尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志物的应用制造技术

本发明专利技术涉及尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志物的应用，所述尿液蛋白包括骨桥蛋白(OPN)、受体活性修饰蛋白3(RAMP3)、钙结合蛋白(S100A8)中的一种或几种的组合。本申请以在尿液为检测样品，具有无创性，与血液相比在采集上更易被患者接受，对于PBC患者的早期无创诊断具有非常重要的意义。创诊断具有非常重要的意义。创诊断具有非常重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志物的应用


[0001]本专利技术涉及无创诊断
，尤其涉及尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志物的应用。

技术介绍

[0002]原发性胆汁性胆管炎(Primary biliary cholangitis，PBC)是一种免疫介导的慢性胆汁淤积性肝病，组织学上表现为肝内中小胆管上皮细胞非化脓性破坏，可逐渐进展为肝硬化甚至肝衰竭。PBC是一种多因素疾病，其发病与环境、遗传变异、免疫等相关。在过去几十年，PBC在全球呈上升趋势。但由于PBC患者早期临床表现不典型，现有临床诊断标准存在一定局限性，很多患者处于临床终末期才被确诊，导致治疗延误，因此PBC患者早诊早治十分重要。
[0003]在影像学检查排除肝外胆道梗阻的情况下，目前PBC的诊断标准主要基于以下任意两项：(1)反应胆汁淤积的生化指标，如碱性磷酸酶(ALP)升高大于正常上限的1.5倍和/或谷氨酰转移酶(GGT)持续升高大于正常上限的3倍；(2)反应免疫异常的血清抗线粒体抗体(AMA)阳性或AMA－M2型阳性(滴度＞1:40)；(3)肝脏组织病理学证据符合PBC(非化脓性胆管炎)。然而上述实验室指标存在着一定的局限性，例如GGT易受酒精、药物、肥胖等因素影响。而AMA虽然是PBC的高度特异性血清学抗体，在约95％的PBC患者中可检测到，但AMA滴度与PBC病情活动及严重程度无相关性。除此之外，最近一项研究还发现，在血清ALP水平未升高的AMA患者中超过80％出现PBC的组织学特征，这表明AMA阳性但ALP水平正常的患者中存在部分未诊断的PBC患者。
[0004]目前，确诊PBC的金标准仍然是肝组织活检，然而这是一项有创性操作，存在着穿刺点出血、肝脏损伤、腹腔感染等风险，不易被患者接受，故通常在AMA阴性或患者有非典型PBC生化特征时，肝脏组织学检查才作为诊断的必要条件。
[0005]综上，对于PBC的早期诊断，临床上需要筛选其它准确率高、易于推广且无创的标志物。除了血液以外，尿液作为血浆滤过成分，不仅包含来自泌尿系统的信息，还包含通过血浆滤过后其他器官的信息，因此尿液也能够在一定程度上积累和反映机体的一系列变化，利用蛋白质组学技术高通量系统性地分析和鉴定尿液中的蛋白质分子可以研究其生物学功能。健康人尿液中有超过1500种蛋白质，故而尿液的定量和定性变化可能对疾病诊断有重要意义，并且尿液与血液相比存在以下几个优点：1)样本采集简单、无创、容易连续获得，可以作为临床的低成本检测；2)某些蛋白或者多肽代谢物入血后很快经肾脏代谢入尿，这时在血液中可能检测不到，但在尿液中却可能检测得到；3)与血液相比，尿液中的蛋白质及肽段更为稳定、不易降解，易于运输及储存；4)血液及组织液中蛋白复杂，数量多，尿液更容易观察其中的低丰度蛋白变化，更适合做质谱分析。

