一种抗体试剂、包括抗体试剂的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗体试剂、包括抗体试剂的试剂盒及其应用；抗体试剂包括外标抗体和内标抗体；外标抗体包括：CD45、CD3e、CD4、CD8、CD25、CD69、CD19、CD49b、CD11b、CD11c、F4/80、LY6C、LY6G、MHC

【技术实现步骤摘要】
一种抗体试剂、包括抗体试剂的试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及一种抗体试剂、包括抗体试剂的试剂盒及其应用，属于生物检测


技术介绍

[0002]流式细胞术是一种对细胞群体中的单个细胞或类似细胞大小的颗粒进行连续检测的技术，可以对细胞或颗粒的多个参数进行快速、高通量、精确的同时检测。目前，流式技术已广泛应用于血液学、免疫学、肿瘤学等科研或临床的相关检验领域，是一种重要的检测方法之一。疾病在发生过程中常常伴随着机体免疫水平的变化，如在肿瘤发生过程中，血液、脾脏和肿瘤组织中的主要免疫细胞亚群会发生明显变化，检测各种免疫细胞的改变差异，绘制免疫图谱差异，对揭示包括肿瘤在内的疾病的发病机制、疾病与机体免疫水平变化的关系、疾病治疗措施的有效性等多方面的研究具有重要的作用，并有望筛选到合适的预后指标。

