本发明专利技术提供了一种用于犬基因分型的引物组、检测体系、试剂盒及其应用。所述引物组所选用的29个犬STR基因座，均具有良好的遗传多态性、等位基因频率分布均衡、突变率低、个体识别能力强；Amel犬性别鉴定基因座，可准确判定犬只的性别。含有所述引物组的多重扩增体系能够有效应用于犬个体识、亲权鉴定、遗传育种、犬DNA数据库建设以及涉犬案件鉴定。检材适用范围广泛，不仅适用于犬类血液、组织、唾液、毛发等提取DNA模板，还能对血斑、血滤纸等进行免提取扩增与检测，大大简化操作流程、节省时间与试剂成本。试剂成本。试剂成本。
【技术实现步骤摘要】
一种用于犬基因分型的引物组、检测体系、试剂盒及其应用
[0001]本专利技术属于基因检验方法
，具体涉及一种用于犬基因分型的引物组、检测体系、试剂盒及其应用。
技术介绍
[0002]短串联重复序列(Short Tandem Repeat，STR)，是均匀分布于真核生物基因组、由2
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6个碱基作为核心单位构成的串联重复DNA序列。由于STR核心序列的重复次数在不同个体间呈现高度变异性，因此广泛应用于法医学个体识别、亲权鉴定、遗传育种及群体遗传学分析等领域。
[0003]犬与人类生活关系密切，有越来越多的民事或刑事案件与犬相关。犬STR遗传标记多态性分析是一种先进的DNA检测技术手段，能够有效进行犬个体识别与亲权鉴定，不仅在犬只管理DNA档案数据库建立方面发挥重要作用，还有助于遗传育种、亲代确认，甚至为涉犬纠纷提供鉴定依据。
[0004]目前针对犬的STR分型检测试剂能够检测16
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23个位点，其包含的STR位点数量较少、能够提供的遗传信息量有限，累计个体识别率较低，有待进一步改进。
技术实现思路
[0005]本专利技术目的在于提供一种用于犬基因分型的引物组、检测体系、试剂盒及其应用，以解决现有技术中所存在的一个或多个技术问题，提供至少一种有益的选择或创造条件。
[0006]本专利技术第一方面提供了一套引物组。所述引物组包括30对引物对，各引物对分别能够特异性扩增29个犬STR基因座和1个Amel犬性别鉴定基因座。所述犬STR基因座分别为PEZ21、PEZ2、FH2010、PEZ5、PEZ12、VGL0910、FH2054、PEZ3、PEZ6、PEZ8、VGL3112、VGL1063、VWFX、VGL3235、FH2132、PEZ1、PEZ20、PEZ15、FH2079、PEZ17、FH3313、FH2328、FH2088、FH2001、VGL3438、FH2017、VGL2009、FH2611和FH2107。29个犬STR基因座的具体信息如表1所示。
[0007]表1各基因座信息
[0008][0009]在本专利技术的一些实施方式中，对应扩增犬STR基因座和Amel犬性别鉴定基因座的引物序列如表2所示。
[0010]表2引物序列及对应浓度
[0011][0012][0013]具体地，所述每一对引物对均是依据不同基因座核心序列的侧翼保守区域设计，保证扩增高效性与准确性，使得所述引物组在进行多重扩增反应时，不同引物之间不会产生强烈的二聚体、交叉反应或非特异性扩增产物。
[0014]本专利技术第二方面提供了一个多重扩增体系。所述多重扩增体系包括上述的引物组。
[0015]经过优化试验，所述多重扩增体系中各引物的终浓度如表2所示。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，各引物对中至少有一条引物的5
’
端具有荧光染料标记。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，将所述29个犬STR基因座和1个Amel犬性别鉴定基因座分为五组，每组具有相同的荧光染料标记，各组的荧光染料标记互不相同。
[0018]为避免不同基因座扩增产物出峰位置的重叠，保证多重扩增体系中所有基因座分型结果的准确性，在充分考虑各个基因座扩增产物片段的长度范围之后，对30个基因座进行精心合理地分组与排布；具体地，将特异性扩增PEZ21、PEZ2、FH2010、PEZ5、PEZ12、VGL0910基因座的引物对放在第一组，将特异性扩增Amel、FH2054、PEZ3、PEZ6、PEZ8、VGL3112基因座的引物对放在第二组，将特异性扩增VGL1063、VWFX、VGL3235、FH2132、PEZ1基因座的引物对放在第三组，将特异性扩增PEZ20、PEZ15、FH2079、PEZ17、FH3313、FH2328基
因座的引物对放在第四组，将特异性扩增FH2088、FH2001、VGL3438、FH2017、VGL2009、FH2611、FH2107基因座的引物对放在第五组。
[0019]在优选的实施方式中，所述第一组的荧光染料标记为6
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FAM，所述第二组的荧光染料标记为HEX，所述第三组的荧光染料标记为TAMRA，所述第四组的荧光染料标记为ALEXA 568，所述第五组的荧光染料标记为ALEXA 594。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述多重扩增体系的反应总体积为25μL，包括2.5
×
PCR Master Mix 10.0μL，Primers Mix 5.0μL，基因模板0.5～2.0ng，余量由灭菌水补足。所述2.5
×
PCR Master Mix包含PCR反应缓冲液、MgCl2、dNTPs、DNA聚合酶等。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述多重扩增体系的扩增程序为：预变性，95℃持续2min；94℃持续30s，60℃持续120s，重复30个循环；终延伸，60℃持续60min；4℃保温维持。所得扩增产物的长度均为500bp以内。
[0022]本专利技术第三方面提供了一种试剂盒。所述试剂盒包括上述的多重扩增体系。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒还包括犬阳性对照DNA模板、灭菌水、等位基因分型标准物及荧光分子量标准品等试剂。
[0024]本专利技术第四方面提供了将上述引物组、多重扩增体系或试剂盒在犬个体识别和/或亲权鉴定的基因分型中的应用。
[0025]本专利技术的有益效果：
