具有缓解非酒精性脂肪肝的多肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了具有缓解非酒精性脂肪肝的多肽及其制备方法和应用，为贻贝多肽DADPLVILG，其HPLC

【技术实现步骤摘要】
具有缓解非酒精性脂肪肝的多肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及多肽
，具体涉及一种具有缓解非酒精性脂肪肝的多肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种非常普遍的慢性肝病，可增加心血管疾病的风险，并可发展为各种慢性肝病，如脂肪性肝炎和肝硬化。在全球范围内，由于久坐不动的生活方式、西方饮食的全球化以及过去饥荒地区食品供应的改善，NAFLD的患病率正在上升，这些都日益威胁着人类健康。目前治疗NAFLD的方式主要采用保护肝细胞药物，如熊去氧胆酸等，护肝去脂药主要是针对体内脂肪的吸收、代谢起着重要作用，起到治疗脂肪肝的作用。然而该类药物具有一定的副作用，服用熊去氧胆酸胶囊后，会引起患者稀便或腹泻，当治疗原发性胆汁性肝硬化时，患者可能会发生严重的右上腹疼痛。然而食品功能性物质，例如蛋白肽对非酒精性脂肪肝的缓解或预防的应用时却未见异常反应。
[0003]多肽是一类化合物，其在体内与目标结合具有更强的特异性，使其生物活性更高效和更好的适用性，且其无关的副作用也更有限。然而活性肽作为营养改善剂或功能性食品，很容易在受胃肠道中快速释放而造成浪费。本专利多肽制备的技术方案采用的碱性蛋白酶与胰蛋白酶双酶体系，提高了目标多肽的生产率。此外，由于引入胰蛋白酶的筛选，目标多肽还具有胃肠道消化抵抗的优势，其原因在于贻贝蛋白的酶切位点已经预先被胰蛋白酶破坏。本专利采用羟甲基纤维素溶、麦芽糊精、三聚丙三醇、酪蛋白等成分构建了双层微胶囊结构，该结构的组分未见报道或使用，具有创新性、安全性、稳定性的优势。将目标多提包裹在该双层微胶囊结构下，有效的延长了功能肽在模拟胃肠道环境下的释放时间，显著提高了吸收利用度。

