型VP4为抗原免疫动物，结果显示，VP4蛋白具有良好的免疫原性，两种蛋白混合形成的二价亚单位疫苗效果优于P7型VP4或P23型VP4单独作为免疫原产生的免疫效果，二价亚单位疫苗可以有效诱导动物产生良好的体液免疫及细胞免疫。的体液免疫及细胞免疫。的体液免疫及细胞免疫。

【技术实现步骤摘要】
一种猪轮状病毒的抗原组合及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别是涉及一种猪轮状病毒的抗原组合及其应用。

技术介绍

[0002]猪轮状病毒(Porcine rotavirus，PoRV)是引起幼龄仔猪发生急性腹泻脱水的主要病原之一，近些年，猪轮状病毒感染呈世界流行，各国猪场中PoRV的阳性率呈明显走高趋势，报道最高感染率可达70％以上，仅次于猪流行性腹泻病毒(PEDV)，给养猪业健康发展造成更大威胁。疫苗接种是最有效、最经济的防控措施，国内市售的商品化疫苗仅有中国农科院哈尔滨兽医研究所研制的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻与猪轮状病毒(G5型)三联活疫苗。
[0003]轮状病毒由内衣壳蛋白(VP1、VP2、VP3和VP6)、外衣壳蛋白(VP7和VP4)和非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4和NSP5)11种蛋白组装而成。根据VP6可将轮状病毒可以分为12群，其中以A群轮状病毒感染最为普遍。根据VP7和VP4可将A群再分为众多血清型，即42种G型和58种P型。已有流行病学数据显示，G9已经替代G5成为优势流行血清型且P7和P23血清型占优势流行血清型65％以上。由于PoRV血清型种类多，不同血清型之间交叉保护效果差，因此迫切需要开发一种针对流行毒株的多价疫苗。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种猪轮状病毒的抗原组合及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术发现利用该抗原组合制备得到的疫苗可以有效诱导动物产生良好的体液免疫及细胞免疫。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供一种猪轮状病毒的抗原组合，所述抗原组合包括P7型VP4蛋白和P23型VP4蛋白，所述P7型VP4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述P23型VP4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0007]本专利技术还提供一种编码上述的抗原组合的基因组合，包括核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的基因。
[0008]本专利技术还提供一种重组质粒组合，包括表达P7型VP4蛋白的重组质粒和表达P23型VP4蛋白的重组质粒；表达P7型VP4蛋白的重组质粒包括如SEQ ID NO.1所示的基因；表达P23型VP4蛋白的重组质粒包括如SEQ ID NO.3所示的基因。
[0009]本专利技术还提供一种重组微生物菌株组合，包括表达P7型VP4蛋白的重组微生物菌株和表达P23型VP4蛋白的重组微生物菌株；表达P7型VP4蛋白的重组微生物菌株包括如SEQ ID NO.1所示的基因；表达P23型VP4蛋白的重组微生物菌株包括如SEQ ID NO.3所示的基因。
[0010]本专利技术还提供上述的抗原组合、基因组合、重组质粒组合或重组微生物菌株组合
在制备猪轮状病毒疫苗中的应用。
[0011]进一步地，所述猪轮状病毒为G9型A群猪轮状病毒。
[0012]本专利技术还提供一种猪轮状病毒蛋白疫苗，其特征在于，上述的抗原组合。
[0013]进一步地，所述猪轮状病毒蛋白疫苗还包括药学上可接受的辅料。
[0014]进一步地，所述辅料包括疫苗佐剂。
[0015]本专利技术还提供一种猪轮状病毒DNA疫苗，包括上述的基因组合、重组质粒组合或重组微生物菌株组合。
[0016]本专利技术公开了以下技术效果：
[0017]本专利技术成功构建了pCold
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sumo
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P7型VP4和pCold
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sumo
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P23型VP4重组表达质粒，获得了原核表达菌株，并成功诱导VP4蛋白的表达，经纯化后获得了大量的VP4蛋白，纯度≥90％，浓度不低于10mg/mL。
[0018]本专利技术以正在呈上升趋势流行的两种血清型猪轮状病毒的P7型VP4和P23型VP4为抗原免疫动物，结果显示，VP4蛋白具有良好的免疫原性，两种蛋白混合形成的二价亚单位疫苗效果优于P7型VP4或P23型VP4单独作为免疫原产生的免疫效果，二价亚单位疫苗可以有效诱导动物产生良好的体液免疫及细胞免疫。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为pCold
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sumo
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P7型VP4质粒双酶切鉴定结果；M：DL10000 DNA Marker；1：pCold
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sumo载体双酶切；2：pCold
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sumo
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P7型VP4重组质粒双酶切；
[0021]图2为pCold
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sumo
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P23型VP4质粒双酶切鉴定结果；M：DL10000 DNA Marker；1：pCold
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sumo载体双酶切；2：pCold
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sumo
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P23型VP4重组质粒双酶切；
[0022]图3为重组蛋白诱导表达情况；其中，A：sumo蛋白诱导表达结果；B：P7型VP4蛋白诱导表达结果；C：P23型VP4蛋白诱导表达结果；1，5，9：未诱导全菌裂解产物；2，6，10：诱导后全菌裂解产物；3，7，11：诱导后全菌裂解离心后的沉淀；4，8，12：诱导后全菌裂解离心后的上清；
[0023]图4为sumo载体蛋白纯化结果；M：蛋白Marker；1：蛋白原液；2：流穿蛋白；3
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6：洗脱目的蛋白；
[0024]图5为P7型VP4蛋白纯化结果；M：蛋白Marker；1：蛋白原液；2：流穿蛋白；3
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6：洗脱目的蛋白；
[0025]图6为P23型VP4蛋白纯化结果；M：蛋白Marker；1：蛋白原液；2：流穿蛋白；3
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6：洗脱目的蛋白；
[0026]图7为重组蛋白超滤结果；其中，A：sumo载体蛋白；B：P7型VP4蛋白；C：P23型VP4蛋白；M：蛋白Marker；1：纯化蛋白未超滤；2：纯化蛋白超滤后；
[0027]图8为重组蛋白Western blot鉴定结果；其中，M：蛋白Marker；1：sumo鉴定；2：P7型VP4鉴定；3：P23型VP4鉴定；
[0028]图9为以猪轮状病毒G9P7型(NJ2012)为靶病毒检测中和抗体的结果(*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.01)；其中，A：实验组(P7
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25、P7
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100、P23
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25、P23
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100、P7
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P23)和载体蛋白组(sumo)比较；B：蛋白单独免疫组(P7
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪轮状病毒的抗原组合，其特征在于，所述抗原组合包括P7型VP4蛋白和P23型VP4蛋白，所述P7型VP4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述P23型VP4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。2.一种编码如权利要求1所述的抗原组合的基因组合，其特征在于，包括核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的基因。3.一种重组质粒组合，其特征在于，包括表达P7型VP4蛋白的重组质粒和表达P23型VP4蛋白的重组质粒；表达P7型VP4蛋白的重组质粒包括如SEQ ID NO.1所示的基因；表达P23型VP4蛋白的重组质粒包括如SEQ ID NO.3所示的基因。4.一种重组微生物菌株组合，其特征在于，包括表达P7型VP4蛋白的重组微生物菌株和表达P23型VP4蛋白的重组微生物菌株；表达P7型VP4蛋白的重组微生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彬，张雪寒，周金柱，汤学超，朱雪蛟，陶然，范宝超，汪伟，郭容利，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：