一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物以及制备方法，该司美格鲁肽衍生物由司美格鲁肽与经活化的荧光分子共价偶联得到。荧光修饰的司美格鲁肽衍生物在生物体内和司美格鲁肽原型药具有相似的吸收特征，因此以该司美格鲁肽衍生物为荧光分子探针，通过检测荧光信号强度可以得到司美格鲁肽的含量。该监测方法适用于体内定量分析、适用于复杂的生物样品的分析，在复杂生物样品的分析中的定量线性范围广，无需复杂的样品前处理，检测时仅需利用酶标仪进行荧光检测，操作简单且检测速度快。操作简单且检测速度快。操作简单且检测速度快。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物化学
，具体涉及一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物及其制备方法与其在司美格鲁肽体内外荧光定量分析及示踪中的应用。

技术介绍

[0002]司美格鲁肽(Semaglutide，CAS No.910463
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2)是一种长效的人胰高血糖素样肽
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1(GLP
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1)类似物，用于辅助饮食控制和运动，以改善成人2型糖尿病患者(T2D)血糖。
[0003]相较于其他已获批上市的GLP
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1激动剂，司美格鲁肽体内半衰期长达一周。2022年一季度司美格鲁肽销售额已达18.29亿美元，并在不断快速增长。当前，针对司美格鲁肽的新临床适应症、新制剂以及生物类似药的开发是业界竞争的热点，上述研究均需要在生物样品中定量检测司美格鲁肽。
[0004]现有生物样品如血浆或组织液中司美格鲁肽的定量检测方法主要包括反相高效液相色谱法、液质联用(如，S.Esposito et al.A liquid chromatography high
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resolution mass spectrometry in vitro assay to assess metabolism at the injection site of subcutaneously administered therapeutic peptides.J.Pharm.Biomed.Anal.(2018))以及放射标记技术，其中反相高效液相色谱法检测限高且容易受样品中其他物质的干扰；液质联用方法成本较高，需要对样品进行预处理，检测通量偏小；放射标记技术需要特殊设备及防护条件，且存在安全性隐患。
[0005]公开号为CN 114660214 A的专利中公开了一种司美格鲁肽的液相色谱检测方法及其应用，属于药物化学
该专利技术提供一种司美格鲁肽的液相色谱检测方法：以磷酸盐缓冲液作为流动相A，以有机溶剂和水的混合溶液作为流动相B，以单根色谱柱为固定相，检测器为紫外检测器，采用高效液相色谱梯度洗脱司美格鲁肽。还提供了本专利技术液相色谱检测方法在检测鉴定司美格鲁肽在生产或存放过程中产生的杂质中的应用。本专利技术方法仅需要使用普通液相色谱，只需要一根色谱柱即可完成司美格鲁肽的液相色谱检测，并且检测的个数不但多而且分离度都比较高。但该检测方法难以实现定量分析，并且不适用于生物样品等复杂剂的分析。
[0006]与上述定量检测方法相比，荧光检测成本低廉、操作简单、安全性高、通量大。本专利技术涉及的具有荧光特性司美格鲁肽衍生物，具有和司美格鲁肽一致的体内药物动力学性质，可用于体内外司美格鲁肽荧光定量及示踪。