技术实现思路

[0004]为开发贻贝蛋白资源，本专利技术的目的在于：提供具有缓解非酒精性脂肪肝的多肽及其制备方法和应用，即具有非酒精性脂肪肝缓解功效的贻贝多肽以及含有贻贝多肽粉的多肽微胶囊制备方法；贻贝多肽和多肽微胶囊在制备非酒精性脂肪肝缓解口服液上的应用。
[0005]该功能肽易于吸收，制备方法简单；制备出来的肽通过双层包覆制得功能肽微胶囊，功能肽微胶囊可以调控肽在胃肠道中的的释放速率，达到缓释效果，实现功能肽在肠道的释放和吸收，来提升功能肽的稳定性与利用率。
[0006]本专利技术提供如下的技术方案：
[0007]具有缓解非酒精性脂肪肝的多肽，其特征在于，所述贻贝多肽DADPLVILG，其HPLC
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MS检测的分子量为911.0[M
‑
H]‑
；
[0008]其结构如下所示：
[0009][0010]所述的贻贝多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0011](1)将贻贝去壳后取全组织，然后清洗、匀浆；
[0012](2)向贻贝的匀浆液中加入1.5％质量的(蛋白酶质量：贻贝蛋白质量)的胰蛋白酶酶解和1.5％质量的(蛋白酶质量：贻贝蛋白质量)的碱性蛋白酶双酶酶解；
[0013](3)将步骤(2)最终酶解液80～120℃加热5～15min(最优选100℃加热10min)灭酶处理，再采用4000～8000g/min离心10～20min后取上清液；
[0014](4)过滤步骤(3)所得的上清液采用超滤膜截留分子量1000Da的分子，冻干后得多肽粉；
[0015](5)将多肽粉分离纯化后得到具有肽序列DADPLVILG含量最高的组分的到贻贝多肽。
[0016](6)将制得的功能肽粉进行双层包覆，得到功能肽微胶囊。
[0017]步骤(2)中加入胰蛋白酶酶解时，保持匀浆液的pH值为7.2～8.5，酶解时间2～4小时，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质量的2.5～3.5％，胰蛋白酶的活力10000U/mg，碱性蛋白酶活力为20000U/mg。
[0018]步骤(6)中，所述功能肽微胶囊的制备过程为：将羟甲基纤维素溶于水中，加入麦芽糊精混合均匀，加入三聚丙三醇，继续加入酪蛋白和二月桂酸二丁基锡，升温至50
‑
55℃反应，反应完毕后加入功能肽粉，并继续搅拌并均质，所得溶液进行喷雾干燥，制得单层包覆微胶囊；将壁材各组分按照比例混匀，加入上述单层包覆微胶囊混匀采用高压微射流均质机进行乳化均质处理，单层包覆微胶囊与壁材的质量比为4：1～8：1，采用喷雾干燥得到功能肽微胶囊。
[0019]壁材组分及质量比：海藻胶、桃胶、紫苏籽油、桂花精油、番茄红素、柠檬酸钠、赤藓糖醇及水＝140～155g；195～200g；250～265g；132～135g；25～27g；20～25g；1～2g；30～40g。
[0020]本专利技术的功能肽微胶囊通过内部单层与壁材共同包覆来实现其被肠道中酶系分解，且其内部的功能肽缓慢释放，有利于功能肽在肠道的充分吸收，不会单次释放过多的功能肽而造成其降解后吸收。该壁材可充分保证功能肽在口腔及胃中的稳定性，防止被胃蛋白酶等分解破环其活性结构而造成功能肽过早释放，降低靶器官吸收的利用率。
[0021]技术方案中单层包覆微胶囊中单层壳层的作用主要是对包覆的功能肽粉起到缓释且均匀释放的作用，因为单层包覆微胶囊壳层中含有麦芽糊精及酪蛋白，而肠道中含有麦芽糊精酶与胰蛋白酶，当功能肽微胶囊服用后进入肠道，其包裹壁材在微碱性环境中降解，使得单层包覆微胶囊暴露。单层包覆微胶囊小肠液下，由于麦芽糊精的亲水性强，而酪蛋白具有疏水性，所以麦芽糊精会首先被麦芽糊精酶降解使得外壳层形成孔洞，包裹的功
能肽会释放到肠道中；当功能肽微胶囊中的部分功能肽释放之后，肠液会通过小孔进入到功能肽微胶囊内部，单层包覆微胶囊的单层壳层会受到胰蛋白酶的内外渗透并酶解，酪蛋白被酶解消化之后会形成残破的片段，由于酪蛋白在单层壳层中比例很高，当其被部分消化后，单层壳层结构空洞逐渐变大直至其结构坍塌，最后导致剩余功能肽逐渐释放殆尽。该方法构建的微胶囊结构使其包裹的功能肽得到缓释，避免了快速释放造成的为充分吸收利用，达到了高效的利用率。
[0022]单层壳层构建的反应过程为：本专利技术采用含有羟基的羟甲基纤维素作为包覆层主体与三聚丙三醇混合，二者在二月桂酸二丁基锡催化作用下发生酯化反应，进一步发生聚合反应，形成单层包覆微胶囊的壳层，二者在酯化反应与聚合反应的过程中，所形成酯化产物与聚合产物同时与酪蛋白表面的氨基及麦芽糊精表面的羟基进行反应，最终羟甲基纤维素聚合产物与酪蛋白、麦芽糊精形成一个结构完整，包裹性能与均匀性好的包覆壳层。
[0023]作为优选，壁材组分及质量比：海藻胶、桃胶、紫苏籽油、桂花精油、番茄红素、柠檬酸钠、赤藓糖醇及水＝140～155g；195～200g；250～265g；132～135g；25～27g；20～25g；1～2g；30～40g。
[0024]因此，本专利技术具有如下有益效果：
[0025](1)本专利技术通过体双蛋白酶酶解工艺，提高了目标多肽的产量，同时还具有对胃肠道酶消化的抵抗作用，在功能肽的制备高效优质的基础上保证本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.具有缓解非酒精性脂肪肝的多肽，其特征在于，为贻贝多肽DADPLVILG，其结构如下所示：2.根据权利要求1所述的具有缓解非酒精性脂肪肝的多肽，其特征在于，所述的贻贝多肽DADPLVILG的HPLC
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MS检测的荷质比为911.0[M
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H]
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。3.根据权利要求1或2所述的具有缓解非酒精性脂肪肝的多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将贻贝去壳后取全组织，然后清洗、匀浆，得到贻贝的匀浆液；(2)向贻贝的匀浆液中加入胰蛋白酶和碱性蛋白酶双酶酶解，得到酶解液；(3)将步骤(2)的酶解液灭酶处理，再采用离心后取上清液；(4)过滤步骤(3)所得的上清液采用超滤膜截留分子量1000Da的分子，冻干后得多肽粉；(5)将多肽粉分离纯化后得到贻贝多肽DADPLVILG。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，加入碱性蛋白酶与胰蛋白酶双酶酶解时，保持匀浆液的pH值为7.2～8.5，酶解时间2～4小时，酶解温度36～38℃。5.根据权利要求1所述的具有缓解非酒精性脂肪肝的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：相兴伟，蒋起宏，陈慧，刘书来，周绪霞，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：