本发明专利技术公开了一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法，在3因素3水平正交实验的基础上，测定了腐解液中2种酚酸，确定了紫茉莉凋落叶腐解时能提高酚酸含量的最佳条件，即pH为5,腐解时间30天,腐解温度35℃时两类酚酸含量最高。本发明专利技术区分了影响紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸含量的主次因素，快速找到了最优参数组合。为紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸的提取，提供了指导信息和科学支持。导信息和科学支持。
【技术实现步骤摘要】
一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法
[0001]本专利技术涉及一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法，属于生物化学
技术介绍
[0002][0003]外来入侵种严重威胁着生物多样性和生态安全，已传入的入侵植物正在扩散危害，新的危险性入侵物种也不断出现并构成潜在威胁。外来入侵种成功入侵的关键是分泌次生代谢物对本地种产生化感效应，主要是抑制本地种的种子萌发和幼苗生。
[0004]外来入侵植物紫茉莉不仅对Cd有较强的耐受能力，其富集量也接近超富集植物的标准，尤其是在高浓度环境中依然能保持较高生物量，尤其叶片繁茂，叶片最先凋落，凋落后经残体腐解后将化感物质释放出来，化感效应是将紫茉莉应用于Cd土壤污染修复的最大障碍。因此，确定紫茉莉凋落叶腐解时能提高酚酸含量的最佳条件，为紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸的提取，提供了指导信息和科学支持；测定优化条件下紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸含量的多少，对评估将紫茉莉运用于Cd污染土壤修复的生态风险提供理论依据。
技术实现思路
[0005]本专利技术要解决的技术问题，在于提供一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法，其能够识别出各个关键因子对提高酚酸含量的影响主次以及关键因子之间相互影响，快速找到最优参数组合，为紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸的提取，提供了指导信息和科学支持。
[0006]本专利技术通过下述方案实现：一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法，包括如下步骤：
[0007]S1、制备紫茉莉凋落叶腐解液，备用；
[0008]S2、初步确定影响S1紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸含量的关键因子；
[0009]S3、根据自然生长紫茉莉环境的关键因子，设计多因素多水平实验方案，进行模拟实验，得到各关键因子主效应及交互作用；
[0010]S4、采用高效液相色谱法测定模拟实验中的酚酸含量数据，验证关键因子是否显著提高紫茉莉凋落叶的腐解液中酚酸的含量，并得到关键因子的最优参数组合。
[0011]步骤S1中，所述紫茉莉凋落叶腐解液的制备步骤为：
[0012]S11,收集培养了90天后自然枯落的紫茉莉凋落叶；
[0013]S12，将采集紫茉莉凋落叶用蒸馏水清洗3次，55℃烘干48h至质量恒定，剪成1
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2cm的碎片；
[0014]S13，将剪碎后的紫茉莉凋落叶碎片与培养了紫茉莉的含Cd土壤及蒸馏水以(植株：土壤：纯水＝1：1：10)(w:w:v)混合于锥形瓶中，置于人工气候箱内25℃恒温避光腐解，每个处理浓度重复4次；
[0015]S14，分别称取10g腐解物，装入锥形瓶中，加100mL蒸馏水在25℃温度的摇床上，120r
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min
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1振荡浸提24h；
[0016]S15，经纱布和定性滤纸过滤后取收集液即为100g
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1的紫茉莉腐解液，之后用0.45μm针式滤头过滤，用于化感物质酚酸的检测，4℃冰箱保存备用。
[0017]步骤S3中，所述多因素实验设计步骤为：在单因素基础上，以综合评分为指标，选取温度、腐解时间、pH,3个因素，每个因素选取3个水平，进行L9(34)正交试验，碱性腐解液用0.1mol
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1的NaOH调pH到9，酸性腐解液用0.1mol
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1HCL调节至pH为5；中性腐解液用0.1mol
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1的NaOH调pH到7。
[0018]步骤S4中，所述紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸含量的测定步骤为：
[0019]S41，酚酸标准品溶液制备:酚酸标准品购于四川成都乐美天医药/德斯特生物有限公司，纯度：HPLC≥98％。分别准确称取各标准品10mg，用50％甲醇溶解并定容至10mL，配制成质量浓度为1000mg
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1的单标储备液。准确移取各标准储备液1mL，置于10mL容量瓶中，配制成浓度为100mg
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1混合标准测试液，用甲醇逐级稀释，配制成浓度范围为100、50、25、10、5、1mg
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1系列混合标准溶液，保存于4℃冰箱中备用；
[0020]S42，色谱条件的选择：几种酚酸含量用超高效液相色谱仪(Ultra performance liquid chromatography，UPLC，美国)测定；
[0021]S43，色谱柱：色谱柱为CAPCELL PAK CR(4.6I.D.
