抗CTLA-4抗体药物组合物及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种稳定的抗CTLA

【技术实现步骤摘要】
抗CTLA
‑
4抗体药物组合物及其用途


[0001]本专利技术涉及治疗性药物组合物领域，具体涉及抗CTLA
‑
4抗体药物组合物及其用途。

技术介绍

[0002]细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4或CTLA
‑
4，cytotoxic T
‑
lymphocyte
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associated protein 4)，也称为CD152(cluster of differentiation 152)，是由CTLA
‑
4基因编码的跨膜蛋白，该基因位于人类第2号染色体2q33。CTLA
‑
4是免疫球蛋白超家族的一员，由胞外V区、跨膜区和胞浆区组成。CTLA
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4与T细胞表面的协同刺激分子受体CD28具有同源性，两者竞争结合其配体B7
‑
1(CD80)和B7
‑
2(CD86)，这类配体主要表达于抗原递呈细胞表面。与CD28相比，CTLA
‑
4与CD80和CD86的结合亲和力更高，因此能够竞争和阻断CD28介导的激活作用。CTLA
‑
4通常表达在调节性T细胞(Treg)和活化状态的常规T细胞表面上。其在与B7类分子结合后，抑制T细胞的激活，参与免疫反应的负调控，充当免疫检查点并下调免疫应答，所以CTLA
‑
4在免疫调节中起到非常重要的作用。
[0003]T细胞的激活需要两个信号的刺激，第一个信号来自T细胞受体(TCR)特异性结合抗原递呈细胞(APC)表面的抗原肽
‑
MHC复合物，第二个信号通路需要共刺激分子(如CD28)的参与，当CD28与B7
‑
1/B7
‑
2(CD80/CD86)结合后可以进一步活化T细胞，促进其成熟和增殖。目前的研究表明，在免疫应答过程中，CTLA
‑
4通过下列途径下调T细胞的功能：其一，CTLA
‑
4可以通过其与CD80/CD86的高亲和力，竞争性阻断CD28与CD80/86共刺激信号的传递，进而抑制T细胞的增殖，减少IL
‑
2的分泌。其二，CTLA
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4可以通过降低CD80/CD86在抗原递呈细胞(APC)上的表达水平或者通过反式内吞作用将CD80/CD86分子从抗原递呈细胞(APC)表面移除，从而减少了CD28参与的T细胞激活。其三，CTLA
‑
4可以通过介导树突状细胞结合CD80/CD86并诱导色氨酸降解酶IDO的表达，抑制TCR信号。此外，CTLA
‑
4还可以通过招募抑制性分子结合到免疫突触，诱导产生调节性细胞因子，从而抑制APC和TCR信号的传递。
[0004]已在许多研究中证明CTLA
‑
4的阻断可以诱导肿瘤消退。抗CTLA
‑
4抗体能够在体内外有效、特异地抑制细胞和体液免疫应答，对移植排斥反应及各种自身免疫性疾病有显著的治疗作用，毒副作用低。
[0005]尽管目前已有CTLA
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4的单抗药物Ipilimumab(百时美施贵宝)和Tremelimumab(阿斯利康)用于一些癌症治疗并且正在测试其他抗癌适应症，但是仍需要在各方面包括活性相比于已知抗体改善的新型抗CTLA
‑
4抗体。
[0006]但是，抗体药物其分子量大，结构复杂，容易降解、聚合或发生不希望发生的化学修饰等而变得不稳定。为了使抗体适合于生产和给药，并且在储存和随后使用过程中能保持稳定性，及发挥更好的效果，抗体药物的稳定制剂研究显得尤为重要。