技术实现思路

[0006]本申请为了解决上述技术问题提供尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志
物的应用。
[0007]本申请通过下述技术方案实现：
[0008]本申请涉及尿液蛋白的检测产品在制备用于诊断原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用。
[0009]专利技术人首先经过液质联用质谱分析法发现共有194种尿液蛋白质在PBC患者与正常对照间存在显著差异表达。其中109种尿液蛋白质在PBC患者中表达上调，85种尿液蛋白质在PBC患者中表达下调。
[0010]其次，结合GO分析和信号通路富集，筛选出10个与免疫反应相关的差异蛋白，分别是：骨桥蛋白(OPN)、受体活性修饰蛋白3(RAMP3)、CD44、激活素受体1B型蛋白(ACVR1B)、趋化因子CXCL12蛋白、CD74、Wnt1诱导的信号通路蛋白(CCN4)、钙结合蛋白(S100A8)、溶酶体关联膜蛋白3(LAMP3)、磷酸肌醇
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激酶催化亚基δ肽(PIK3Cd)。
[0011]最后，结合蛋白组学分析和相关性分析，发现OPN、RAMP3、S100A8与ALT、AST、ALP、GGT、TBA、IgM、IgG、AMA等临床参数的相关性最为显著；经过实验论证，在原发性胆汁性胆管炎患者的尿液中，OPN、RAMP3、S100A8三种蛋白水平显著高于健康人。
[0012]值得说明的是，用检测产品制备用于诊断原发性胆汁性胆管炎的产品时，检测产品检测的尿液蛋白包括OPN、RAMP3、S100A8中的一种或几种的组合。
[0013]OPN、RAMP3、S100A8均存在与尿液中，选择尿液作为检测样本，不具有侵入性，还具有简易、易获取等优点。
[0014]可选的，所述用于诊断原发性胆汁性胆管炎的产品包括试剂盒。
[0015]本申请提供的诊断原发性胆汁性胆管炎的产品，包含尿液蛋白的检测剂，所述尿液蛋白包括OPN、RAMP3、S100A8中的一种或几种的组合。
[0016]与现有技术相比，本申请具有以下有益效果：
[0017]本申请以在尿液为检测样品，具有无创性，与血液相比在采集上更易被患者接受，对于PBC患者的早期无创诊断具有非常重要的意义。
附图说明
[0018]此处所说明的附图用来提供对本申请实施方式的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本专利技术实施方式的限定。
[0019]图1是实施例中在尿液中开展PBC患者生物标志物研究的流程图；
[0020]图2是实施例中PBC患者与健康对照组尿液蛋白主成分分析图；
[0021]图3是实施例中PBC患者与健康对照组尿蛋白鉴定火山图；
[0022]图4是实施例中GO生物学功能分析差异尿蛋白质主要参与的生物过程图表；
[0023]图5是实施例中GO生物学功能分析差异尿蛋白质主要所处的细胞位置图表；
[0024]图6是实施例中GO生物学功能分析差异尿蛋白质主要分子功能图表；
[0025]图7是实施例中差异蛋白的KEGG分析图；
[0026]图8是实施例中差异蛋白的相关性分析图；
[0027]图9是实施例中ELISA实验检测尿液中OPN蛋白浓度图，其中A是OPN标准曲线，B是OPN蛋白在正常组和PBC患者尿液中的表达示意图；
[0028]图10是实施例中ELISA实验检测尿液中RAMP3蛋白浓度图，其中A是RAMP3标准曲
线，B是RAMP3蛋白在正常组和PBC患者尿液中的表达示意图；
[0029]图11是实施例中ELISA实验检测尿液中S100A8蛋白浓度图，其中A是S100A8标准曲线，B是S100A8蛋白在正常组和PBC患者尿液中的表达示意图。
具体实施方式
[0030]为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施方式中的附图，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施方式是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。因此，以下对在附图中提供的本专利技术的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施方式。基于本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.尿液蛋白的检测产品在制备用于诊断原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用，其特征在于：所述尿液蛋白包括OPN、RAMP3、S100A8中的一种或几种的组合。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述用于诊断原发性胆汁性胆管炎的...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋维，吴东波，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：