一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒，所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒包括样本稀释液、包被磁珠、抗体标记、洗液、预激发液、激发液和标准品，所述包被磁珠的表面结合有生物素标记的乙肝e抗体，所述抗体标记为吖啶酯标记的乙肝e抗体，所述预激发液为含双氧水的硝酸溶液，所述激发液为氢氧化钠溶液。可实现快速检测乙肝e抗原，在保持良好性能的同时，大约10分钟便可获得结果检测结果。分钟便可获得结果检测结果。分钟便可获得结果检测结果。

【技术实现步骤摘要】
一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于检测试剂盒
，涉及一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒，具体是一种基于吖啶酯化学发光法的乙型肝炎E抗原检测试剂盒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]我国的乙型肝炎病毒(HBV)携带者众多，对乙肝的诊断和检测长期以来都备受重视。对于乙型肝炎的检测，通常涉及五个项目，其中包括乙型肝炎病毒e抗原(简称乙肝e抗原，HBeAg)。乙肝e抗原通常与其他项目一起检测，是诊断乙肝大三阳(乙型肝炎病毒表面抗原阳性、乙型肝炎病毒e抗原阳性和乙型肝炎病毒核心抗体阳性)的重要指标之一，可有效反应乙肝患者体内病毒复制的活跃程度，是治疗阶段的重要参考指标。
[0003]目前常见的乙肝e抗原检测方法主要有酶联免疫法(Enzyme Immunoassay，EIA)、化学发光免疫分析法(Chemiluminesent Immunoassay，CLIA)和电化学发光(Electrogenerated Chemiluminescene，ECL)，这三种方法均是基于抗原抗体的免疫反应，使用不同的标记物和荧光检测方法得到相应的结果。其中，CLIA技术有着灵敏度高、线性范围广、更于实现自动化等特点而被广泛使用。
[0004]虽然化学发光免疫分析法(CLIA)目前得到普遍应用，但市面上仍主要使用基于板式CLIA的试剂盒。如申请号为200610030783.3的中国专利技术专利公开了一种检测血清中乙肝病毒核心抗原的酶联免疫测定试剂盒及其使用方法。该试剂盒的主要组分为：单克隆乙肝核心抗体预包被的微孔板、样本处理剂、辣根过氧化物酶标记的多克隆乙肝核心抗体。在使用时，将待检样本用样本处理剂预处理后，加到单克隆乙肝核心抗体预包被的微孔板中，加入酶标多克隆乙肝核心抗体，加入底物显色，再加终止液终止反应，最后比色测定结果。板式CLIA试剂盒仍采用酶促反应，以辣根酶或碱性磷酸酶交联抗体，检测动态发光，导致检测信号值衰减较快、高浓度和低浓度信号衰减不一致，限制了其在定量分析中低端检测的灵敏度、稳定性和重复性。

