靶向结合ACE2蛋白的ACE2靶向肽及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向结合ACE2蛋白的ACE2靶向肽及其用途。ACE2靶向肽为多肽，氨基酸序列为LHRPHFHAHNNS；还包括由微生物、多聚体混合物的表面形成有ACE2靶向肽后的生物活性物质。本发明专利技术能够高效靶向ACE2蛋白，阻断新型冠状病毒刺突蛋白与ACE2蛋白的结合，进而起到抑制新型冠状病毒感染的作用。到抑制新型冠状病毒感染的作用。到抑制新型冠状病毒感染的作用。

【技术实现步骤摘要】
靶向结合ACE2蛋白的ACE2靶向肽及其用途
[0001]本申请为申请号“2021114798337”、申请日“2021/12/6”、专利技术名称为“一种靶向结合ACE2蛋白的ACE2靶向肽及其用途”的分案申请。


[0002]本专利技术属于生物医学领域的一种多肽及其用途，尤其是涉及了一种能够靶向结合血管紧张素转化酶2(ACE2)的多肽及其用途。

技术介绍

[0003]血管紧张素转化酶2(ACE2)是一种存在于多种细胞表面的蛋白质。新型冠状病毒表面的刺突蛋白能够靶向识别ACE2蛋白，通过刺突蛋白与ACE2的相互作用，新型冠状病毒得以进入人体细胞，从而引发肺炎病情。
[0004]通常，科研人员主要通过单克隆抗体来阻断ACE2蛋白与新冠病毒刺突蛋白的结合。但是，单克隆抗体的分子量较大，阻断效率较低，结构不稳定，在常温条件下容易失去活性。因此，单克隆抗体的生产、运输及保存均需要低温条件，成本较高。