[0026]本专利技术所提供的引物组、多重扩增体系及试剂盒，可用于实现单管扩增30个犬DNA基因座，远超现有其他同类型多重扩增体系或试剂盒的上限，是目前存在的包含犬STR基因座数目最多的鉴定系统。所述引物组所选用的29个犬STR基因座，均具有良好的遗传多态性、等位基因频率分布均衡、突变率低、个体识别能力强；Amel犬性别鉴定基因座，可准确判定犬只的性别。含有所述引物组的多重扩增体系能够有效应用于犬个体识、亲权鉴定、遗传育种、犬DNA数据库建设以及涉犬案件鉴定。检材适用范围广泛，不仅适用于犬类血液、组织、唾液、毛发等提取DNA模板，还能对血斑、血滤纸等进行免提取扩增与检测，大大简化操作流程、节省时间与试剂成本。
附图说明
[0027]图1是所述试剂盒遗传标记基因座排布图；
[0028]图2是PEZ1位点多对候选引物的筛选测试结果；
[0029]图3是根据实施例4所示的等位基因标准物(Allelic Ladder)分型图；
[0030]图4是实施例5所述检测体系的灵敏度实验结果；
[0031]图5是实施例5所述检测体系的抗抑制能力实验结果；
[0032]图6是实施例6所述亲子鉴定案例中父犬样本的检测图谱；
[0033]图7是实施例6所述亲子鉴定案例中幼犬样本的检测图谱。
具体实施方式
[0034]下面将结合具体实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.引物组，其特征在于，包括能够特异性扩增29个犬STR基因座和1个Amel犬性别鉴定基因座的30对引物对，所述犬STR基因座分别为PEZ21、PEZ2、FH2010、PEZ5、PEZ12、VGL0910、FH2054、PEZ3、PEZ6、PEZ8、VGL3112、VGL1063、VWFX、VGL3235、FH2132、PEZ1、PEZ20、PEZ15、FH2079、PEZ17、FH3313、FH2328、FH2088、FH2001、VGL3438、FH2017、VGL2009、FH2611、FH2107。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，扩增PEZ21的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；扩增PEZ2的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；扩增FH2010的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；扩增PEZ5的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示；扩增PEZ12的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；扩增VGL0910的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示；扩增Amel的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示；扩增FH2054的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示；扩增PEZ3的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.17和SEQID NO.18所示；扩增PEZ6的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示；扩增PEZ8的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示；扩增VGL3112的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示；扩增VGL1063的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示；扩增VWFX的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28所示；扩增VGL3235的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30所示；扩增FH2132的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32所示；扩增PEZ1的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.33和SEQ ID NO.34所示；扩增PEZ20的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.35和SEQ ID NO.36所示；扩增PEZ15的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.37和SEQ ID NO.38所示；扩增FH2079的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.39和SEQ ID NO.40所示；扩增PEZ17的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.41和SEQID NO.42所示；扩增FH3313的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.43和SEQ ID NO.44所示；扩增FH2328的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.45和SEQ ID NO.46所示；扩增FH2088的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48所示；扩增FH2001的引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.49和SEQ ID NO.50...
【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，
申请(专利权)人：郑阳阳，
类型：发明
国别省市：
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