技术实现思路

[0005]针对上述现有技术存在的缺陷，本专利技术提供一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒。
[0006]为了达成上述目的，本专利技术提供一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒，所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒包括样本稀释液、包被磁珠、抗体标记、洗液、预激发液、激发液和标准品，
[0007]所述包被磁珠的表面结合有生物素标记的乙肝e抗体，
[0008]所述抗体标记为吖啶酯标记的乙肝e抗体，
[0009]所述预激发液为含双氧水的硝酸溶液，
[0010]所述激发液为氢氧化钠溶液。
[0011]优化地，所述包被磁珠的制备方法包括以下步骤：
[0012](a1)抗体透析：用第一PBS缓冲液将乙肝e抗体原料调整至所需的第一浓度，随后进行透析得第一e抗体溶液；
[0013](a2)包被抗体：按比例将所述第一e抗体溶液与水溶性生物素进行混合、振荡反应，随后用第二PBS缓冲液进行透析得生物素标记e抗体溶液；
[0014](a3)包被磁珠：将所述生物素标记e抗体溶液与SA磁珠进行混合、振荡反应，清洗后得包被磁珠。
[0015]优化地，所述抗体标记的制备方法包括以下步骤：
[0016](b1)抗体透析：用第三PBS缓冲液将乙肝e抗体原料调整至所需的第二浓度，随后进行透析得第二e抗体溶液；
[0017](b2)标记抗体：按比例将所述第二e抗体溶液和吖啶酯进行混合、振荡反应得标记e抗体溶液；
[0018](b3)纯化：将所述标记e抗体溶液用层析柱进行纯化得吖啶酯标记的乙肝e抗体。
[0019]优化地，所述样本稀释液为Tris
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HCl缓冲液且混合有吐温和防腐剂，所述洗液为Tris
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HCl缓冲液且混合有吐温和防腐剂；所述吐温为选自吐温20、吐温40、吐温60 和吐温80中的一种或多种组成的混合物，其浓度为0.1～1ml/L；所述防腐剂为选自叠氮钠、庆大霉素和硫柳汞中的一种或多种组成的混合物，其浓度为5～15ml/L。
[0020]优化地，所述预激发液中双氧水的浓度为5～10ml/L，硝酸的浓度为5～10ml/L；所述激发液中氢氧化钠的浓度为5～10ml/L。
[0021]优化地，所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒还包括盒组件和磁棒组件，所述盒组件包括盛液单元以及形成在所述盛液单元任一侧面上的盒本体，所述盛液单元包括相互独立的至少一个稀释液盛槽、磁珠盛槽、稀释样本盛槽、标记抗体盛槽、至少一个洗液盛槽和预激发液盛槽，所述磁棒组件包括套管以及可插入所述套管内用于吸附磁珠的磁棒。
[0022]进一步地，所述盒组件还包括设置在所述稀释样本盛槽和所述标记抗体盛槽之间的第一空白槽以及设置在所述洗液盛槽和所述预激发液盛槽之间的第二空白槽)。
[0023]本专利技术的目的在于提供一种上述乙型肝炎E抗原检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0024](a)分别配制样本稀释液、洗液、预激发液和激发液；
[0025](b)用指定浓度乙肝e抗原的冻干品作为标准品；
[0026](c)将生物素标记的乙肝e抗体结合至磁珠的表面获得包被磁珠；
[0027](d)利用吖啶酯标记乙肝e抗体获得抗体标记。
[0028]本专利技术的再一目的在于提供一种上述乙型肝炎E抗原检测试剂盒的应用，包括以下步骤：
[0029](S1)将含乙型肝炎e抗原的待测样本加入样本稀释液中进行稀释得样本稀释溶液；
[0030](S2)使所述样本稀释溶液与包被磁珠通过免疫反应结合，稀释后得磁珠e抗体溶液；
[0031](S3)将所述磁珠e抗体溶液与抗体标记进行反应，洗涤后得磁珠e抗体/吖啶酯抗体复合物；
[0032](S4)将所述磁珠e抗体/吖啶酯抗体复合物加入预激发液进行反应，随后加入激发液进行反应，并检测化学发光反应的发光值。
[0033]优化地，还包括以下步骤：(S5)还利用校准品、定标卡对获得的所述发光值进行处
理
[0034]本专利技术乙型肝炎E抗原检测试剂盒，通过采用包被磁珠和吖啶酯标记的乙肝e抗体进行配合，具有优异的灵敏度和特异性；可基于现有的SuperFlex平台，实现快速检测乙肝e抗原，在保持良好性能的同时，大约10分钟便可获得结果检测结果。与现有技术如ELISA相比，有着更加优异的性能(如入灵敏度、特异性、精密性、线性范围、稳定性、抗干扰、抗携带污染、检测时间等性能)。
附图说明
[0035]图1为本专利技术型肝炎E抗原检测试剂盒的示意图。
[0036]图2为本专利技术型肝炎E抗原检测试剂盒的使用状态图。
[0037]图3为本专利技术型肝炎E抗原检测试剂盒的原理图。
[0038]图4为本专利技术型肝炎E抗原检测试剂盒中包被磁珠的制备流程图。
[0039]图5为本专利技术型肝炎E抗原检测试剂盒中抗体标记的制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于：所述乙型肝炎E抗原检测试剂盒包括样本稀释液、包被磁珠、抗体标记、洗液、预激发液、激发液和标准品，所述包被磁珠的表面结合有生物素标记的乙肝e抗体，所述抗体标记为吖啶酯标记的乙肝e抗体，所述预激发液为含双氧水的硝酸溶液，所述激发液为氢氧化钠溶液。2.根据权利要求1所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于，所述包被磁珠的制备方法包括以下步骤：（a1）抗体透析：用第一PBS缓冲液将乙肝e抗体原料调整至所需的第一浓度，随后进行透析得第一e抗体溶液；（a2）包被抗体：按比例将所述第一e抗体溶液与水溶性生物素进行混合、振荡反应，随后用第二PBS缓冲液进行透析得生物素标记e抗体溶液；（a3）包被磁珠：将所述生物素标记e抗体溶液与SA磁珠进行混合、振荡反应，清洗后得包被磁珠。3.根据权利要求1所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于，所述抗体标记的制备方法包括以下步骤：（b1）抗体透析：用第三PBS缓冲液将乙肝e抗体原料调整至所需的第二浓度，随后进行透析得第二e抗体溶液；（b2）标记抗体：按比例将所述第二e抗体溶液和吖啶酯进行混合、振荡反应得标记e抗体溶液；（b3）纯化：将所述标记e抗体溶液用层析柱进行纯化得吖啶酯标记的乙肝e抗体。4.根据权利要求1所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液为Tris
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HCl缓冲液且混合有吐温和防腐剂，所述洗液为Tris
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HCl缓冲液且混合有吐温和防腐剂；所述吐温为选自吐温20、吐温40、吐温60和吐温80中的一种或多种组成的混合物，其浓度为0.1~1ml/L；所述防腐剂为选自叠氮钠、庆大霉素和硫柳汞中的一种或多种组成的混合物，其浓度为5~15ml/L。5.根据权利要求1所述的乙型肝炎E抗原检测试剂盒，其特征在于：所述预激发液中双氧水的浓度为5~10ml/L，硝酸的浓度为5~10ml/L；...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡星海，胥萍，黄加喜，徐俊驰，张巍，陈慧，马丽玲，吴敏娟，朱启泰，陈苏芳，杭茵，
申请(专利权)人：苏州市第五人民医院，
类型：发明
国别省市：