慢性肝损伤合并应激抑郁大鼠模型的制备方法技术

一种慢性肝损伤合并应激抑郁大鼠模型的制备方法，选用雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重在１８０－２２０ｇ之间，适应环境１周后，进行敞箱实验行为学筛选，选出积分相近的大鼠；第１－４周，正常饮食饮水，４０％ＣＣＬ↓［４］１ｍｌ／ｋｇ，皮下注射２次／周；５－１２周，正常饮食饮水，４０％ＣＣＬ↓［４］１ｍｌ／ｋｇ，皮下注射２次／周，生理盐水灌胃，１次／日；第１３周，正常饮食饮水，生理盐水灌胃，１次／日；第１４－１６周，首先进行敞箱实验，１只／笼，正常饮食饮水，生理盐水灌胃，１次／日，给予慢性应激刺激；第１１２天，称体重、进行糖水消耗及敞箱实验。本发明专利技术研究本病造模提供参考依据，为临床诊治肝病合并抑郁症提供有效的实验依据，还可为今后研发治疗本病的药物提供实验验证手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种动物实验模型的制备方法，尤其是涉及一种慢性 肝损伤合并应激抑郁大鼠模型的制备方法。
技术介绍
慢性肝损伤即慢性肝炎主要是指慢乙肝、慢丙肝，我国属高发国 家之一。因其具有传染性、难治性、恶变性、家族遗传性、经常出现 躯体不适等特点，使慢性肝炎患者长期或间断地处于心、身双重的折 磨中。所以，慢性肝炎患者长期处于一种抑郁状态，他们对生活悲观 失望，对生存失去信心。我们把这种由慢性肝炎引起的抑郁状态称为 "慢性肝炎合并抑郁症"。临床除慢性肝病常见的症状体征外，还具 有失眠、焦虑、抑郁、强迫、对疾病过渡关注等精神障碍症，这种状 态存在于肝病发生发展的各个阶段，并存在于每一个肝病个体，慢性 肝病和抑郁症二者互为因果，病情逐渐加重，治疗难度也随之加大， 故对本病的研究越来越受到医学界的重视。目前关于本病发生的流行病学大样本、多种心的研究尚缺乏，但 是随着本病越来越受到关注，已经有很多学者对慢性乙型肝炎、肝硬 化、肝癌等慢性肝病患者的抑郁状态进行了调查研究。有研究提示，一般肝病病人中有35% 60%具有不同程度的抑郁。周爱红对110例肝炎病人进行了调査，其中有67例(60. 9%)存在不同程度的抑郁 心理。肖琼研究发现，212份肝硬化患者中，92例存在抑郁症状，占 43.8%。张武等对82例慢性乙型肝炎患者进行测评，结果其中有抑 郁者29例，患病率为35% (29/82)，抑郁自评量表标准分均值为 43. 16±10.05，高于正常组41.88士10. 57(t= 2.41， P〈0. 05)。调查 显示慢性乙型肝炎症状严重、病毒复制明显及肝功能损害严重患者其 抑郁、焦虑情绪更明显。慢性肝炎合并抑郁症，祖国医学并无此病名，但根据其临床表现， 可归属于中医学"黄疸"、"胁痛"等合并"郁证"的范畴。许多古 代医籍中都有对"郁"的相关论述。对郁的认识源于《内经》，提出 外感致郁及情志致郁两种观点。宋代陈无择，其在《三因极一病证方 论》说"七情人之常性，动之则先自脏腑郁发，外形于肢体，为内 所因"。《景岳全书4卩证》"凡五气之郁则诸病皆有，此因病而郁也。 至若情志之郁，则总由乎心，此因郁而病也"。其病机是初起七情所 伤，肝失条达，气机不畅而成气郁，病属实为气病；气有余便是火可 成火郁；由气及血可成血郁；气滞湿阻，聚而成痰可成痰郁；气滞水 气不行，湿气停留可成湿郁；气滞痰湿不化则食积难消可成食郁；此 六郁互为因果又相互兼夹。由此可见躯体疾病伴发抑郁症与疾病本身 有一定的关系。韩毳认为抑郁症与中医肝脏有诸多联系，其从中医 肝脏的生理病理特点，以及中医学和现代医学对抑郁症的认识等方面 进行分析阐述，得出如下推论肝郁可能是抑郁症的重要发病环节； 神经内分泌功能失调是抑郁症和肝失疏泄证共同的病理学基础。导致心情压抑长期不能缓解，引起脑腑气机紊乱，脑神失调而致本病。慢性乙型肝炎的发病机制复杂，除与病毒感染有关外，还与机体 的免疫应答失调有关。研究表明心理反应可导致一系列的生理反应， 影响机体的免疫功能，从而影响疾病的治疗进程。对于肝炎合并抑 郁的发生国内外已有报道，但对其机理尚无较清晰的认识。从抑郁的 发病机理看，多认为与生物-心理-社会因素有关。目前研究表明抑郁症是脑内单胺类递质，如去甲肾上腺素(NE)、 5-羟色胺(5-HT)和多巴 胺(DA)等功能不足所致而成的。多种神经肽，包括促皮质激素释放激 素(CRH)、促甲状腺素释放激素(TRH)、生长激素(GH)、生长激素释放 激素(GHRH)等参与抑郁症的发病过程。此外，慢性应激造成下丘脑一 垂体一肾上腺轴亢进时产生的应激激素对海马神经元的选择性损伤 是导致抑郁发生的关键原因。脑源性神经营养因子(BDNF)属于神经 营养素家族，是一类很重要的保护因子。