荧光探针MIFluo及荧光探针MIFluo-AM在金属离子检测中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种荧光探针MIFluo及荧光探针MIFluo

【技术实现步骤摘要】
荧光探针MIFluo及荧光探针MIFluo
‑
AM在金属离子检测中的应用


[0001]本专利技术涉及金属离子检测
，尤其是涉及一种荧光探针MIFluo及荧光探针MIFluo
‑
AM在金属离子检测中的应用。

技术介绍

[0002]锰元素作为人体必须的微量元素之一，是体内多种金属酶的核心元素。锰元素(Mn)/锰离子(Mn
2+
)在肿瘤治疗及肿瘤免疫治疗领域发挥着至关重要的作用。由于锰元素价态可变的性质使其可以发挥过氧化物酶、过氧化氢酶和氧化酶的类酶活性，利用肿瘤中特殊的微环境，在肿瘤中高效产生具有肿瘤损伤效果的活性氧，具有肿瘤催化治疗的应用前景。最近研究表明，缺锰小鼠体内的肿瘤生长异常快速且肺转移显著增多，当外源添加锰元素(Mn)/锰离子(Mn
2+
)则可有效激活人或小鼠细胞中的cGAS
‑
STING通路，刺激I型干扰素(IFNs)的产生，显著促进宿主抗原呈递细胞如进树突状细胞(DC)和巨噬细胞的成熟和对于肿瘤抗原的呈递，从而极大地辅助抗原的持久免疫原性。尽管锰元素/锰离子作为抗肿瘤免疫佐剂和纳米酶的效果在肿瘤治疗领域被广泛研究，锰离子在肿瘤细胞中的富集至关重要，但是，检测锰离子浓度的手段非常局限，以往的检测方法主要有比色法、原子吸收光谱法、电感耦合等离子体质谱法、催化光度法等，而这些方法往往存在样品制备步骤复杂、价格昂贵、仪器依赖等缺点，并且上述检测方法对有机样品检测要求很高且精度低，无法简便进行细胞内、组织内的锰离子检测。金属离子纳米材料被肿瘤细胞摄取及其在组织内的可视化，对于纳米材料在生命领域的研究尤为重要。但是目前市场上没有商品化的离子荧光检测试剂盒(除了镁离子、锌离子)，虽然镁离子、锌离子有荧光检测试剂盒，但是价格极其昂贵。
[0003]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一目的在于提供一种荧光探针MIFluo(Metal ions Fluo)在金属离子检测中的应用，以解决上述问题中的至少一种。
[0005]本专利技术的第二目的在于提供一种溶液中金属离子浓度的检测方法。
[0006]本专利技术的第三目的在于提供一种荧光探针MIFluo
‑
AM在细胞中金属离子检测中的应用。
[0007]本专利技术的第四目的在于提供一种细胞中金属离子的定性检测方法。
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种荧光探针MIFluo在金属离子检测中的应用，所述荧光探针MIFluo的结构式如下所示：
[0009][0010]其中，R为羟基、羧基或氢。
[0011]第二方面，本专利技术提供了一种溶液中金属离子浓度的检测方法，包括以下步骤：
[0012]a.将所述的荧光探针MIFluo与已知浓度的金属离子溶液混合，反应后，测定荧光强度，得到金属离子浓度与荧光强度的关系；
[0013]b.将所述的荧光探针MIFluo与待测溶液混合，反应后，测定荧光强度，根据a步骤得到的金属离子浓度与荧光强度的关系获得待测溶液中金属离子的浓度；
[0014]所述金属离子包括锰、锌、镁、镍、铁或钴。
[0015]作为进一步技术方案，所述荧光探针MIFluo为荧光探针MIFluo溶液；
[0016]优选地，所述荧光探针MIFluo溶液中，荧光探针MIFluo的浓度为0.1nM
‑
200mM；
[0017]作为进一步技术方案，所述荧光探针MIFluo溶液与金属离子溶液或者待测溶液的体积比为1:2
‑
2:1；
[0018]优选地，所述金属离子溶液中金属离子的浓度为0
‑
200mM。
[0019]作为进一步技术方案，所述荧光强度检测的激发波长为400
‑
500nm，优选为450nm；
[0020]优选地，所述荧光强度检测的发射波长为510
‑
520nm，优选为515nm。
[0021]第三方面，本专利技术提供了一种荧光探针MIFluo
‑
AM在细胞中金属离子检测中的应用，所述荧光探针MIFluo
