一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法技术

本发明专利技术公开了一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法，涉及生物分子合成技术领域，其技术要点为：用原料核酸适配体Apt19S(a)，组蛋白去乙酰化酶抑制剂VPA(b)和荧光素FAM(c)通过化学反应后所形成的分子为目标物(d)。其中，a和b是通过氨基与羧基反应，形成酰胺键连接,a和c是通过磷酸二酯键反应连接；然后，通过迁移划痕实验等验证它促进牙髓干细胞的迁移及分化。本发明专利技术的方法合成的分子为新的分子，其可以促进成骨分化，可以促进细胞迁移，便于为将来临床牙髓保存治疗和DPSCs组织工程应用提供新思路。组织工程应用提供新思路。组织工程应用提供新思路。

【技术实现步骤摘要】
一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法


[0001]本专利技术涉及生物分子合成
，具体涉及一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法。

技术介绍

[0002]牙髓干细胞(dental pulp stem cells，DPSCs)是一类具有良好的自我更新能力、增殖能力和多向分化能力的成体干细胞。它可以在不同条件诱导下分化成特定的细胞类型,并在牙体修复和牙齿组织再生中起重要作用。当牙齿受到龋齿、磨损、外伤等外界刺激时,牙髓中的牙髓干细胞会被激活、迁移以及分化为分泌牙本质基质的成牙本质细胞，继而矿化,形成修复性牙本质，以防止病变的进展并保护牙本质。这种修复机制一直是牙齿再生组织工程学的热点问题。
[0003]适配体(aptamer)是一种短的单链DNA或RNA分子，具有结构稳定、易于合成和化学修饰等优势。适配体能与靶标分子特定区通过氢键作用、静电作用、碱基堆积作用、范德华力以及构象互补等方式，形成发夹、G四聚体、颈环、假结等稳定的结构实现结合，它在与其目标物质结合时的亲和力和特异性方面与抗体相当甚至优于抗体。
[0004]VPA丙戊酸作为一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂，可通过抑制组蛋白去乙酰化酶的催化活性，提高组蛋白的乙酰化水平，从而影响基因转录，促进多种细胞类型的成骨分化，在细胞基因表达的表观遗传调控中发挥重要作用。有研究表明，丙戊酸可以通过抑制组蛋白去乙酰化酶，增强间充质干细胞及成纤维细胞的成骨分化能力。Aptamer和VPA是否参与调控干细胞迁移及分化。在外力导致的牙髓干细胞损伤修复过程中，aptamer和VPA是否发挥一定的作用？如果发挥作用，Apt 19S
‑
VPA是否参与调控DPSCs迁移以及分化作用？目前，这些国内外尚未见报道。
[0005]为此，本专利技术旨在提供提出：一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法，以解决上述问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是为了解决上述问题，提供一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法，将原料核酸适配体Apt 19S、组蛋白去乙酰化酶抑制剂VPA和荧光素FAM通过化学反应后所形成的分子为目标物，即合成促进牙髓干细胞迁移以及分化的新型分子。
[0008]进一步地，所述合成方法中，核酸适配体Apt 19S与组蛋白去乙酰化酶抑制剂VPA通过氨基与羧基反应，形成酰胺键连接；核酸适配体Apt19S与荧光素FAM通过磷酸二酯键反应连接。
[0009]进一步地，所述合成的新型分子通过迁移划痕实验验证等其促进牙髓干细胞的迁
移及分化。
[0010]本专利技术方案解决的技术问题及意义：
[0011]Aptamer和VPA是否参与调控干细胞迁移分化。在外力导致的牙髓干细胞损伤修复过程中，Aptamer和VPA是否发挥一定的作用？Apt 19S
‑
VPA自身是否参与调控DPSCs迁移以及分化作用？
[0012]在本专利技术的方法中，本申请专利技术人的设计思路为：首先提出以下假说：Apt 19S
‑
VPA刺激可促进DPSCs迁移以及分化，在此过程中，Apt19S
‑
VPA可能作为外力刺激的一种重要细胞效应分子，外力刺激导致其表达上调，使其和细胞结合，募集干细胞并增强诱导DPSCs迁移以及分化。然后，为验证这一假说，本申请专利技术人综合应用transwell实验和划痕实验和Western blot等手段从干细胞层面系统研究Apt 19S
‑
VPA刺激在DPSCs迁移以及分化中的作用。
[0013]与现有技术相比，本方案的有益效果：本专利技术的方法合成的新型分子，其可以促进成骨分化，可以促进细胞迁移，便于为将来临床牙髓保存治疗和DPSCs组织工程应用提供新思路。
附图说明
[0014]图1是本专利技术实施例中合成的新型分子的结构示意图；
[0015]图2是本专利技术实施例中Wester blot实验(加刺激10d不矿化处理)；
[0016]图3是本专利技术实施例中细胞transwell迁移实验；
[0017]图4是本专利技术实施例中细胞划痕实验及其数据处理，划痕愈合率(％)＝(0h划痕面积—24h划痕面积/0h划痕面积)*100％。
具体实施方式
[0018]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术的实施例及附图，对本专利技术的技术方案进行进一步详细地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0019]需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。
[0020]实施例：
[0021]本专利技术实施例提供的方案为：一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法，将原料核酸适配体Apt 19S、组蛋白去乙酰化酶抑制剂VPA和荧光素FAM通过化学反应后所形成的分子为目标物，即合成促进牙髓干细胞迁移以及分化的新型分子，如图1所示，其为合成的新型分子结构示意图。其中，核酸适配体Apt 19S与组蛋白去乙酰化酶抑制剂VPA通过氨基与羧基反应，形成酰胺键连接；核酸适配体Apt 19S与荧光素FAM通过磷酸二酯键反应连接。
[0022]并且，在本实施例中，对本专利技术方法合成的新型分子，通过采用迁移划痕实验验证了等其促进牙髓干细胞的迁移及分化。如图2所示，其为Western Blot实验结果，根据结果显示，其验证了本实施例方法合成的新型分子可以促进成骨分化。如图3所示，其为细胞
transwell迁移实验结果，其验证了本实施例方法合成的新型分子可以促进细胞迁移及成骨分化。
[0023]综上所述，本专利技术的上述实施例中的新型分子的合成方法，合成的分子为新的分子，其可以促进成骨分化，可以促进细胞迁移，从而为Apt19S
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VPA刺激牙髓损伤修复的细胞归巢以及分化提供了依据，为将来临床牙髓保存治疗和DPSCs组织工程应用提供新思路。
[0024]以上具体实施例仅仅是对本专利技术的解释，其并不是对本专利技术的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本专利技术的权利要求范围内都受到专利法的保护。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法，其特征是：将原料核酸适配体Apt19S、组蛋白去乙酰化酶抑制剂VPA和荧光素FAM通过化学反应后所形成的分子为目标物，即合成促进牙髓干细胞迁移以及分化的新型分子。2.如权利要求1所述的一种促进牙髓干细胞迁移以及分化新型分子的合成方法，其特征是：所述合成方法中...

【专利技术属性】
技术研发人员：何文喜，李东雨，赵领洲，马楚凡，逄键梁，蔡成雄，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军特色医学中心，
类型：发明
国别省市：