ＣＤ４细胞芯片及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开一种ＣＤ４细胞芯片，包括固相载体和固定于该载体上的抗体，所述抗体为ＣＤ４单克隆抗体，所述固相载体为玻片。本发明专利技术还公开了ＣＤ４细胞芯片的制备方法、含ＣＤ４细胞芯片的ＣＤ４细胞检测试剂盒、以及应用ＣＤ４细胞芯片进行检测的方法。本发明专利技术还公开了ＣＤ４细胞芯片和ＣＤ４细胞检测试剂盒的应用。本发明专利技术ＣＤ４细胞芯片，成本低廉、操作简便，特别适用于艾滋病毒感染严重的贫困地区。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞芯片，尤其涉及一种CD4细胞芯片及其制备方法和应用。
技术介绍
CD4细胞是指带有CD4抗原的T淋巴细胞，又被称为辅助T细胞，在维持机体的细 胞免疫和体液免疫中具有枢纽作用。CD4细胞是免疫系统中的主要战斗细胞，也是人类免疫 缺陷病毒(HIV)感染的主要靶细胞。人体感染HIV后的主要病理过程是免疫系统的损害， 主要表现为CD4细胞的丢失和绝对数量的减少。目前，CD4细胞计数已经广泛应用于指导 临床抗HIV治疗，并已成为世界卫生组织对艾滋病发病定义的金标准。世界卫生组织定义 当人体外周血中CD4细胞数量< 200个/微升则判定为艾滋病患者。准确可靠的CD4细胞 计数已成为评价HIV感染者免疫状况、预测病程进展、评价抗病毒药物治疗效果和估测预 后的重要指标。此外，有研究表明，CD4细胞在恶性肿瘤、乙型肝炎、慢性阻塞性肺疾病、肺 结核、脑梗死等其他疾病的病程监测、疗效评估、预后评价等方面也发挥重要作用。CD4细 胞的数量已是衡量个体免疫状态及功能的重要指标。当人体外周血中CD4细胞数量< 350 个/微升，为免疫力低下，需详细诊断是否为艾滋病患者；当人体外周血中CD4细胞数量在 350 450个/微升，为免疫力弱化，是亚健康状态；当人体外周血中CD4细胞数量在450 1440个/微升，为正常范围。目前CD4细胞计数的标准检测方法是传统流式细胞法。该方法的基本原理是将样 品中CD4细胞与荧光标记抗体反应后，进入流式细胞仪，然后使样品中所有细胞依次排列 成单行，测定每个细胞的荧光量从而得到CD4细胞在淋巴细胞中的百分率。流式细胞法在 得到CD4细胞在淋巴细胞中的百分率以及淋巴细胞绝对值后，两者相乘即获得CD4细胞数。 现在国内外临床使用的流式细胞仪被美国BD公司和贝克曼库尔特公司所垄断，其售价根 据型号及等级不同大致在60至100万元人民币，而每次测试所需费用在150至400元人民 币。因此虽然流式细胞法具有结果精确，操作过程自动化，样本处理量大等诸多优点，但价 格昂贵，加上其检测所用的进口试剂，使每次测试成本很高，而且流式细胞仪培训要求高、 维护也十分繁琐。现国内在一些大、中城市的省级医疗卫生单位，流式细胞仪的使用已获得普及，而 在地区级医疗卫生单位，尤其是艾滋病流行严重的贫困边远地区，还鲜见流式细胞仪的使 用。国外流式细胞仪的使用现状也与国内相似，在发达国家的大、中型医疗卫生机构流式细 胞仪的使用已获得普及，而在艾滋病流行最严重的一些发展中国家，尤其是一些非洲国家， 几乎还很少有流式细胞仪。流式细胞仪的昂贵限制了其临床上的普及。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种成本低廉、操作简便的CD4细胞芯片。此外， 还需要提供一种CD4细胞芯片的制备方法和应用。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现在本专利技术的一个方面，提供了一种CD4细胞芯片，包括固相载体和固定于该载体 上的抗体，所述抗体为CD4单克隆抗体，所述固相载体为玻片。优选的，在所述玻片表面设有反应区，所述CD4单克隆抗体固定在该反应区；更优 选的，所述反应区为单凹，或是在玻片表面圈出的具有一定形状的封闭区域。进一步优选 的，单凹的孔径为9 12mm，孔深为0. 2 0. 3mm，采用表面设有单凹或封闭区域的玻片，使 被测样品局限于反应区范围内进行抗原抗体特异性结合反应，有效降低了血液用量，使手 指术梢血采样成为可能，同时在满足细胞检测要求的情况下，大大降低了抗体使用成本。