家蚕马氏管特异表达启动子及其应用制造技术

本发明专利技术公开了家蚕马氏管特异表达启动子及其应用，该启动子能够驱动目的基因在马氏管特异表达，为研究和利用家蚕马氏管特异基因，特别是马氏管特异高量表达的转运排泄相关基因提供了有力的工具；同时也能在家蚕马氏管特异表达外源基因，具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
家蚕马氏管特异表达启动子及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及家蚕马氏管特异表达启动子，还涉及家蚕马氏管特异表达启动子的应用。

技术介绍

[0002]家蚕是一种具有重要价值的经济昆虫，作为鳞翅目的模式生物，家蚕在理论研究和生产应用方面都具有重要作用。马氏管是家蚕重要的渗透调节器官，同时还具有重要的代谢排泄、免疫和解毒功能。此外，越来越多的证据还表明马氏管是研究人类肾脏疾病非常有前途的模型，一些肾脏疾病在昆虫和人类身上表现出相似的表型。因此，马氏管作为昆虫中具有意想不到的广泛功能的关键组织而享有极大的声誉。然而，目前对家蚕马氏管的研究比较少，主要原因是可以利用的研究手段有限。随着家蚕基因组框架图、精细图及遗传变异图谱的相继完成，家蚕转基因技术也逐步完善，有关家蚕马氏管的研究逐渐增多，但仍需要更多的其他研究工具的配合来提高家蚕马氏管的代谢排泄和解毒能力，甚至是对人类肾脏疾病发病机制提供相关见解，这也成为了后基因组时代研究人员追求的目标，事关蚕业发展。要想研究和利用家蚕马氏管有关基因进行前述研究就需要有一个家蚕马氏管特异的启动子，但目前没有家蚕马氏管特异表达启动子的相关报道。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种家蚕马氏管特异表达启动子；本专利技术的目的之二在于提供含有所述家蚕马氏管特异表达启动子的表达载体；本专利技术的目的之三在于提供含有所述家蚕马氏管特异表达启动子的表达盒；本专利技术的目的之四在于提供含有所述家蚕马氏管特异表达启动子的转化载体；本专利技术的目的之五在于提供含有启动子、或所述表达载体、或所述表达盒、或所述转化载体的宿主细胞；本专利技术的目的之六在于提供所述家蚕马氏管特异表达启动子在驱动目标基因在家蚕马氏管特异表达中的应用。
[0004]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]1、家蚕马氏管特异表达启动子，所述家蚕马氏管特异表达启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0006]2、含有所述家蚕马氏管特异表达启动子的表达载体。
[0007]3、含有所述家蚕马氏管特异表达启动子的表达盒。
[0008]4、含有所述家蚕马氏管特异表达启动子的转化载体。
[0009]5、含有所述启动子、或所述表达载体、或所述表达盒、或所述转化载体的宿主细胞。
[0010]本专利技术优选的，所述宿主细胞为真核细胞或原核细胞。
[0011]6、所述家蚕马氏管特异表达启动子在驱动目标基因在家蚕马氏管特异表达中的应用。
[0012]本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了马氏管特异表达的启动子，该启动子能够
驱动目的基因在马氏管特异表达，为研究和利用家蚕马氏管特异基因，特别是马氏管特异高量表达的转运排泄相关基因提供了有力的工具；同时也能在家蚕马氏管特异表达外源基因，具有良好的应用前景。
附图说明
[0013]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0014]图1为Bm0004175基因的组织表达特征，其中A为荧光定量结果图，B为半定量结果图(He:头；Ep:表皮；Mg:中肠；Fb:脂肪体；Mt:马氏管；Sg:丝腺；Te:精巢；Ov:卵巢；Hem:血淋巴；Tr:气管)；
[0015]图2为转基因家蚕卵和成虫的显微镜下照片，其中A和C为明场下卵和成虫的照片，B和D为Red激发光下的照片。
[0016]图3为转基因家蚕和阴性对照家蚕中EGFP基因的蛋白印迹检测结果图(1：阴性对照家蚕马氏管组织；2：阴性对照家蚕除马氏管外剩余所有组织；3：转基因家蚕马氏管组织；4：转基因家蚕除马氏管外剩余所有组织)。
[0017]转基因家蚕是指经显微注射pBac[Bm0004175
‑
EGFP
‑
SV40，3
×
P3
‑
DsRed af]成功的家蚕，阴性对照家蚕是指未经任何处理的家蚕。
具体实施方式
[0018]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0019]实施例1、Bm0004175基因组织表达情况的RT
‑
PCR和荧光定量检测
[0020]在家蚕基因组数据库(https://silkdb.bioinfotoolkits.net/main/species
‑
info/
‑
1)中下载Bm0004175基因的CDS序列，利用软件Primer Premier 5.0设计特异检测引物。用大造5龄3天各组织cDNA模板进行RT
‑
PCR检测，PCR扩增条件为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒、55℃退火40秒、72℃延伸20秒，共26个循环，最后72℃延伸5分钟。PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，结果如图1中B所示。发现BGIBMGA014258基因在家蚕马氏管特异表达。用同样的引物进行荧光定量检测，扩增程序为：95℃预变性30秒，95℃变性3秒，60℃退火延伸30秒，循环40次，后使用2
‑
ΔΔCt
计算目的基因相对表达，结果如图1中A所示。结果进一步确定该基因在马氏管特异高量表达。检测引物BGIBMGA014258
‑
F:5
’‑
AGATACCAATTCAGCGATGGAT
‑3’
(SEQ ID NO.4)，BGIBMGA014258
‑
R:5
’‑
CAATACAGCAACACCTATGCTC
‑3’
(SEQ ID NO.5)。
[0021]实施例2、克隆家蚕Bm0004175基因启动子
[0022]提取家蚕大造基因组DNA，根据现有的家蚕基因组数据库信息(https://silkdb.bioinfotoolkits.net/main/species
‑
info/
‑
1)，设计家蚕Bm0004175基因启动子上、下游引物。其中上游扩增引物加了PmeI的酶切位点，下游扩增引物加了NheI的酶切位点。引物序列为Bm0004175
‑
pro
‑
F：5
’‑
agctttgtttaaactccatggaacgtagctctgaggct
‑3’
(SEQ ID NO.1)；Bm0004175
‑
pro
‑
R：5
’‑
ctagctagctgttagcttttgaaaat
‑3’
(SEQ ID NO.2)。以家蚕基因组为模板，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为引物进行PCR扩增，扩增条件为98℃预变性
5分钟；98℃变性10秒，55℃退火8秒，72℃延伸20秒，共30个循环本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.家蚕马氏管特异表达启动子，其特征在于：所述家蚕马氏管特异表达启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.含有权利要求1所述家蚕马氏管特异表达启动子的表达载体。3.含有权利要求1所述家蚕马氏管特异表达启动子的表达盒。4.含有权利要求1所述家蚕马氏管特异表达启动子的转化载体。5.含...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵萍，刘丽婧，赵东超，何清秀，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：