一种调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10及其应用，其中，功能基因PaYUC10的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；或者该功能基因PaYUC10是由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白的编码基因。利用上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10调控果实的耐贮性。本发明专利技术中功能性PaYUC10基因可用于不耐贮藏果实的品种改良。品种改良。品种改良。

【技术实现步骤摘要】
一种调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10及其应用


[0001]本专利技术涉及果实耐贮
具体地说是一种调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10及其应用。

技术介绍

[0002]杏(Prunus armeniaca)是蔷薇科的多年生木本植物，是世界重要的经济作物。杏果实富含糖类、有机酸、类胡萝卜素和多酚，对人体十分有益，具有巨大的市场发展潜力。杏果实普遍具有不耐贮藏的特点，这严重影响了杏果的贮运和销售。杏是一种呼吸跃变型果实，商业采收后呼吸速率突然升高，出现一个呼吸高峰，达到成熟进而快速衰老，失去商品价值。开发能够抑制杏果实采后呼吸强度、延长耐贮藏时间的功能基因，从而为耐贮藏杏品种的选育打下基础，具有重大意义。YUC10基因在杏果实中的表达模式和功能作用尚不清楚，对调控果实呼吸强度引起贮藏时间的改变鲜少有人报道。

技术实现思路

[0003]为此，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10及其应用，以调控不耐贮藏果实的耐贮藏性。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]一种调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10，功能基因PaYUC10的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；或者功能基因PaYUC10是由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白的编码基因。
[0006]一种调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，利用上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10调控果实的耐贮性。
[0007]上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，先将功能基因PaYUC10插入到超表达载体上组成重组质粒，再将重组质粒转化农杆菌，最后利用重组质粒转化的农杆菌侵染不耐贮藏果实的植株，使其在植株中过量表达。
[0008]上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，包括如下步骤：
[0009]步骤(1)、利用高保真酶进行PCR反应构建重组质粒pCambia2301
‑
PaYUC10；
[0010]步骤(2)、利用重组质粒pCambia2301
‑
PaYUC10对农杆菌进行转化，得到转化农杆菌：
[0011]步骤(3)、先对不耐贮藏植株的外植体进行预培养；然后将预培养后的外植体放入倒有转化农杆菌的培养皿中进行转化培养，转化培养结束后将外植体重新转移预培养基中进行共培养；共培养结束后将外植体转入筛选培养基中进行选择培养，形成愈伤组织和/或不定芽；
[0012]步骤(4)将愈伤组织继代培养得到的幼芽或不定芽转接到生根培养基上，培养得到完整植株。
[0013]上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，步骤(1)中，高保真酶为KOD
‑
401
高保真酶。
[0014]上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，步骤(3)中，外植体为真叶、子叶或下胚轴。
[0015]上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，步骤(3)中，真叶和子叶均切去叶尖及叶柄，其余部分则切成0.5cm
×
0.5cm大小的叶块；下胚轴切成长度0.5～0.6mm的切段，水平放置于预培养基上，每个预培养基中放置15～20片；预培养时间为1天；
[0016]培养皿中转化农杆菌的浓度在OD600值为0.4～0.6，转化培养的时间为30min；共培养时间为1～2天。
[0017]上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，步骤(4)中，当幼芽长至0.8～1.2cm时，转接到生根培养基中培养。
[0018]上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，超表达载体为pCambia2301，农杆菌菌株为GV3101。
[0019]上述调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，不耐贮藏果实的植株为番茄植株。
[0020]本专利技术的技术方案取得了如下有益的技术效果：
[0021]1、本专利技术从
‘
珍珠油杏
’
中克隆得到功能基因PaYUC10，通过测定PaYUC10在果实贮藏期间的表达情况发现该功能基因的表达量比不耐贮藏品种高，功能基因PaYUC10可能参与果实呼吸强度的调控，由于呼吸强度可对果实成熟与衰老产生影响，对其品种改良具有重要意义。
[0022]2、本专利技术构建了功能基因PaYUC10的超量表达载体pCambia2301
‑
PaYUC10，通过根癌农杆菌介导异源转化番茄，成功获得PaYUC10基因超量表达转基因阳性株系，对转基因阳性番茄和阴性植株果实进行贮藏时间测试和呼吸强度测试发现，转基因系的呼吸强度降低，贮藏时间延长。因此，PaYUC10基因可用于不耐贮藏果实的品种改良。
附图说明
[0023]图1本专利技术实施例中PaYUC10基因在珍珠油杏和金太阳中的表达量随贮藏时间的变化示意图；
[0024]图2本专利技术实施例中构建的PaYUC10基因的超量表达载体pCambia2301
‑
PaYUC10的图谱；
[0025]图3本专利技术实施例中构建的PaYUC10基因的超量表达载体pCambia2301
‑
PaYUC10的MCS区序列；
[0026]图4本专利技术实施例中PaYUC10转化番茄植株DNA水平的阳性鉴定结果示意图；
[0027]图5本专利技术实施例中PaYUC10转化番茄果实和对照组番茄果实的储藏情况对比图；
[0028]图6本专利技术实施例中PaYUC10转化番茄果实和对照组番茄果实储藏期间呼吸强度变化曲线图。
具体实施方式
[0029]本实施例分别以耐贮存杏(
‘
珍珠油杏
’‑
ZZYX)与不耐贮存杏(
‘
金太阳
’‑
JTY)为研究对象，进行采后生理测定和转录组学分析，结果获得一个候选基因PaYUC10。该PaYUC10基
因是从杏品种
‘
珍珠油杏
’
中克隆得到的，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；PaYUC10基因编码的蛋白，命名为PaYUC10蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0030]SEQ ID No.1的核苷酸序列如下：
[0031]atgatgtcccatcccttccgaacctccattttcatgtcgaaagacgacttcattcgttacctggacgagtacgtggccaggttcaacgtgaaccctcgctactgcagtgacgtggaggaggctgtttacgatgaagaggaagccaagtggagggtgacagtgaaagacaccgcttccgggacggtgtatgagatcgcatcggatttcttggtggttgcaactggagaaaatagccagccttttctccccagcgacttgcctgg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10，其特征在于，功能基因PaYUC10的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；或者功能基因PaYUC10是由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白的编码基因。2.一种调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，其特征在于，利用如权利要求1所述的调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10调控果实的耐贮性。3.根据权利要求2所述的调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，其特征在于，先将功能基因PaYUC10插入到超表达载体上组成重组质粒，再将重组质粒转化农杆菌，最后利用重组质粒转化的农杆菌侵染不耐贮藏果实的植株，使其在植株中过量表达。4.根据权利要求2所述的调控果实耐贮性的功能基因PaYUC10的应用，其特征在于，包括如下步骤：步骤(1)、利用高保真酶进行PCR反应构建重组质粒pCambia2301
‑
PaYUC10；步骤(2)、利用重组质粒pCambia2301
‑
PaYUC10对农杆菌进行转化，得到转化农杆菌：步骤(3)、先对不耐贮藏植株的外植体进行预培养；然后将预培养后的外植体放入倒有转化农杆菌的培养皿中进行转化培养，转化培养结束后将外植体重新转移预培养基中进行共培养；共培养结束后将外植体转入筛选培养基中进行选择培养，形成愈伤组织和/或不定芽；步骤(4)将愈伤...

【专利技术属性】
技术研发人员：乌云塔娜，王楚，朱绪春，黄梦真，尹明宇，邵世庚，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院经济林研究所，
类型：发明
国别省市：