在本专利技术的另一方面，提供了一种⑶4细胞芯片的制备方法，包括以下步骤用酸清洗玻片，使玻片表面带阴离子电荷；将清洗过的玻片放入多聚赖氨酸溶液中浸泡适当时间，通过多聚赖氨酸携带的阳 离子电荷与所述玻片表面阴离子电荷之间的吸引，使多聚赖氨酸吸附于玻片表面；将CD4单克隆抗体滴加在玻片表面，室温孵育合适时间，再用磷酸盐缓冲液清洗 后烘干，于2 26°C保存待用。优选的，用酸清洗玻片的步骤包括先用铬酸清洗玻片，再用5% 10%硝酸水溶 液清洗玻片，然后用水将玻片冲洗干净。由于玻片的主要成分是二氧化硅，用铬酸、硝酸水 溶液先后处理后玻片表面呈阴离子，有利于吸附携带的阳离子的多聚赖氨酸。优选的，所述玻片表面设有反应区，将CD4单克隆抗体滴加在玻片表面的反应区 内，经过酸清洗后玻片表面带阴离子电荷，与多聚赖氨酸所带正电荷异性相吸，多聚赖氨酸 与抗体蛋白以肽键结合。玻片表面设有反应区，不仅降低抗体使用成本，而且有效降低被测 血液用量。在本专利技术的另一方面，提供了 一种⑶4细胞检测试剂盒，至少包括上述⑶4细胞芯 片。优选的，该CD4细胞检测试剂盒还包括稀释液、过氧化氢溶液、染色液和复染液。所述稀释液为磷酸盐缓冲液，pH值为7. 0 7. 4 ；所述过氧化氢溶液的体积百分 比浓度为2. 5 3. 5% ；所述染色液由碱性品红、亚硝基铁氰化钠、联苯胺按1 5%、3 5%、1 5%的质量体积百分比浓度溶解于95%乙醇配制而成；所述复染液由碱性品红按 2 5%的质量体积百分比浓度溶解于95%乙醇配制而成。在本专利技术的另一方面，还提供了一种应用⑶4细胞芯片进行检查的方法，包括以 下步骤将待测血样滴加在CD4细胞芯片表面的抗体处，使其进行抗原抗体特异性结合反 应；用稀释液洗去非特异性结合细胞和多余血样；将玻片放入染色液中染色，并把染色后的玻片在过氧化氢溶液中浸置后，再转入 复染液中染色，以区分CD4细胞和单核细胞；在光学显微镜下对CD4细胞计数，或采用自动计数仪完成CD4细胞计数。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述⑶4细胞芯片在制备诊断、监测或辅助 治疗包括艾滋病、肿瘤性疾病、自体免疫性疾病、器官移植、乙型肝炎、脑梗死、慢性阻塞性 肺疾病的免疫力低下疾病产品中的应用。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述CD4细胞检测试剂盒用于诊断、监测或4辅助治疗包括艾滋病、肿瘤性疾病、自体免疫性疾病、器官移植、乙型肝炎、脑梗死、慢性阻 塞性肺疾病的免疫力低下疾病的用途。CD4细胞检测可独立或与病毒载量协同作为艾滋病诊断、病程监测及辅助治疗的 重要指标。监测和调控艾滋病感染者及患者的⑶4细胞数量，使其维持在一定范围，让患者 保持正常稳定的免疫功能，与病毒共存，维持正常的学习、工作和生活。CD4细胞检测作为人体细胞免疫功能评估的重要指标之一，广泛应用于免疫力低 下疾病、慢性疾病等临床疾病的病理分析、辅助诊断、指导治疗、预后判断等方面。主要应用 于病毒感染性疾病；肿瘤性疾病；自体免疫性疾病；器官移植患者；乙型肝炎；脑梗死；慢 性阻塞性肺疾病；其他免疫缺损或异常的患者。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述CD4细胞检测试剂盒用于健康体检的用 途。CD4细胞检测提供了人体免疫力的量化指标。检测免疫力的主要指标是血清免疫 球蛋白(Ig)定量分析和T淋巴细胞亚群分析。主要应用于亚健康检测；健康人群免疫功 能评估；功能性免疫制剂(中药、保健品、免疫球蛋白等)功效的评价；疾病预防、筛查的辅 助诊断。由于采用上述技术方案，本专利技术⑶4细胞芯片具有如下优点(1)成本低廉，检测费用远远低于流式细胞法，特别适用于无流式细胞仪检测条件 而又急需开展CD4细胞检测项目的艾滋病流行严重地区。(2)操作简便，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＣＤ４细胞芯片，包括固相载体和固定于该载体上的抗体，其特征在于，所述抗体为ＣＤ４单克隆抗体，所述固相载体为玻片。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曹波，何骏杰，杨君，
申请(专利权)人：上海汇中细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]