利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株及方法技术

本发明专利技术涉及一种利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株及方法。该灵芝菌株的保藏编号为CCTCC No：M 20221338；该方法包括以下步骤：提供由如上述的灵芝菌株培养得到的灵芝菌丝体；提供包括有灵芝菌丝体的菌种，菌种选自液体菌种或固体菌种；将菌种接种于培养基中进行固体发酵，得到发酵产物；以及将发酵产物进行纯化，得到丹芝酸B。该方法具有周期短、产量高、成本低的优势，适宜规模化生产，并且避免了段木的使用，利于环境的保护。利于环境的保护。利于环境的保护。

【技术实现步骤摘要】
利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株及方法


[0001]本专利技术涉及微生物领域，特别是涉及利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株及方法。

技术介绍

[0002]松杉灵芝(Ganoderma tsugae)，生长于落叶松树干的基部，子实体一年生。松杉灵芝中含有多糖、三萜类化合物、甾醇、蒽醌类化合物、核苷类化合物以及及多种微量元素。其中，丹芝酸B(Ganolucidic acid B)为灵芝属中特有三萜化合物，对人肝癌细胞系Hep G2具有细胞毒活性。目前，在常规松杉灵芝生产中，丹芝酸B只能在子实体阶段合成，未在菌丝体阶段发现。然而，松杉灵芝子实体的栽培周期较长，导致三萜化合物的获取较为困难，同时，松杉灵芝主要栽培模式为袋料栽培和林下段木栽培，需要消耗大量的木材，容易造成森林资源的浪费和环境污染。