技术实现思路

[0007]本专利技术所述的药物组合物是一种含有与CTLA
‑
4特异性结合的抗体或其抗原结合
片段的高稳定性药物组合物。特别地，本专利技术通过选择适当的缓冲体系和pH，优化稳定剂和表面活性剂，开发得到的抗体制剂可用于静脉注射，且各成分之间相互作用、协同配合，为抗CTLA
‑
4抗体或其抗原结合片段提供了适宜长期保存的存储环境，能够避免制剂在长期保存或运输过程中导致的抗体降解、聚集或沉淀，抗体在该环境中可以长期存储，存储期间能够保证抗体活性和纯度均保持稳定，保证了生物药物的药效。
[0008]本专利技术提供了一种药物组合物，包含：(1)缓冲液；(2)抗CTLA
‑
4抗体或其抗原结合片段。
[0009]在一些方案中，上述抗CTLA
‑
4抗体或其抗原结合片段包含的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为：
[0010]LCDR1：RASQNVGTYVA(SEQ ID NO:1)；
[0011]LCDR2：STSYRYS(SEQ ID NO:2)；
[0012]LCDR3：HQYDTYPLT(SEQ ID NO:3)；
[0013]HCDR1：SGYYWN(SEQ ID NO:4)；
[0014]HCDR2：YIGYDGSNX1YNPSLKX2，其中，X1为N或Y，X2为S或N；
[0015]HCDR3：X3YYSGYFDS，X3为D或N。
[0016]在一些方案中，上述抗CTLA
‑
4抗体或其抗原结合片段包含：
[0017]氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的LCDR1；
[0018]氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的LCDR2；
[0019]氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的LCDR3；
[0020]氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的HCDR1；
[0021]氨基酸序列如SEQ ID NO:5或7或9所示的HCDR2；
[0022]氨基酸序列如SEQ ID NO:6或8所示的HCDR3。
[0023]在一些方案中，上述抗CTLA
‑
4抗体或其抗原结合片段包含：
[0024](1)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
[0025](2)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
[0026](3)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种药物组合物，包含：(1)缓冲液；和(2)抗CTLA
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4抗体或其抗原结合片段；其中，所述抗CTLA
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4抗体或其抗原结合片段包含的LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为：LCDR1：RASQNVGTYVA(SEQ ID NO:1)；LCDR2：STSYRYS(SEQ ID NO:2)；LCDR3：HQYDTYPLT(SEQ ID NO:3)；HCDR1：SGYYWN(SEQ ID NO:4)；HCDR2：YIGYDGSNX1YNPSLKX2，其中，X1为N或Y，X2为S或N；HCDR3：X3YYSGYFDS，X3为D或N；优选地，所述抗CTLA
‑
4抗体或其抗原结合片段的浓度为约1～100mg/mL，优选为约1～50mg/mL，更优选为约5～30mg/mL；优选地，所述药物组合物的pH为约4.5～6.5，优选为约5.0～6.0；优选地，所述药物组合物的渗透压为约250～350mOsm/kg；优选地，所述药物组合物经静脉注射施用。2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗CTLA
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4抗体或其抗原结合片段包含：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的LCDR1；氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的LCDR2；氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的LCDR3；氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的HCDR1；氨基酸序列如SEQ ID NO:5或7或9所示的HCDR2；氨基酸序列如SEQ ID NO:6或8所示的HCDR3；优选地，所述抗CTLA
‑
4抗体或其抗原结合片段包含：(1)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或(2)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或(3)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:6所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；优选地，所述抗CTLA
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4抗体或其抗原结合片段选自鼠源抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段、人源化抗体或其抗原结合片段，优选为人源化抗体或其抗原结合片段。3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述抗CTLA
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4抗体或其抗原结合片段包含：(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:11所
示的重链可变区；或(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的轻链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的重链可变区；或(3)氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的轻链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示的重链可变区；或(4)氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的轻链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示的重链可变区；优选地，所述抗CTLA
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4抗体包含：(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示的轻链氨基酸序列，和氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示的重链氨基酸序列；(2)氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示的轻链氨基酸序列，和氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示的重链氨基酸序列；(3)氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示的轻链氨基酸序列，和氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示的重链氨基酸序列；或(4)氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示的轻链氨基酸序列，和氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示的重链氨基酸序列。4.如权利要求1
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3中任一项所述的药物组合物，其中所述缓冲液选自醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液和组氨酸缓冲液中的一种或多种；优选地，所述缓冲液为醋酸缓冲液；优选地，所述醋酸缓冲液为醋酸
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醋酸钠缓冲液或醋酸
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醋酸钾缓冲液，优选为醋酸
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醋酸钠缓冲液；优选地，所述缓冲液的浓度为约5～100mM，优选为约10～50mM，优选为约10～30mM；优选地，所述缓冲液的pH为约4.5～6.5，优选为约5.0～6.0。5.如权利要求1
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4中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物还包括稳定剂，所述稳定剂选自精氨酸、精氨酸盐、氯化钠、甘露醇、山梨醇、蔗糖和海藻糖中的一种或多种；优选地，所述精氨酸盐为盐酸精氨酸；优选地，所述稳定剂的浓度为约100～300mM，优选为约130～280mM，优选为约200～260mM。6.如权利要求5所述的药物组合物，其中，所述稳定剂为浓度约130～280mM的甘露醇；或所述稳定剂为浓度约130～280mM的蔗糖；或所述稳定剂为浓度约20～80mM的氯化钠与浓度约110
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170mM的甘露醇的组合；或所述稳定剂为浓度约20～80mM的氯化钠与浓度约110
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170mM的蔗糖的组合；优选地，所述稳定剂为浓度约200～260mM的甘露醇；或所述稳定剂为浓度约200～260mM的蔗糖；或所述稳定剂为浓度约30～70mM的氯化钠与浓度约120
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160mM的甘露醇的组合；或所述稳定剂为浓度约30～70mM的氯化钠与浓度约120
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160mM的蔗糖的组合。7.如权利要求1
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6中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯2...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘沛想，刘洪川，李宝贤，刘辉，姚盛，冯辉，
申请(专利权)人：苏州君盟生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：