C末端结合蛋白1作为分子靶标在抗脓毒血症中的应用制造技术

本发明专利技术公开了C末端结合蛋白1作为分子靶标在抗脓毒血症中的应用。本发明专利技术通过体外细胞模型实验和动物模型体内治疗实验结果：

【技术实现步骤摘要】
C末端结合蛋白1作为分子靶标在抗脓毒血症中的应用


[0001]本专利技术涉及抗脓毒血症特别是重症脓毒血症的新药研发及治疗，具体涉及C末端结合蛋白1(CtBP
‑
1)作为分子靶标在抗脓毒血症中的应用，属于生物医药


技术介绍

[0002]脓毒血症是一种由失控的感染
‑
宿主反应引起的危及生命的器官功能障碍1，一直是重症监护病房仅次于冠心病的第二大死亡原因。多年来基于细胞因子风暴反应机制研发了一大批以抗炎为主的抗脓毒血症新药，1500多个临床试验研究(包括35个临床III期试验)均以失败告终，导致目前临床应对脓毒血症仍无药可用的尴尬局面。始于2002年的全球拯救脓毒血症行动试图通过制定国际统一的临床诊断和治疗标准，力争5年内将脓毒血症死亡率降低25％，但这一预期目标至今尚未达到。因此，脓毒血症研究迫切需要新的思路，多学科立体探索脓毒血症分子机制，开发不同于传统抗炎的脓毒血症新疗法以降低死亡。
[0003]与经典的细胞因子风暴免疫理论不同，我们的前期工作从免疫代谢互作角度出发，解析了脓毒血症反应时相转换的表观遗传调控和免疫代谢共转换分子机制，细胞能量感知是其核心调控机制。前期研究表明：
①
能量变化及其感知调控脓毒血症炎症反应发生、发展及转归；
②
线粒体sirtuin 4(SIRT4)通过重新平衡糖酵解和葡萄糖氧化比率逆转脓毒血症的持续性免疫耐受状态，促进炎症解决；
③
在肿瘤细胞中，CtBP被发现可以通过靶向抑制SIRT4基因转录，与肿瘤发生发展相关。然而，CtBP1在脓毒血症发生发展中的作用至今未见报道，CtBP1与脓毒血症的相关性依然未知。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是：为提高脓毒血症患者生存率，将NAD/NADH能量感知蛋白C末端结合蛋白1(CtBP
‑
1)作为抗脓毒血症小分子药物新靶点，指导有效抗脓毒血症创新药的研发。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供了CtBP
‑
1作为分子靶标在筛选抗脓毒血症药物中的应用。
[0006]本专利技术还提供了CtBP
‑
1抑制剂在制备抗脓毒血症药物中的应用，所述CtBP
‑
1抑制剂包括直接或间接抑制CtBP
‑
1活性的试剂。
[0007]优选地，所述CtBP
‑
1抑制剂为直接抑制CtBP
‑
1活性的小分子化合物，所述小分子化合物为4
‑
甲硫基2
‑
氧代丁酸(MTOB)或其成盐物。
[0008]优选地，所述间接抑制CtBP
‑
1活性的试剂为能够降低免疫细胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(又称还原型辅酶I，NADH)的小分子化合物或提高免疫细胞内氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸比值(NAD/NADH)的小分子化合物。
[0009]优选地，所述提高氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸比值的小分子化合物包括乳酸脱氢酶或其激活剂。
[0010]优选地，所述乳酸脱氢酶激活剂包括小分子化合物丙酮酸钠。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0012](1)本专利技术通过脓毒血症炎症反应细胞模型和动物模型研究发现，直接抑制CtPB1活性或通过提高NAD/NADH比值间接抑制CtBP
‑
1活性均能显著提高脓毒血症小鼠生存率；因此，CtBP
‑
1可作为抗脓毒血症新药的靶点，筛选高亲和力的小分子CtBP
‑
1抑制剂和小分子NAD/NADH比值调控剂可望开发抗脓毒血症新药，为临床有效治疗脓毒血症，提高脓毒血症生存率提供新的治疗药物；
[0013](2)与已经完成的35个III期抗脓毒血症新药临床试验并证明无抗脓毒血症的药物相比，本专利技术中使用的小分子化合物直接抑制CtBP
‑
1活性或小分子化合物通过调控NAD/NADH比值间接抑制CtBP
‑
1活性均可显著提高脓毒血症生存率。
附图说明
[0014]图1：抑制CtBP
‑
1活性有效逆转脓毒血症免疫抑制反应；
[0015]图2：CtBP
‑
1从细胞浆向细胞核内转移依赖于脓毒血症炎症反应引起的细胞内NAD/NADH比值的动态变化；
[0016]图3：CtBP
‑
1抑制剂MTOB治疗显著提高小鼠脓毒血症生存率；
[0017]图4：丙酮酸钠显著提高免疫细胞内NAD/NADH比值，促进细胞浆CtBP
‑
1向细胞内聚集；
[0018]图5：丙酮酸钠治疗显著提高小鼠脓毒血症生存率。
具体实施方式
[0019]为使本专利技术更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
[0020]下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
[0021]其中，脓毒血症小鼠动物模型的构建方法如下：本专利技术实施例中脓毒血症为盲肠结扎加盲肠穿孔(CLP)后腹膜炎诱导的脓毒血症，参考Dejager等提出的方法构建CLP脓毒症小鼠模型。假手术仅开腹和暴露盲肠，不进行结扎和穿刺，术后所有小鼠均皮下注射1ml无菌生理盐水进行复苏；将小鼠随机分为以下4组：
[0022](1)生理盐水治疗组(CLP+saline)；
[0023](2)MTOB治疗组(CLP+MTOB)；
[0024](3)丙酮酸钠(SP)治疗组(CLP+SP)；
[0025](4)乳酸钠(SL)治疗组(CLP+SL)；
[0026]CLP造模6小时后，CLP+saline组注射等体积生理盐水，CLP+MTOB组腹腔注射MTOB(750mg/kg)，CLP+SP组腹腔注射SP(2g/kg)，CLP+SL组腹腔注射SL(2g/kg)，其中，MTOB、SP和SL均用生理盐水溶解配制成溶液。实验包括120只雄性动物，每组30只。
[0027]实施例1
[0028]本实施例通过构建脓毒血症炎症反应细胞模型进行体外生物学实验，结果表明CtBP
‑
1参与脓毒血症炎症反应调控过程。具体地，在脓毒血症炎症反应细胞模型中，用细菌内毒素(细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖(Lipoplysaccharide)，简称LPS)刺激人THP
‑
1单核细胞，1小时后炎症因子TNF
‑
αmRNA达到峰值，24小时后回归至刺激前水平，再次内毒素刺激后，TNF
‑
αmRNA水平无变化，细胞处于免疫抑制状态。而内毒素刺激12
小时后加入CtBP
‑
1抑制剂MTOB，至内毒素刺激24小时后，TNF
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CtBP
‑
1作为分子靶标在筛选抗脓毒血症药物中的应用。2.CtBP
‑
1抑制剂在制备抗脓毒血症药物中的应用，其特征在于，所述CtBP
‑
1抑制剂包括直接或间接抑制CtBP
‑
1活性的试剂。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述CtBP
‑
1抑制剂为直接抑制CtBP
‑
1活性的小分子化合物，所述小分子化合物为4
‑
甲硫基2
‑
氧代丁酸(M...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘铁夫，陶杰，徐丽，张晶璞，
申请(专利权)人：上海市公共卫生临床中心，
类型：发明
国别省市：