研究发现慢性不可预知的应 激可致抑郁症大鼠海马神经元明显受损，BDNF阳性神经元数量显著 减少。关于慢性肝炎合并抑郁症的发病越来越受到重视，目前无有效的 药物治疗，而对本病的实验研究尚未见有报道，如果可以成功复制慢 性肝损伤合并慢性不可预知温和应激抑郁模型大鼠模型，不但可以研 究本病发生的机理，还可以为研制治疗本病有效药物提供动物实验依 据，且本专利技术的造模方法为复合式造模方法，研究的是一种疾病长期 存在的状态下，合并其他相关疾病的实验，为其他疾病有合并症提供 实验思路。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种慢性肝损伤合并应激抑 郁大鼠模型的制备方法，用于研究本病发生的机理，为研制治疗本病 有效药物提供动物实验依据。为解决上述技术问题，本专利技术提供一种慢性肝损伤合并应激抑郁 大鼠模型的制备方法，其特征在于包括下列步骤选用雄性Wistar大鼠，体重在180-220g之间，适应环境1周后， 进行敞箱实验行为学筛选，选出积分相近的大鼠；第l-4周，5只/笼，正常饮食饮水，40%CCL4 lml/kg，皮下注射2次/周；第5-12周，5只/笼，正常饮食饮水，40% CCL4 lml/kg，皮下注 射2次/周，生理盐水灌胃，l次/日；第13周，5只/笼，正常饮食饮水，生理盐水灌胃，l次/日；第14-16周，首先进行敞箱实验，1只/笼，正常饮食饮水，禁 食禁水刺激时除外，生理盐水灌胃，1次/日，给予慢性应激刺激， 每日随机选用l种；第112天，称体重、进行糖水消耗及敞箱实验，实验结束即得慢 性肝损伤合并应激抑郁大鼠模型。本专利技术采用皮下注射40%CCL4、孤养、给予慢性不可预知温和刺 激造模方法制备慢性肝损伤合并孤养慢性不可预知温和应激抑郁大 鼠模型，确立慢性肝损伤合并孤养慢性不可预知温和应激抑郁模型评 价指标，不但可为今后研究本病造模提供参考依据，为临床诊治肝病合并抑郁症提供有效的实验依据，还可为今后研发治疗本病的药物提 供实验验证手段。下面通过实验例进一步说明本专利技术的效果选用雄性Wistar大鼠，体重在180-220g之间，适应环境1周后， 进行敞箱实验(Open-field)行为学筛选，将积分相近的170只大鼠 分为8组空白组、慢性肝损伤模型组(简称"肝炎模型组")、 肝损伤合并慢性轻度不可预见性应激抑郁模型(简称"抑郁模型 组")、养肝解郁颗粒低剂量组(简称"低剂量组")、养肝解郁颗 粒中剂量组(简称"中剂量组")、养肝解郁颗粒高剂量组(简称"高 剂量组")、乙肝益气解郁颗粒组(简称"对照1组")，盐酸氟西汀 胶囊组(简称"对照2组")，盐酸氟西汀胶囊组30只，其余各组为 20只，实验周期为16周；l-4周空白组5只/笼，正常饮食饮水；肝炎模型组、抑郁模 型组、对照1组、对照2组、高中低剂量组5只/笼，正常饮食饮 水，40%CCL4lml/kg，皮下注射2次/周；5-12周空白组5只/笼，正常饮食饮水，生理盐水灌胃，1次/ 日；肝炎模型组、抑郁模型组:5只/笼，正常饮食饮水，40%CCL4 lml/kg， 皮下注射2次/周，生理盐水灌胃，l次/日；对照l组5只/笼，正常饮食饮水，40%CCL4 lml/kg，皮下注射2次/周，乙肝益气解郁冲 剂水溶液灌胃，l次/日；对照2组5只/笼，正常饮食饮水，40%CCL4 lml/kg，皮下注射2次/周，盐酸氟西汀胶囊水溶液灌胃，l次/日； 高、中、低剂量组5只/笼，正本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种慢性肝损伤合并应激抑郁大鼠模型的制备方法，其特征在于包括下列步骤：选用雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重在１８０－２２０ｇ之间，适应环境１周后，进行敞箱实验行为学筛选，选出积分相近的大鼠；第１－４周，５只／笼，正常饮食饮水，４０％ＣＣＬ↓［４］１ｍｌ／ｋｇ，皮下注射２次／周；第５－１２周，５只／笼，正常饮食饮水，４０％ＣＣＬ↓［４］１ｍｌ／ｋｇ，皮下注射２次／周，生理盐水灌胃，１次／日；第１３周，５只／笼，正常饮食饮水，生理盐水灌胃，１次／日；第１４－１６周，首先进行敞箱实验，１只／笼，正常饮食饮水，禁食禁水刺激时除外，生理盐水灌胃，１次／日，给予慢性应激刺激，每日随机选用１种；第１１２天，称体重、进行糖水消耗及敞箱实验，实验结束即得慢性肝损伤合并应激抑郁大鼠模型。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘铁军，
申请(专利权)人：刘铁军，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]