人乳头瘤病毒多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种人乳头瘤病毒多肽及其应用，其序列如SEQ ID No.1所示，本发明专利技术的多肽无须添加分子伴侣或佐剂等蛋白分子或HPV抗原，所述多肽可以直接负载DC细胞，高效诱导形成特异性CTL细胞，有效杀伤HPV，对感染HPV所导致的宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变、息肉、疣等病变有疗效。疗效。疗效。

【技术实现步骤摘要】
人乳头瘤病毒多肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及人乳头瘤病毒多肽及其应用。

技术介绍

[0002]高危人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)感染与多种头颈部癌、泌尿生殖系癌发生相关。根据宫颈癌病因学研究表明，99％的宫颈癌患者体内均检测到高危型HPVDNA的表达。据不完全统计，每年有近570,000例新发宫颈癌病例和超过311,000死亡病例。在我国，平均每年约有13万新患宫颈癌的女性，占世界宫颈癌新发病例总数的28％。
[0003]HPV是无包膜的双链闭环小型DNA病毒，其基因组编码E1、E2、E4、E5、E6、E7等六个早期蛋白和L1、L2两个晚期蛋白。已有数据显示，目前发现有100种以上不同类型的HPV。在多种类型的HPV中，高危型HPV包括但不局限于HPV16、18、31、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82，高危型HPV的感染与宫颈癌以及宫颈癌前病变的发生密切相关。并且在高危型HPV亚型中，HPV16、HPV18是最常见的致癌类型。
[0004]索晋国在“以CpG ODN为佐剂的人乳头瘤病毒多肽疫苗抗小鼠宫颈癌肺转移瘤的作用及机制”中公开了序列为GQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIR的多肽，皮下接种该多肽疫苗可抑制宫颈癌肺转移瘤的生长。但该多肽疫苗需要以ODN为佐剂。
[0005]现有技术中虽然公开了可以抑制宫颈癌肺转移瘤的生长的人乳头瘤病毒多肽，然而，如何进一步提高预防或治疗HPV感染的效果，特别是如何同时提高特异性及免疫活性，仍然是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0006]基于上述原因，本专利技术提出一种新的人乳头瘤病毒多肽及其应用。为了实现本专利技术的目的，拟采用如下技术方案：
[0007]本专利技术一方面涉及人乳头瘤病毒多肽，所述人乳头瘤病毒多肽具有RKKRRQRRRAGQAEPDRAHYNIVTFCCKCDS所示的氨基酸序列。RKKRRQRRRAGQAEPDRAHYNIVTFCCKCDS也被称为肽段A。本专利技术的肽段A(可以在不添加任何例如白介素2(IL
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2)、干扰素α(IFN
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α)、干扰素γ(IFN
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γ)、粒细胞集落刺激生物因子(GM
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CSF)等细胞因子的情况下，作为药物可单独注射使用。本专利技术采用人工合成的小分子肽段A刺激的细胞免疫疗法是使用多种细胞因子和所述肽段A体外诱导培养具有特异性杀伤的HPV特异性细胞毒(CTL)细胞，进而通过回输至患者体内，直接杀伤肿瘤或激发机体免疫反应杀伤肿瘤的特异性细胞免疫疗法。
[0008]本专利技术的另一个目的在于提供一种核酸，所述核酸能够编码本专利技术所述的人乳头瘤病毒多肽。
[0009]作为上述核酸的序列没有特别的限定，只要其能够编码本专利技术提供的肽段即可，例如，上述核酸序列中编码本专利技术提供的肽段A中的某一氨基酸的密码子还可以为该密码子的同义密码子。
[0010]本专利技术另一方面还涉及编码上述核酸的质粒、微生物等，所述质粒或微生物能够表达所述人乳头瘤病毒多肽。
[0011]本专利技术另一方面还涉及上述人乳头瘤病毒多肽的用途，所述人乳头瘤病毒多肽用于制备治疗HPV所引发的疾病的药物中的应用。
[0012]所述“用途”是指所述肽段A可以有效地诱导HPV特异性CTL细胞免疫杀伤HPV，并对HPV引发的相关疾病有疗效。具体地，所述相关疾病包括但不局限于：宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变、息肉、疣。
[0013]特别地，对于本专利技术所述的药物而言，可以不添加任何例如白介素2(IL
