一种葡萄糖检测试纸条及其制备方法、应用技术

本发明专利技术提供一种葡萄糖检测试纸条及其制备方法、应用。本发明专利技术的葡萄糖检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：取五水硫酸铜、磷酸盐缓冲溶液、葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶，混合均匀，得到含酶的混合溶液；将试纸条浸泡在所述含酶的混合溶液中，反应后，获得有机

【技术实现步骤摘要】
一种葡萄糖检测试纸条及其制备方法、应用


[0001]本专利技术属于体外诊断试剂
，特别是指一种葡萄糖检测试纸条及其制备方法、应用。

技术介绍

[0002]葡萄糖含量是生化分析中常用的指标，经常用于各种疾病的诊断，例如糖尿病的诊断。基于试纸条的比色传感技术具有成本低，操作简单，检测快速等优点，在现场即时检测领域占比较大。然而，唾液葡萄糖的浓度往往很低，健康人约在5
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10mg/L的范围内，而糖尿病患者则在10mg/L以上。这对基于试纸条的比色传感器的灵敏度是一个重大挑战。
[0003]酶的有效固定是决定基于试纸条比色法传感器性能的关键因素。目前，酶的固定主要通过纯吸附、共价偶联以及聚合物包埋实现。然而，在固定化过程中，酶的构象易发生变化而降低酶的稳定性和活性；此外，在固体载体上的传质阻碍导致酶的催化效率大大降低，限制其在低浓度唾液葡萄糖中的应用。
[0004]目前，有机
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无机杂化纳米花(HNF)已被报道，因其无毒、易于制备和良好生物相容性而引起了广泛的关注。例如，以葡萄糖氧化酶(GOx)和辣根过氧化物酶(HRP)为有机组分，磷酸铜(Cu3(PO4)2)为无机组分合成了多酶共包覆的有机
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无机HNF，并进一步作为可视化检测葡萄糖的比色传感器。然而，传统检测葡萄糖的比色传感器通常是在溶液中使用HNF，需要多步离心、洗涤、干燥等步骤，可能导致酶从固体载体中漏出；此外，通过聚合物包埋法将大尺寸的HNF(通常≥4μm)固定在纸条上仍然面临固定效率低的问题，限制了其在低唾液葡萄糖监测中的应用。通过试纸负载HNF，获得的HNF很难具有完整的结构，且负载量低，导致了相对较长的响应时间(5min)和不理想的检测极限(18mg/L)，限制其快速检测低浓度的唾液葡萄糖。
[0005]鉴于此，目前亟待开发一种灵敏度高、制备工艺简单的葡萄糖试纸条。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种葡萄糖检测试纸条及其制备方法、应用，解决现有技术中的葡萄糖试纸条灵敏度低、制备工艺繁琐的技术问题。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种葡萄糖检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
[0009](1)取五水硫酸铜、磷酸盐缓冲溶液、葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶，搅拌使其充分溶解，得到含酶的混合溶液；将试纸条浸泡在所述含酶的混合溶液中，在25
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37℃条件下反应48
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72h，使得有机
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无机杂化纳米花在所述试纸条上原位生长，获得有机
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无机杂化纳米花负载的试纸条；
[0010](2)将步骤(1)中得到的所述有机
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无机杂化纳米花负载的试纸条依次在
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20℃条件下储存1
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8h，在30℃条件下干燥1
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4h，然后浸泡在含有显色剂、凝胶、牛血清白蛋白、聚乙二醇的混合溶液中12
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24h，得到葡萄糖检测试纸条；所述牛血清白蛋白和聚乙二醇的质量
比为1:1。
[0011]优选地，步骤(1)中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值范围为7.0～7.5。
[0012]优选地，步骤(1)中，所述辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、五水硫酸铜、磷酸盐缓冲溶液的质量比为1：(1～10)：(150～200)：(6000～7000)。
[0013]优选地，步骤(1)中，葡萄糖氧化酶的活性大于180U/mg，辣根过氧化物酶的活性大于300U/mg。
[0014]优选地，步骤(2)中，所述凝胶、牛血清白蛋白、显色剂的质量比为1：(0.5～2.5)：(5～10)。
[0015]优选地，步骤(2)中，所述显色剂为3,3,5,5
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四甲基联苯胺、2,4,6
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三溴
‑3‑
羟基苯甲酸的一种或多种。
[0016]优选地，步骤(2)中，所述凝胶为明胶、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇中的一种或多种。
[0017]优选地，步骤(2)中，所述凝胶的质量分数为20wt％～40wt％。
[0018]本专利技术还提供所述的葡萄糖检测试纸条的制备方法制备得到的葡萄糖检测试纸条。
[0019]本专利技术还提供所述的葡萄糖检测试纸条在体外诊断领域的应用。
[0020]本专利技术的上述方案至少包括以下有益效果：
[0021]一种葡萄糖检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：取五水硫酸铜、磷酸盐缓冲溶液、葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶，搅拌使其充分溶解，得到含酶的混合溶液；将试纸条浸泡在所述含酶的混合溶液中，在25