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250mm，5um)；
[0022]S44，流动相A(乙酸：甲醇：水＝2％：10％：88％)，B(乙酸：水：甲醇＝2％：10％：88％)，洗脱梯度(0～16.5min，100％ A；16.5min，80％ A；16.5～26.5min，40％ A；26.5
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30min，30％ A；30～32min，0％ A；32～35min，0％ A；35min，0％ A；35～35.1min，100％ A；35.1～40min，100％ A；)。
[0023]本专利技术的有益效果为：本专利技术一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法设计合理、提高了酚酸含量、纯化效果好，为紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸的提取，提供了指导信息和科学支持
具体实施方式
[0024]下面对本专利技术进一步说明，但本专利技术保护范围不局限所述内容。
[0025]为了清楚，不描述实际实施例的全部特征，在下列描述中，不详细描述公知的功能和结构，因为它们会使本专利技术由于不必要的细节而混乱，应当认为在任何实际实施例的开发中，必须做出大量实施细节以实现开发者的特定目标，例如按照有关系统或有关商业的限制，由一个实施例改变为另一个实施例，另外，应当认为这种开发工作可能是复杂和耗费时间的，但是对于本领域技术人员来说仅仅是常规工作。
[0026]一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法，包括如下步骤：
[0027]S1、制备紫茉莉凋落叶腐解液，备用；
[0028]S2、初步确定影响S1紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸含量的关键因子；
[0029]S3、根据自然生长紫茉莉环境的关键因子，设计多因素多水平实验方案，进行模拟实验，得到各关键因子主效应及交互作用；
[0030]S4、采用高效液相色谱法测定模拟实验中的酚酸含量数据，验证关键因子是否显著提高紫茉莉凋落叶的腐解液中酚酸的含量，并得到关键因子的最优参数组合。
[0031]步骤S1中，所述紫茉莉凋落叶腐解液的制备步骤为：
[0032]S11,收集培养了90天后自然枯落的紫茉莉凋落叶；
[0033]S12，将采集紫茉莉凋落叶用蒸馏水清洗3次，55℃烘干48h至质量恒定，剪成1
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2cm的碎片；
[0034]S13，将剪碎后的紫茉莉凋落叶碎片与培养了紫茉莉的含Cd土本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法，包括如下步骤：S1、制备紫茉莉凋落叶腐解液，备用；S2、初步确定影响S1紫茉莉凋落叶腐解液中酚酸含量的关键因子；S3、根据自然生长紫茉莉环境的关键因子，设计多因素多水平实验方案，进行模拟实验，得到各关键因子主效应及交互作用；S4、采用高效液相色谱法测定模拟实验中的酚酸含量数据，验证关键因子是否显著提高紫茉莉凋落叶的腐解液中酚酸的含量，并得到关键因子的最优参数组合。2.根据权利要求1所述的一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法，其特征在于，步骤S1中，所述紫茉莉凋落叶腐解液的制备步骤为：S11,收集培养了90天后自然枯落的紫茉莉凋落叶；S12，将采集紫茉莉凋落叶用蒸馏水清洗3次，55℃烘干48h至质量恒定，剪成1
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2cm的碎片；S13，将剪碎后的紫茉莉凋落叶碎片与培养了紫茉莉的含Cd土壤及蒸馏水以(植株：土壤：纯水＝1：1：10)(w:w:v)混合于锥形瓶中，置于人工气候箱内25℃恒温避光腐解，每个处理浓度重复4次；S14，分别称取10g腐解物，装入锥形瓶中，加100mL蒸馏水在25℃温度的摇床上，120r
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1振荡浸提24h；S15，经纱布和定性滤纸过滤后取收集液即为100g
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1的紫茉莉腐解液，之后用0.45μm针式滤头过滤，用于化感物质酚酸的检测，4℃冰箱保存备用。3.根据权利要求1所述的一种紫茉莉凋落叶腐解液中提取酚酸的方法，其特征在于，步骤S3中，所述多因素实验设计步骤为：在单因素基础上，以综合评分为指标，选取温度、腐解时间、pH,3个因素，每个因素选取3个水平，进行L9(34)正交试验，碱性腐解液用0.1mol
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1的NaOH调pH到9，酸性腐解液用0.1...
【专利技术属性】
技术研发人员：李启婷，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：
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