技术实现思路

[0007]针对目前本领域存在的瓶颈问题，本专利技术提供了一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物，该司美格鲁肽衍生物在生物体内和司美格鲁肽原型药具有相似的吸收特征，因此利用该司美格鲁肽衍生物可以定量检测含有司美格鲁肽的复杂生物样本，解决了司美格鲁肽在生物样本中检测难度大、检测成本高、操作复杂的问题。
[0008]本专利技术是通过如下技术方案实现的：
[0009]一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物，具有下式(1)或式(2)所示的结构式：
[0010][0011]其中，SMG
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NH
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为司美格鲁肽基团。
[0012]本专利技术还提供了所述的荧光修饰的司美格鲁肽衍生物的制备方法，该制备方法的操作方法简便，制备条件温和，可在常温下进行，原料低毒。
[0013]一种所述的荧光修饰的司美格鲁肽衍生物的制备方法，由司美格鲁肽与经活化的荧光分子共价偶联得到。
[0014]所述的经活化的荧光分子为商业化的经异硫氰酸酯(
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N＝C＝S)或者N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化后的荧光分子。
[0015]优选地，所述的商业化经活化的荧光分子包括异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyanate，简称FITC)、罗丹明B异硫氰酸酯(Rhodamine B 5
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Isothiocyanate，简称RBITC)、荧光素N
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羟基琥珀酰亚胺酯(Fluorescein NHS ester)、花菁素类荧光染料N
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羟基琥珀酰亚胺酯(Cyanines dyes NHS ester)、Bodipy类荧光染料N
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羟基琥珀酰亚胺酯或Alexa Fluor类荧光染料N
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羟基琥珀酰亚胺酯。
[0016]所述的经活化的荧光分子还可以通过荧光分子与异硫氰酸酯(
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N＝C＝S)或者N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)反应活化得到，包括荧光素与异硫氰酸酯反应得到异硫氰酸荧光素；荧光素与N
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羟基琥珀酰亚胺反应反应得到荧光素N
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羟基琥珀酰亚胺酯；罗丹明B荧光分子与异硫氰酸酯反应得到罗丹明B异硫氰酸酯；花菁素类荧光染料与N
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羟基琥珀酰亚胺反应得到花菁素类荧光染料N
‑
羟基琥珀酰亚胺酯；Bodipy类荧光染料与N
‑
羟基琥珀酰亚胺反应得到Bodipy类荧光染料N
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羟基琥珀酰亚胺酯；Alexa Fluor类荧光染料与N
‑
羟基琥珀酰亚胺反应得到Alexa Fluor类荧光染料N
‑
羟基琥珀酰亚胺酯。
[0017]优选地，所述司美格鲁肽衍生物中的经活化的荧光分子为异硫氰酸荧光素(FITC)，该司美格鲁肽衍生物在生物体内与司美格鲁肽原型药具有极为相似的吸收特征。
[0018]优选地，所述司美格鲁肽衍生物中的经活化的荧光分子为磺基花菁5.5N
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羟基琥珀酰亚胺酯(Sulfo
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Cyanine5.5 NHS ester，简称Cy5.5
‑
NHS)，该司美格鲁肽衍生物在制剂中和司美格鲁肽原型药具有相似的制剂特性。
[0019]所述的司美格鲁肽和经活化的荧光分子的共价偶联，包括如下步骤：
[0020](A)按照摩尔比例1:1～10将司美格鲁肽和经活化的荧光分子溶解于碳酸盐缓冲溶液中，0～50℃下，搅拌反应1～24h，得到荧光修饰的司美格鲁肽衍生物粗产物；
[0021](B)对荧光修饰的司美格鲁肽衍生物粗产物进行纯化，得到纯的荧光修饰的司美格鲁肽衍生物。
[0022]优选地，所述的司美格鲁肽和经活化的荧光分子的共价偶联，步骤(A)中司美格鲁
肽的加料量为2～50mmol/L。如果司美格鲁肽的加料量低于2mmol/L，反应浓度太低，不利于反应效率；如果司美格鲁肽的加料量高于50mmol/L，不利于司美格鲁肽在反应体系中的溶解，偶联反应无法完全。
[0023]本专利技术还本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物，其特征在于，所述司美格鲁肽衍生物具有下式(1)或式(2)所示的结构式：其中，SMG
‑
NH
‑
为司美格鲁肽基团。2.根据权利要求1所述的司美格鲁肽衍生物的制备方法，其特征在于，所述的司美格鲁肽衍生物由司美格鲁肽与经活化的荧光分子共价偶联得到。3.根据权利要求2所述的司美格鲁肽衍生物的制备方法，其特征在于，所述的经活化的荧光分子包括异硫氰酸荧光素、罗丹明B异硫氰酸酯、荧光素N
‑
羟基琥珀酰亚胺酯、花菁素类荧光染料N
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羟基琥珀酰亚胺酯、Bodipy类荧光染料N
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羟基琥珀酰亚胺酯或Alexa Fluor类荧光染料N
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羟基琥珀酰亚胺酯。4.根据权利要求2或3所述的司美格鲁肽衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(A)按照摩尔比例1:1～10将...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘祥瑞，周天华，韦梦莹，李琪，周泉，王佳峰，谢珊珊，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：