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37℃条件下反应48
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72h，使得有机
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无机杂化纳米花在所述试纸条上原位生长，获得有机
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无机杂化纳米花负载的试纸条；将所述有机
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无机杂化纳米花负载的试纸条依次在
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20℃条件下储存1
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8h，在30℃条件下干燥1
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4h，然后浸泡在含有显色剂、凝胶、牛血清白蛋白、聚乙二醇的混合溶液中12
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24h，得到葡萄糖检测试纸条；所述牛血清白蛋白和聚乙二醇的质量比为1:1。本专利技术所述葡萄糖检测试纸条的制备方法，取五水硫酸铜、磷酸盐缓冲溶液、葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶，搅拌使其充分溶解，得到含酶的混合溶液；将试纸条浸泡在所述含酶的混合溶液中，在25
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37℃条件下反应48
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72h，使得所述有机
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无机杂化纳米花在所述试纸条上原位生长，得到的所述有机
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无机杂化纳米花具有完整且致密的多孔结构；所述试纸条和所述有机
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无机杂化纳米花具有紧密的相互作用，提高了所述有机
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无机杂化纳米花在所述试纸条上的负载量，从而提高了所述葡萄糖检测试纸条的灵敏度，缩短了响应时间。将所述有机
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无机杂化纳米花负载的试纸条依次在
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20℃条件下储存1
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8h，在30℃条件下干燥1
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4h，然后浸泡在含有显色剂、凝胶、牛血清白蛋白、聚乙二醇的混合溶液中12
‑
24h，得到葡萄糖检测试纸条；所述牛血清白蛋白和聚乙二醇的质量比为1:1。其中，牛血清白蛋白具有疏水作用，可抵抗蛋白质的非特异性吸附；聚乙二醇来源广泛、廉价，可通过释放和置换结合水产生熵增，形成水合层，从而抵抗蛋白质的非特异性吸附；所述混合溶液中质量比为1:1的牛血清白蛋白和聚乙二醇具有协同作用，共同抵抗复杂生理环境中蛋白质等杂质的非特异性吸附，确保了所述葡萄糖检测试纸条对葡萄糖分子检测的准确性；葡萄糖分子在所述葡萄糖氧化酶的作用下产生过氧化氢，所述显色剂与所述过氧化氢在所述辣根过氧化物酶的催化下发生氧化反应，产生颜色变本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种葡萄糖检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取五水硫酸铜、磷酸盐缓冲溶液、葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶，搅拌使其充分溶解，得到含酶的混合溶液；将试纸条浸泡在所述含酶的混合溶液中，在25
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37℃条件下反应48
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72h，使得有机
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无机杂化纳米花在所述试纸条上原位生长，获得有机
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无机杂化纳米花负载的试纸条；(2)将步骤(1)中得到的所述有机
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无机杂化纳米花负载的试纸条依次在
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20℃条件下储存1
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8h，在30℃条件下干燥1
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4h，然后浸泡在含有显色剂、凝胶、牛血清白蛋白、聚乙二醇的混合溶液中12
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24h，得到葡萄糖检测试纸条；所述牛血清白蛋白和聚乙二醇的质量比为1:1。2.根据权利要求1所述的葡萄糖检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值范围为7.0～7.5。3.根据权利要求1所述的葡萄糖检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、五水硫酸铜、...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘大庆，章子峰，阎林胤，
申请(专利权)人：北京康宇建医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：