‑
AM的结构式如下所示：
[0022][0023]其中，R1＝
‑
OCOOCOCH3、
‑
COOCH2OCOCH3或
‑
CH2OCOCH3；
[0024]R2＝
‑
OCOCH3、
‑
COOCH2CH3或
‑
CH2CH3。
[0025]第四方面，本专利技术提供了一种细胞中金属离子的定性检测方法，包括如下步骤：
[0026]将细胞在含有所述荧光探针MIFluo
‑
AM的培养基中培养，通过检测荧光强度实现对细胞中金属离子的定性检测；
[0027]所述金属离子包括锰、锌、镁、镍、铁或钴。
[0028]作为进一步技术方案，所述培养基中荧光探针MIFluo
‑
AM的浓度为0.01nM
‑
10μM；
[0029]作为进一步技术方案，所述培养的温度为36
‑
38℃，优选为37℃；
[0030]优选地，所述培养的时间为15
‑
60min；
[0031]优选地，所述荧光强度检测前还包括细胞清洗步骤。
[0032]作为进一步技术方案，所述荧光强度检测的激发波长为400
‑
500nm，优选为450nm；
[0033]优选地，所述荧光强度检测的发射波长为510
‑
520nm，优选为515nm。
[0034]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0035]经专利技术人研究发现，荧光探针MIFluo在没有结合离子的时候，MIFluo具有绿色荧光，当金属离子和荧光探针MIFluo的R基结合后会发生荧光淬灭，且其荧光强度的减弱和离子浓度具有范围内的线性关系。因此，本专利技术提供的荧光探针MIFluo能够用于金属离子的检测。
[0036]本专利技术提供的金属离子浓度的检测方法，以荧光探针MIFluo作为探针指示剂，首先将荧光探针MIFluo与已知浓度的金属离子溶液混合，反应后，测定荧光强度，得到金属离子浓度与荧光强度的关系；然后将荧光探针MIFluo与待测溶液混合，反应后，测定荧光强度，根据a步骤得到的金属离子浓度与荧光强度的关系获得待测溶液中金属离子的浓度，以实现对包括锰、锌、镁、镍、铁或钴在内的金属离子的检测。该检测方法简单、快速、灵敏度高、成本低。
附图说明
[0037]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光探针MIFluo在金属离子检测中的应用，其特征在于，所述荧光探针MIFluo的结构式如下所示：其中，R为羟基、羧基或氢。2.一种溶液中金属离子浓度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a.将权利要求1中所述的荧光探针MIFluo与已知浓度的金属离子溶液混合，反应后，测定荧光强度，得到金属离子浓度与荧光强度的关系；b.将权利要求1中所述的荧光探针MIFluo与待测溶液混合，反应后，测定荧光强度，根据a步骤得到的金属离子浓度与荧光强度的关系获得待测溶液中金属离子的浓度；所述金属离子包括锰、锌、镁、镍、铁或钴。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述荧光探针MIFluo为荧光探针MIFluo溶液；优选地，所述荧光探针MIFluo溶液中，荧光探针MIFluo的浓度为0.1nM
‑
200mM。4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述荧光探针MIFluo溶液与金属离子溶液或者待测溶液的体积比为1:2
‑
2:1；优选地，所述金属离子溶液中金属离子的浓度为0
‑
200mM。5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述荧光强度检测的激发波长为400
‑
500nm，优选为450nm；优选地，所述荧光强度检测的发射波长为510
‑
520nm，优选为515nm。6.一种荧光探针MIFluo
‑
AM在细胞中金属离子检测中的应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书二页说明书七页附图三页，
申请(专利权)人：河北工业大学，
类型：发明
国别省市：