技术实现思路

[0003]基于此，有必要针对上述问题，提供一种利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株及方法；该方法通过纯化灵芝菌株的菌丝体固体发酵产物，得到在常规生产中只能通过灵芝子实体合成的三萜化合物丹芝酸B，具有周期短、产量高、成本低的优势，适宜规模化生产，并且避免了段木的使用，利于环境的保护。
[0004]本专利技术提供了一种利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株，保藏编号为CCTCC No：M 20221338。
[0005]一种如上述的利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株的选育方法，包括如下步骤：
[0006]提供“GT42”的单核体以及“GT268”的单核体；以及
[0007]将所述“GT42”的单核体与所述“GT268”的单核体进行单单杂交，筛选出存在锁状联合的杂交子，得到保藏编号为CCTCC No：M 20221338的灵芝菌株。
[0008]在一实施方式中，所述提供“GT42”的单核体以及“GT268”的单核体的步骤包括：
[0009]提供“GT42”的原生质体悬液和“GT268”的原生质体悬液；
[0010]将所述“GT42”的原生质体悬液和所述“GT268”的原生质体悬液分别进行再生培养，得到“GT42”的再生菌落以及“GT268”的再生菌落；以及
[0011]筛选出不存在锁状联合的菌落，得到“GT42”的单核体以及“GT268”的单核体。
[0012]一种如上述的利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株在育种中的应用。
[0013]一种灵芝菌丝体，所述灵芝菌丝体由如上述的利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株培养得到。
[0014]一种利用灵芝菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的方法，包括以下步骤：
[0015]提供由如上述的灵芝菌株培养得到的灵芝菌丝体；
[0016]提供包括有所述灵芝菌丝体的菌种，所述菌种选自液体菌种或固体菌种；
[0017]将所述菌种接种于培养基中进行固体发酵，得到发酵产物；以及
[0018]将所述发酵产物进行纯化，得到丹芝酸B。
[0019]在一实施方式中，所述培养基中包括有大米、小米、玉米或小麦中的至少一种；
[0020]及/或，进行固体发酵的步骤中，温度为20℃
‑
30℃。
[0021]在一实施方式中，将所述发酵产物进行纯化的步骤包括：
[0022]将所述发酵产物烘干后进行粉碎，将粉碎产物与提取剂混合进行浸提，得到提取液；以及
[0023]将所述提取液进行纯化。
[0024]在一实施方式中，所述提取剂选自醇类化合物或醇类化合物和水的混合溶液；
[0025]及/或，所述粉碎产物与所述提取剂的质量比为1:17
‑
1:23；
[0026]及/或，所述进行浸提的步骤中，温度为77℃
‑
83℃。
[0027]在一实施方式中，将所述提取液进行纯化的步骤包括：将所述提取液进行层析纯化，收集洗脱液，将所述洗脱液进行浓缩。
[0028]本专利技术提供的利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株，其固体发酵产物中三萜化合物含量高，将发酵产物进一步纯化，实现了三萜化合物丹芝酸B的高效、简单、环保的制备，相比于从灵芝子实体中获取丹芝酸B，有效的缩短了丹芝酸B的制备周期。
[0029]本专利技术提供的利用灵芝菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的方法，通过选择特定的灵芝菌株，进行固体发酵，进一步纯化发酵产物，得到三萜化合物丹芝酸B，具有周期短、产量高、成本低的优势，适宜规模化生产，并且避免了木材的使用，利于环境的保护，能产生优异的经济效益和社会效益。
附图说明
[0030]图1是松杉灵芝GTZ01和“吉林松杉”发酵产物的液相图谱，A代表GTZ01试验组，B代表栽培“吉林松杉”试验组；
[0031]图2是松杉灵芝GTZ01和“吉林松杉”进行固体发酵的对比图，A代表GTZ01试验组，B代表栽培“吉林松杉”试验组。
具体实施方式
[0032]为了便于理解本专利技术，下面将参照相关实施例对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0033]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0034]以下将对本专利技术提供的利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株及方法作进一步说明。
[0035]本专利技术提供的利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株：
[0036]名称：松杉灵芝GTZ01；
[0037]分类命名：Ganoderma tsugae GTZ01；
[0038]拉丁学名：Ganoderma tsugaeMurrill；
[0039]于2022年08月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为：中国.武汉.武汉大学；保藏编号为CCTCC No：M 20221338。
[0040]本专利技术提供的灵芝菌株的选育方法，包括如下步骤：
[0041]S10，提供“GT42”的单核体以及“GT268”的单核体；以及
[0042]S20，将“GT42”的单核体与“GT268”的单核体进行单单杂交，筛选出存在锁状联合的菌丝，得到灵芝菌株。
[0043]步骤S10中，“GT42”：
[0044]名称：松杉灵芝GT42；
[0045]分类命名：Ganoderma tsugae GT42；
[0046]拉丁学名：Ganoderma tsugaeMurrill；
[0047]于2022年11月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为：中国.武汉.武汉大学；保藏编号为CCTCC No：M 20本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株，其特征在于，保藏编号为CCTCC No：M 20221338。2.一种如权利要求1所述的利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株的选育方法，其特征在于，包括如下步骤：提供“GT42”的单核体以及“GT268”的单核体；以及将所述“GT42”的单核体与所述“GT268”的单核体进行单单杂交，筛选出存在锁状联合的杂交子，得到保藏编号为CCTCC No：M 20221338的灵芝菌株。3.根据权利要求2所述的灵芝菌株的选育方法，其特征在于，所述提供“GT42”的单核体以及“GT268”的单核体的步骤包括：提供“GT42”的原生质体悬液和“GT268”的原生质体悬液；将所述“GT42”的原生质体悬液和所述“GT268”的原生质体悬液分别进行再生培养，得到“GT42”的再生菌落以及“GT268”的再生菌落；以及筛选出不存在锁状联合的菌落，得到“GT42”的单核体以及“GT268”的单核体。4.一种如权利要求1所述的利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株在育种中的应用。5.一种灵芝菌丝体，其特征在于，所述灵芝菌丝体由如权利要求1所述的利用菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的灵芝菌株培养得到。6.一种利用灵芝菌丝体固体发酵合成丹芝酸B的方法，其特征在于，包括以下步骤：提供由...

【专利技术属性】
技术研发人员：付永平，李振皓，李明焱，王瑛，徐靖，袁晓辉，熊晖，肖世俊，
申请(专利权)人：金华寿仙谷药业有限公司浙江寿仙谷植物药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：