技术实现思路

[0005]为了解决
技术介绍
中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种与ACE2蛋白具有高度亲和力并能够特异性靶向结合ACE2蛋白的多肽序列以及该多肽在阻断新型冠状病毒感染人体细胞领域中的用途。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案。
[0007]一、一种ACE2靶向肽：
[0008]所述ACE2靶向肽为多肽，氨基酸序列为FPHWHGNHKHNR，具体为SEQ ID No.1。
[0009]所述ACE2靶向肽的氨基酸序列为FPHWHGNHKHNR，具体如下表。
[0010]表1氨基酸序列表
[0011]代号氨基酸序列No.1FPHWHGNHKHNR
[0012]二、一种生物活性物质：
[0013]包含权利要求1所述ACE2靶向肽；
[0014]包括微生物、多聚体混合物，表面形成有所述ACE2靶向肽。
[0015]所述的多聚体混合物包括共价键连接的化合物或纳米颗粒，所述的微生物包括工程化的噬菌体。
[0016]若为纳米颗粒，表面修饰有ACE2靶向肽；
[0017]若为共价键连接的化合物，通过化合键表面修饰有ACE2靶向肽；
[0018]若为工程化的噬菌体，通过基因工程将ACE2靶向肽展示在噬菌体表面。
[0019]这样形成的生物活性物质具有与ACE2靶向肽相同的生物医学功能，即靶向结合ACE2蛋白，阻断病毒与ACE2蛋白的结合。
[0020]本专利技术ACE2靶向肽或者生物活性物质在制备药物中应用。
[0021]三、一种多聚核苷酸序列，能够编码所述ACE2靶向肽。
[0022]四、一种多聚核苷酸序列，，能够编码所述生物活性物质。
[0023]五、一种用于治疗疾病的多肽类药物，包含所述ACE2靶向肽。
[0024]ACE2靶向肽、生物活性物质或者多肽类药物在靶向结合ACE2蛋白中应用。具体是在阻断病毒与ACE2蛋白结合、调节血压中应用。
[0025]本专利技术获得的ACE2靶向肽，能够特异性结合ACE2蛋白，阻断新型冠状病毒表面刺突蛋白与ACE2的相互作用，进而抑制新型冠状病毒的感染。ACE2靶向肽可作为病毒阻断药物，在疾病治疗及疫情控制领域具有广泛的应用前景。
[0026]专利技术人利用噬菌体12肽库，针对ACE2蛋白进行4轮筛选，通过单克隆测序并探索验证，最终得到了能够特异性结合ACE2蛋白的多肽序列。
[0027]相比于常规能特异性结合ACE2蛋白的ACE2蛋白抗体等，本专利技术的ACE2靶向肽的优势在于：
[0028](1)序列短小，合成生产成本低；
[0029](2)多肽片段结构稳定，降低了运输保存的成本及难度；
[0030](3)可通过多种方式进行给药。为病毒感染阻断药物的研发开拓了新的思路。
[0031]本专利技术的有益效果是：
[0032]本专利技术的多肽能够高效靶向ACE2蛋白，阻断新型冠状病毒刺突蛋白与ACE2蛋白的结合，进而起到抑制新型冠状病毒感染的作用。
[0033]本专利技术所述多肽对ACE2蛋白具有特异性靶向结合能力，为临床上新型冠状病毒感染的治疗及相关疫情的控制提供了新的思路。
附图说明
[0034]图1为实施例1中利用噬菌体12肽库对ACE2蛋白进行4轮筛选的过程中，每轮的输出/投入比图。
[0035]图2为实施例2中利用DNAStar软件对测序结果进行分析后，出现频次较高的10种多肽序列及其相应的频次图。
[0036]图3为实施例2中利用MEGA软件对多肽序列保守性分析的结果图。
[0037]图4为实施例3中通过酶联免疫吸附实验探究展示有10种不同多肽序列的噬菌体与ACE2蛋白的亲和能力结果图。
具体实施方式
[0038]下面结合实施例和附图对本专利技术作进一步的阐述，以下实施例仅为本专利技术的优选实施例，并不限制本专利技术，对于本领域的技术人员来说，本专利技术可以有各种更改和变化，凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。
[0039]本专利技术的实施例如下：
[0040]实施例1
[0041]利用通过噬菌体展示技术所构建的噬菌体12肽库，针对ACE2蛋白特异性结合阳性
多肽进行四轮筛选。由于噬菌体12肽库的丰度大，在筛选过程中取10μL的噬菌体12肽库进行筛选，实验通过以下的操作步骤，成功获得了能够高效靶向ACE2蛋白的多肽序列。
[0042]1.1、复苏、培养宿主菌E.coil.ER2738
[0043]制备LB固态培养板，置于37℃培养箱中预热1小时。使用挑菌棒，蘸取融化的E.coil.ER2738菌液，“Z”字形涂于LB平板表面，置于37℃培养箱中培养12小时。在摇菌管中加入5mL含有四环素的液态LB培养基中，使用无菌枪头挑取平板中的单克隆菌落，并将枪头置于培养基中。将培养管置于37℃摇床中，220rpm振荡培养，直至细菌处于对数生长中期。
[0044]1.2、ACE2蛋白质的包被
[0045]将500μL ACE2蛋白溶液加入24孔板中，并将24孔板置于湿盒中。将湿盒置于翘板摇床上，4℃过夜包被。
[0046]1.3、ACE2蛋白质的封闭
[0047]使用移液枪将24孔板中的液体洗净，并在无菌滤纸上拍甩孔板以彻底除净液体。加入2mL 0.5％ BSA封闭液。将孔板置于翘板摇床上，封闭1小时。
[0048]1.4、洗涤
[0049]使用移液枪将24孔板中的液体洗净，并在无菌滤纸上拍甩孔板以彻底除净液体。加入1mL无菌PBST溶液，并将孔板置于翘板摇床上。5min后再次吸弃并拍甩孔板中的液体，加入1mL无菌PBST溶液，并将孔板置于翘板摇床上。重复该步骤6次，从而彻底洗净孔板中多余的封闭液。
[0050]1.5、噬菌体12肽库与ACE2蛋白质的结合
[0051]取无菌EP管，加入1mL 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ACE2靶向肽，其特征在于：所述ACE2靶向肽为多肽，氨基酸序列为FPHWHGNHKHNR。2.一种生物活性物质，其特征在于：包含权利要求1所述ACE2靶向肽；包括微生物、多聚体混合物，表面形成有所述ACE2靶向肽。3.根据权利要求2所述的一种生物活性物质，其特征在于：所述的多聚体混合物包括共价键连接的化合物或纳米颗粒，所述的微生物包括工程化的噬...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛传斌，鲍青，杨涛，杨明英，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：