技术实现思路

[0003]为了克服现有技术的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种抗体试剂，可以快速、准确地检测免疫细胞亚型并且包括活化状态。
[0004]本专利技术的第二个目的在于提供一种包括上述抗体试剂的试剂盒，可在一次检测反应中确认免疫细胞亚群的变化情况，对机体中免疫细胞的状态变化进行全面的分析。
[0005]本专利技术的第三个目的在于提供一种上述试剂盒的应用。
[0006]实现本专利技术的第一个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种抗体试剂，包括外标抗体和内标抗体；外标抗体包括：CD45、CD3e、CD4、CD8、CD25、CD69、CD19、CD49b、CD11b、CD11c、F4/80、LY6C、LY6G、MHC
‑
II、TC R
‑
γδ和FVS620中的至少一种；内标抗体包括Foxp3。
[0007]进一步地，外标抗体包括按重量份计的抗体：CD45 0.1
‑
0.5份；CD3e 0.1
‑
0.5份；CD4 0.1
‑
0.5份；CD8 0.1
‑
0.5份；CD25 2
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5份；CD69 2
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5份；CD19 0.1
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0.5份；CD49b 0.1
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0.5份；CD11b 0.1
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0.5份；CD11c 0.1
‑
0.5份；F4/80 2
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5份；LY6C 0.1
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0.5份；LY6G 0.1
‑
0.5份；MHC
‑
II 2
‑
5份；TCR
‑
γδ2
‑
5份和FVS620 0.05
‑
0.5份；内标抗体包括Foxp3 2
‑
5份。
[0008]进一步地，CD45、CD3e、CD4、CD8、CD25、CD69、CD19、CD49b、CD11b、CD11c、F4/80、LY6C、LY6G、MHC
‑
II、TCR
‑
γδ和Foxp3对应偶联的荧光标记分别为：APC
‑
cy7、BV570、BV750、PerCP
‑
eFluor710、PE、BV421、eFluor450、BV711、PE
‑
Cy5.5、BB515、BV605、PE/Dazzle594、BV650、AlexaFluor647、BV480和APC。
[0009]实现本专利技术的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种试剂盒，包括检测部和分析部；检测部中设有如上所述的抗体试剂。
[0010]进一步地，分析部包括数据分析模板，数据分析模板的逻辑为：
[0011]细胞门内去除黏连细胞；设置CD45+FVS620
‑
细胞门；从CD45+FVS620
‑
门内，设置CD45和SSC细胞门，分别圈选出淋巴细胞和髓系细胞的细胞门；从淋巴细胞门内，设置CD3e
和CD49b细胞门，分别检测CD3e+CD49b
‑
T细胞，CD49b+CD3e
‑
NK细胞，以及CD3e+CD49b+NKT细胞表达情况；从CD3e
‑
CD49b
‑
细胞门内，设置CD19+细胞门，检测B细胞表达情况；从淋巴细胞门内，设置CD3e和TCRγδ细胞门，其中CD3e+TCRγδ+检测TCRγδ细胞表达情况，CD3e+TCRγδ
‑
检测淋巴细胞表达情况；从CD3e+TCRγδ
‑
细胞门内，设置CD4和CD8细胞门，其中CD4+CD8
‑
检测Th细胞表达情况，CD4
‑
CD8+检测Tc细胞表达情况；从Th细胞内，设置CD25和Foxp3细胞门，CD25+Foxp3+检测Treg细胞表达情况；从Th细胞内，设置CD25和CD69细胞门，CD25+CD69
‑
检测晚期活化Th细胞表达情况，CD25
‑
CD69+检测早期活化Th细胞表达情况，CD25+CD69+检测过渡期活化Th细胞表达情况；从Tc细胞内，设置CD25和CD69细胞门，CD25+CD69
‑
检测晚期活化Th细胞表达情况，CD25
‑
CD69+检测早期活化Th细胞表达情况，CD25+CD69+过渡期活化Th细胞表达情况；从髓系细胞门内，设置CD11b和F4/80细胞门，CD11b+F4/80+检测巨噬细胞表达情况；从髓系细胞门内，设置CD11c和MHC
‑
II细胞门，CD11c+MHC
‑
II+检测DC细胞表达情况；从髓系细胞门内，设置LY6C和LY6G细胞门，LY6C high和LY6G
‑
检测LY6C high单核细胞表达情况，LY6C dim和LY6G
‑
检测LY6Cdim单核细胞表达情况，LY6C
‑
和LY6G+检测粒细胞表达情况。
[0012]实现本专利技术的第三个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种如上所述的试剂盒的应用，试剂盒用于检测细胞的表达。
[0013]进一步地，细胞包括白细胞、淋巴细胞、Th细胞、Tc细胞、Treg细胞、粒细胞、单核细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞、DC细胞、TCRγδT细胞、活化T细胞和髓系细胞中的至少一种。
[0014]进一步地，细胞为小鼠的细胞。
[0015]进一步地，检测细胞的表达的方法包括检测步骤和分析步骤；检测步骤包括：
[0016]细胞重悬和FC Block步骤：待测细胞加入FVS620死活染料孵育；加入St ain Buffer中和多余的FVS620死活染料，室温离心；用Human Fc Block的St ained Buffer进行RT孵育；
[0017]外标步骤：在经细胞重悬和FC Block步骤处理的细胞中加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体试剂，其特征在于包括外标抗体和内标抗体；所述外标抗体包括：CD45、CD3e、CD4、CD8、CD25、CD69、CD19、CD49b、CD11b、CD11c、F4/80、LY6C、LY6G、MHC
‑
II、TCR
‑
γδ和FVS620中的至少一种；所述内标抗体包括Foxp3。2.如权利要求1所述的抗体试剂，其特征在于，所述外标抗体包括按重量份计的抗体：CD45 0.1
‑
0.5份；CD3e 0.1
‑
0.5份；CD4 0.1
‑
0.5份；CD8 0.1
‑
0.5份；CD25 2
‑
5份；CD69 2
‑
5份；CD19 0.1
‑
0.5份；CD49b 0.1
‑
0.5份；CD11b 0.1
‑
0.5份；CD11c 0.1
‑
0.5份；F4/80 2
‑
5份；LY6C 0.1
‑
0.5份；LY 6G 0.1
‑
0.5份；MHC
‑
II 2
‑
5份；TCR
‑
γδ2
‑
5份和FVS620 0.05
‑
0.5份；所述内标抗体包括Foxp3 2
‑
5份。3.如权利要求1所述的抗体试剂，其特征在于，所述CD45、CD3e、CD4、CD8、CD25、CD69、CD19、CD49b、CD11b、CD11c、F4/80、LY6C、LY6G、MHC
‑
II、TCR
‑
γδ和Foxp3对应偶联的荧光标记分别为：APC
‑
cy7、BV570、BV750、PerCP
‑
eFluor710、PE、BV421、eFluor450、BV711、PE
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Cy5.5、BB515、BV605、PE/Dazzle594、BV650、Alexa Fluor647、BV480和APC。4.一种试剂盒，其特征在于，包括检测部和分析部；所述检测部中设有如权利要求1所述的抗体试剂。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述分析部包括数据分析模板，所述数据分析模板的逻辑为：细胞门内去除黏连细胞；设置CD45+FVS620
‑
细胞门；从CD45+FVS620
‑
门内，设置CD45和SSC细胞门，分别圈选出淋巴细胞和髓系细胞的细胞门；从淋巴细胞门内，设置CD3e和CD49b细胞门，分别检测CD3e+CD49b
‑
T细胞，CD49b+CD3e
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NK细胞，以及CD3e+CD49b+NKT细胞表达情况；从CD3e
‑
CD49b
‑
细胞门内，设置CD19+细胞门，检测B细胞表达情况；从淋...

【专利技术属性】
技术研发人员：公杰，童云丽，金立强，张俊宾，谭卿，
申请(专利权)人：广州睿贝医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：