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2)、干扰素α(IFN
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α)、干扰素γ(IFN
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γ)、粒细胞集落刺激生物因子(GM
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CSF)等细胞因子，可单独注射使用。
[0014]进一步的，对于所述药物用于诱导单个核细胞(PBMC)增殖为可以抑制、靶向杀伤HPV感染阳性细胞的生长的CTL细胞。
[0015]本专利技术中，所述HPV所引发的疾病是哺乳动物所患的HPV感染引起的疾病，所述哺乳动物可以为灵长类动物和/或啮齿类动物，特别是人。
[0016]本专利技术还涉及一种药物，所述药物的活性成分包括人乳头瘤病毒多肽；优选的，所述药物可以为注射剂。
[0017]在本专利技术中，给药上述本专利技术的肽段A或者药物的方式没有特别的限定，例如给药方式可以选自皮下给药、皮内给药、粘膜内给药、粘膜下给药、肌肉内给药和/或腹腔内给药等任意一种形式。
[0018]给药剂量取决于疾病的类型、严重度，以及取决于个体的特征(例如一般健康状态、年龄、性别、体重和对药物的耐受性)。
[0019]有益效果
[0020]本专利技术的人乳头瘤病毒多肽(其序列为：RKKRRQRRRAGQAEPDRAHYNIVTFCCKCDS)，其无须添加分子伴侣或佐剂等蛋白分子或HPV抗原，所述多肽可以直接负载DC细胞，高效诱导形成特异性CTL细胞，有效杀伤HPV，对感染HPV所导致的宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变、息肉、疣等病变有疗效。
附图说明
[0021]图1是试验组、对照组、空白组裸鼠瘤重(g)；注：*表示试验组裸鼠的瘤重显著性低于对照组及空白组(P<0.01)。
[0022]图2是预防组模型中试验组和对照组小鼠的瘤重(g)；注：*表示预防模型中的试验组小鼠的瘤重显著性低于对照组(P<0.01)。
[0023]图3是治疗组模型中试验组和对照组小鼠的瘤重(g)；注：*表示治疗模型中的试验组小鼠的瘤重显著性低于对照组(P<0.01)。
具体实施方式
[0024]为了进一步理解本专利技术，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所
获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]如无特殊说明，本专利技术实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
[0026]实施例1.体外诱导CTL细胞特异抑制、靶向杀伤HPV感染阳性细胞试验
[0027]使用Fmoc固相合成法人工合成试验组肽段A。
[0028]负载肽段A的CTL细胞的制备和收集：
[0029](1)用已加入肝素钠的抗凝管注射器采集供试者外周静脉全血50mL，用淋巴细胞分离液经2000r/min离心10min分离PBMC。
[0030](2)离心结束后吸出PBMC，尽量吸干净。
[0031](3)使用0.9％的生理盐水洗涤两次，用无血清淋巴细胞培养基调节细胞浓度至2
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2.5
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106个/ml。
[0032](4)将本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人乳头瘤病毒多肽，所述人乳头瘤病毒多肽具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。2.一种核酸，所述核酸能够编码权利要求1所述的人乳头瘤病毒多肽。3.一种质粒或微生物，所述质粒或微生物编码权利要求2所述的核酸能够表达权利要求1所述的人乳头瘤病毒多肽。4.权利要求1所述的人乳头瘤病毒多肽的用途，所述人乳头瘤病毒多肽用于制备治疗HPV所引发的疾病的药物中的应用。5.根据权利要求4所述的用途，所述HPV所引发的疾病为宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变、息肉、疣。6.权利要求4或5所述的用途，所述药物不添加选自白介素2(IL
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【专利技术属性】
技术研发人员：张菊，王静雪，孙乙天，李巍，
申请(专利权)人：深圳锦时生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：