本发明专利技术公开了一种诺卡氏菌核酸保守双管家基因，该诺卡氏菌核酸保守双管家基因为16S rDNA和topA，topA管家基因包括topA全长基因topAQ和topA核心鉴定片段topAH，三个基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：7～9所示，还公开了用于扩增诺卡氏菌核酸保守双管家基因的引物，引物包括16S rDNA引物、topAQ引物和topAH引物，三对引物的上、下游序列依次如SEQ ID NO：1～6所示。该双管家基因和引物可先后有效区分诺卡氏菌种间和种内的差异，有效缩短中间鉴定步骤，大大提高鉴定的准确率。还公开了上述引物及含有所述引物的试剂盒在制备具有检测诺卡氏菌病效果的药物中的应用。卡氏菌病效果的药物中的应用。卡氏菌病效果的药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
一种诺卡氏菌核酸保守双管家基因、引物和应用
[0001]本专利技术属于诺卡氏菌检测
，具体涉及一种诺卡氏菌核酸保守双管家基因、用于扩增所述诺卡氏菌核酸保守双管家基因的引物和应用。
技术介绍
[0002]“生鱼”可指乌鳢，俗称黑鱼。生鱼因个体大、生长快、产量和经济价值较高等特点，在我国南方地区，生鱼一向被视为病后康复和体虚者的滋补珍品。近年，随着国内养殖业的发展和国外贸易需要，生鱼渐成为产销两旺的特种养殖品种，生鱼的养殖技术已引起人们的广泛关注和重视。随着生鱼养殖业的发展，据不完全统计，2021年，全国生鱼养殖总产量约70万吨，广东约占比60％，其中，顺德、中山、江门、清远等珠三角地区养殖量就达40万吨。众所周知，苗种培育是水产动物人工繁殖的关键阶段，对于大多数鱼类而言，仔鱼期被认为是整个养殖周期中最关键的阶段，生鱼苗种培育尤其如此。即使在养殖水平最高的顺德区域，苗种培育成活率平均仅为2成。其中，水体病原增多、疾病爆发等是造成生鱼苗存活率低的主要限制因素之一，严重制约了生鱼苗种繁育产业的发展。
[0003]诺卡氏菌病是一种典型危害严重的慢性细菌病，近年来在我国南方如广东、福建和浙江等省有大范围蔓延趋势，危害日益严重，多发于大乌醴、口黑鲈、斑醴等大宗养殖品种。有人认为此病的流行与养殖大环境、养殖密度、投喂饵料、鱼种质量、滥用药物均有很大关系。目前暂无较好药物控制，水产病害防治单位及养殖户应引起重视。早期诊断，及早发现鱼苗期的诺卡氏菌隐性感染，实施早期的卫生管理和药物预防是该病防治的关键。
[0004]管家基因，是指所有细胞中均要稳定表达的一类基因，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的。因此，利用管家基因进行菌种鉴定已被广泛应用于生物鉴定领域，并展现出良好的应用前景。目前，在菌种鉴定领域中常见的管家基因为16S rDNA，但16S rRNA序列非常保守，一般仅能在种以上水平区分，种下水平很难区分，即便是亚种也较难区分。因此，利用16S rRNA进行菌种鉴定时，需要结合菌落形态观察和伯杰士手册生理生化特征来进行最终的菌种确定，且常出现分类错误的现象发生，为后续的疾病的合理预防、科学的处理提供了错误的信息参考，错过了最佳的处置时机，导致严重的后果。
技术实现思路
[0005]本专利技术目的在于提供一种诺卡氏菌核酸保守双管家基因，该双管家基因具有种内和种间双重鉴定的特点。
[0006]本专利技术的目的还在于提供一种用于扩增诺卡氏菌核酸保守双管家基因的引物，该引物具有高度的结合性和特异性，能够与诺卡氏菌核酸管家基因特异性结合，可先后有效区分诺卡氏菌种间和种内的差异，有效缩短中间鉴定步骤，并大大提高了鉴定的准确率。
[0007]本专利技术的目的还在于提供上述引物在制备具有检测诺卡氏菌病效果的药物中的应用。
[0008]为实现上述第一目的，本专利技术采用以下技术方案：一种诺卡氏菌核酸保守双管家
基因，所述双管家基因为16S rDNA和topA管家基因，所述topA管家基因包括topA全长基因topAQ和topA核心鉴定片段topAH，所述16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述topA全长基因topAQ的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述topA核心鉴定片段topAH的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示。
