一种间充质干细胞亚群及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种间充质干细胞亚群及其应用，其细胞表面具有高表达的第一Marker和低表达的第二Marker，该第一Marker包括公认的CD105、CD90、CD73及特有的CD201和CD49e，该第二Marker包括CD34、CD45和HLA

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞亚群及其应用


[0001]本专利技术属于干细胞治疗
，具体涉及一种间充质干细胞亚群及其应用。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(MSC)是一种具有强大的自我更新修复能力的成体干细胞，在一定条件下可分化成机体所需的功能细胞，负责器官和组织系统的再生和修复，维持机体正常生命活动。MSC在固有免疫和适应性免疫中发挥重要作用。
[0003]运用MSC进行疾病治疗的研究及成果近些年也有很多报道。目前全球已经有19款干细胞治疗药物上市，广泛涉及到心血管疾病，神经性退化疾病，骨退化疾病，自身免疫性疾病及新冠病毒感染等疾病。据中国国家药品监督管理局药品审评中心CDE官方公布，共有19个MSC类产品获批临床试验默认许可进行新药临床试验，有13项属于WJ
‑
MSC治疗药物。已有研究显示MSC在系统性红斑狼疮这一自身免疫性疾病方面具有很好的疗效，但是并非所有患者都可治疗。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种间充质干细胞亚群。
[0005]本专利技术的另一目的在于提供上述间充质干细胞亚群的应用。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]一种间充质干细胞亚群，其细胞表面具有高表达的第一Marker和低表达的第二Marker，该第一Marker包括公认的CD105、CD90、CD73及特有的CD201和CD49e，该第二Marker包括CD34、CD45和HLA
‑
DR，其中，
[0008]表面高表达CD105的细胞占比为98.7
‑
98.9％，表面高表达CD90的细胞占比为99.6
‑
99.8％，表面高表达CD73的细胞占比为97.1
‑
97.3％，表面高表达CD201的细胞占比为98.1
‑
98.3％，表面高表达CD49e的细胞占比为97.85
‑
97.9％，
[0009]其表达差异基因包括下表所示：
[0010][0011][0012]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述第一Marker由CD105、CD90、CD73、CD201和CD49e组成。
[0013]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述第二Marker由CD34、CD45和HLA
‑
DR组成。
[0014]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述第一Marker由CD105、CD90、CD73、CD201和CD49e组成，所述第二Marker由CD34、CD45和HLA
‑
DR组成。
[0015]在本专利技术的一个优选实施方案中，表面高表达CD105的细胞占比为98.8％，表面高表达CD90的细胞占比为99.7％，表面高表达CD73的细胞占比为97.2％，表面高表达CD201的细胞占比为98.2％，表面高表达CD49e的细胞占比为97.89％。
[0016]上述间充质干细胞亚群作为免疫调控组合物的原料的应用。
[0017]上述间充质干细胞亚群作为治疗自身免疫性疾病的组合物的原料的应用。
[0018]一种免疫调控组合物，其原料包括上述间充质干细胞亚群。
[0019]一种治疗自身免疫性疾病的组合物，其原料包括上述间充质干细胞亚群。
[0020]本专利技术的有益效果是：本专利技术高表达免疫调控相关蛋白，对细胞及机体更具有免疫调控能力，可作为治疗自身免疫性疾病的开发原料，为这类疾病的药物开发提供新的原料和思路。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例1中单细胞测序细胞分群示意图。
[0022]图2为本专利技术实施例1中前50个高表达基因箱型图。
[0023]图3为本专利技术实施例1中流式分选CD201+CD49e+MSCs细胞结果图。
[0024]图4为本专利技术实施例1中Immun
‑
MSCs和MSC的生长状况照片。
[0025]图5为本专利技术实施例1中差异表达基因火山图、KEGG富集气泡图及GO富集分析图。
[0026]图6为本专利技术实施例1中干细胞对淋巴细胞增殖的抑制作用效果图。
具体实施方式
[0027]以下通过具体实施方式结合附图对本专利技术的技术方案进行进一步的说明和描述。
[0028]实施例1
[0029]1、本专利技术间充质干细胞亚群的鉴定与富集
[0030]将健康产妇的脐带样本利用酶解法分离富集原代MSC并进行扩增培养。利用单细胞测序技术(10
×
Genomics)对培养体系的MSC进行单细胞转录组分析，以获得MSC单细胞图谱，同时采用非线性降维法t
‑
SNE(t
‑
distributed Stochastic Neighbor Embedding)对MSC功能亚群进行可视化，结合功能亚群上调表达基因、基因富集分析GO(Gene Ontology)与基因代谢通路分析KEGG(Kyoto Encyclopedia ofGenes and Genomes)等生物信息学理论分析，来明确鉴定目标新功能亚群MSC及其细胞表面所携带的特殊身份标记。
[0031]结果如图1所示，该细胞被分为10个亚群，通过其中亚群4(C4)为本专利技术间充质干细胞亚群，该细胞亚群上调表达的前50个基因中有40个与免疫调控相关基因(CD63，ITGB1，CD59，CD44，CD99等)，如图2所示。经KEGG分析显示该亚群的细胞主要以TNF信号通路，IL
‑
17信号通路，p53信号通路为主，GO富集分析显示表达蛋白涉及信号分子，趋化因子及CXCR等信号因子，提示其可能具有免疫调控的作用。分析表明该亚群的细胞高表达CD201和CD49e两个蛋白，故将它们用于筛选标记。
[0032]2、具有免疫调控功能亚群间充质干细胞(Immun
‑
MSCs)分选
[0033]取培养的P5代次MSC消化离心(300g，5min)，弃去上清，制成单细胞悬液(5
×
107/
mL)。PBS清洗后用封闭液封闭30min，加入PE
‑
CD201及FITC
‑
CD49e进行孵育，阴性对照组加入同型对照抗体，于4℃避光孵育，每隔10min混悬一次细胞，30min后用分选型流式细胞仪用CD201和CD49e设门进行分选。将分选出来的CD201，CD49e双阳性细胞命名为Immun
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MSCs。分选结果如图3所示，结果显示该细胞占比为52.6％。
[0034]3、本专利技术间充质干细胞亚群(Immun
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MSCs)的培养及鉴定
[0035]采用流式分选方法从人脐带间充质干细胞中分离得到CD201+CD49e+亚群细胞(Immun
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MSCs)，应用倒置显微镜观察期生长情况，如图4所示，Immu
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞亚群，其特征在于：其细胞表面具有高表达的第一Marker和低表达的第二Marker，该第一Marker包括CD105、CD90、CD73、CD201和CD49e，该第二Marker包括CD34、CD45和HLA
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DR，其中，表面高表达CD105的细胞占比为98.7
‑
98.9％，表面高表达CD90的细胞占比为99.6
‑
99.8％，表面高表达CD73的细胞占比为97.1
‑
97.3％，表面高表达CD201的细胞占比为98.1
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98.3％，表面高表达CD49e的细胞占比为97.85
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97.9％，其表达差异基因包括下表所示：2.如权利要求1所述的一种间充质干细胞亚群，其特征在于：所述第一Marker由CD105、CD90、CD73、CD201和CD49e组成。3.如权利要求1所述的一种间充质干细胞亚群，其特征在于：所述第二Marker由CD34、CD45和HLA

【专利技术属性】
技术研发人员：曾子晏，王薛婷，张凌娟，许韧，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：