[0009]为实现上述第二目的，本专利技术采用以下技术方案：一种用于扩增上述诺卡氏菌核酸保守双管家基因的引物，所述引物包括用于扩增16S rDNA管家基因的16S rDNA引物、用于扩增topA全长基因topAQ的topAQ引物和用于扩增topA核心鉴定片段topAH的topAH引物，其中所述16S rDNA引物、topAQ引物和topAH引物的上、下游序列依次如SEQ ID NO：1～6所示。
[0010]具体的：
[0011]16S rDNA引物：
[0012]16S
‑
F：TCAACGGAGAGTTTGATCCTGG(SEQ ID NO：1所示)；
[0013]16S
‑
R：AAAGGAGGTGATCCAGCCG(SEQ ID NO：2所示)；
[0014]topAQ引物：
[0015]topAQ
‑
F：GTGATTGTCGAGTCGCCGACGAAGG(SEQ ID NO：3所示)；
[0016]topAQ
‑
R：TCAGGACTTGGCCGCGGCGGCGGTC(SEQ ID NO：4所示)。
[0017]topAH引物：
[0018]topAH
‑
F：TGGTGGGCGAACGGCTCGACGGCAT(SEQ ID NO：5所示)；
[0019]topAH
‑
R：TCAGGACTTGGCCGCGGCGGCGGTC(SEQ ID NO：6所示)。
[0020]本专利技术通过体外筛选技术从16S rDNA、merB、rctB、rpoD、topA和topR基因中筛选获得诺卡氏菌核酸保守双管家基因16S rDNA和topA，并根据诺卡氏菌核酸保守双管家基因16S rDNA和topA设计并筛选获得了上述特异性引物。
[0021]本专利技术中的双管家基因具有种内和种间双重鉴定的特点，特异性引物具有高度的结合性和特异性，能够与诺卡氏菌核酸管家基因特异性结合，具有快速、简单、便捷、准确、快速、低成本等特点。
[0022]本专利技术还提供了一种用于检测诺卡氏菌的试剂盒，含有上述引物。
[0023]为实现上述第三目的，本专利技术采用以下技术方案：上述引物或试剂盒在制备具有检测诺卡氏菌病效果的药物中的应用。
[0024]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0025](1)本专利技术筛选的两组管家基因可先后有效区分种间和种内的差异，相较于现有方法，无需再利用形态学观察和伯杰士手册生理生化特性鉴定便可直接鉴定到种，有效缩短了中间鉴定步骤，并大大提高了鉴定的准确率；
[0026](2)本专利技术具有快速、简单、便捷、准确、成本低等特点，在对病原微生物的检测及鉴定中能够发挥出巨大的应用作用，具有巨大的应用潜力。
附图说明
[0027]图1是实施例1中获得的可有效区分种内和种间的保守管家基因扩增序列；
[0028]图2是实施例1中扩增产物的0.8％的琼脂糖凝胶电泳分析结果；
[0029]图3是实施例2中16S rDNA序列比对结果显示；
[0030]图4是实施例2中通过topAQ序列比对结果显示；
[0031]图5实施例2中通过通过topAH序列比对结果显示。
具体实施方式
[0032]下面结合具体实施例详细说明本专利技术的技术方案，以便本领域技术人员更好理解和实施本专利技术的技术方案。实施例中所用试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
[0033]实施例1
[0034]本实施例提供的用于扩增诺卡本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种诺卡氏菌核酸保守双管家基因，其特征是：所述双管家基因包括16S rDNA和topA管家基因，所述topA管家基因包括topA全长基因topAQ和topA核心鉴定片段topAH，所述16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述topA全长基因topAQ的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述topA核心鉴定片段topAH的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示。2.一种用于扩增权利要求1所述诺卡氏菌核酸保守双管家基因的引物，其特征是：...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘广鑫，周金桃，郭志勋，马红玲，程长洪，江建军，
申请(专利权)人：珠海市源润水产科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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