NKT细胞、其衍生细胞及在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种NKT细胞、其衍生细胞及在制备抗肿瘤药物中的应用，所述NKT细胞命名为ABL

【技术实现步骤摘要】
NKT细胞、其衍生细胞及在制备抗肿瘤药物中的应用


[0001]本专利技术属于NKT细胞
，具体涉及一种NKT细胞、其衍生细胞及在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]癌症防治形势十分严峻，中国在0
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64岁国民中，每死亡4人，即有1人死于癌症。目前，中国每年用于癌症患者的治疗费用高达1000亿元，患者人均支出约7万元、晚期癌症的治疗基本要花掉患者家庭的全部积蓄。
[0003]以细胞治疗为主的精准医疗已经得到了高度关注。肿瘤治疗的常规手段主要有手术、放疗和化疗。这些治疗措施都具有巨大的副作用，而免疫治疗则相对安全，因此越来越受到重视。免疫治疗通过提升患者免疫系统的功能，利用免疫细胞去清除体内的癌细胞，从而达到治愈癌症的效果。免疫治疗主要又分抗体治疗和细胞治疗两种。目前最流行的PD
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1抗体治疗，通过阻断对CD8+T细胞的抑制来加强CD8+T细胞对癌细胞的杀伤功能。细胞免疫治疗则是一种过继性治疗，该技术首先对患者自身T细胞在体外进行基因工程加工和扩增，然后再注射回患者体内。这种加工后的T细胞称为嵌合抗原受体修饰的T细胞，或简称CAR
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T（chimeric antigen receptor
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modified T cells）。CAR
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T在治疗白血病，多发性骨髓瘤等血液肿瘤方面已经获得成功。并且国内已有两款CAR
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T细胞治疗药物获得CFDA批准。
[0004]虽然CAR
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T对血液肿瘤效果显著，但是CAR
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T对实体瘤疗效甚微。嵌合抗原受体T细胞（CAR
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T）治疗是抗肿瘤免疫治疗最热门的领域之一，也是近十年来免疫医学的重大突破。作为CAR
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T细胞的核心结构，CAR是一种基因工程加工的融合蛋白，可以在细胞表面表达并能特异性识别肿瘤抗原。它主要由细胞外单链抗体可变区（scFv）、铰链区、跨膜区和细胞内结构域组成。细胞外scFv结构一般由肿瘤抗原对应的抗体修饰而来。原则上，CAR
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T细胞识别抗原的方式不同于天然TCR结构，不依赖于MHC抗原呈递，有利于克服MHC表达下调引起的免疫逃逸，进一步拓展T细胞治疗的应用。目前，靶向CD19的CAR
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T细胞治疗在血液肿瘤治疗方面取得了显著进展。在全球范围内，已有八种CAR
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T产品获得批准，主要针对CD19和BCMA。在实体瘤方面，针对不同类型肿瘤的靶点已经开发出来，CAR
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T细胞疗法陆续进入临床试验。然而，大多数临床试验并未达到预期效果，主要障碍是肿瘤抗原的异质性、免疫逃逸和免疫抑制肿瘤微环境。尽管目前该领域的进展已被证明相当缓慢，但随着更多靶点的发现和未来临床试验的优化，实体瘤有望成为CAR
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T的主要治疗领域。
[0005]间皮素（MSLN）是一种细胞表面糖蛋白，在大多数恶性胸膜间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌和直肠癌中过表达，而正常组织表达很少。由于MSLN在正常组织和肿瘤组织之间差异表达，MSLN是肿瘤治疗的潜在靶点之一。在临床前研究中，Carl June的研究小组观察到CAR
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T通过靶向MSLN具有更大的抗肿瘤作用。随后，他们使用mRNA转染的CAR
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T评估了MSLN作为靶标在临床实践中的疗效，并报道了CAR
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T在乳腺癌患者中的安全性和有效性。另一项I期临床试验评估了靶向MSLN的CAR
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T治疗转移性胰腺导管腺癌的疗效。静脉滴注CAR
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T后，临床结果显示2例患者都出现对症反应，无进展生存期分别为3.8个月或5.4个月。并且治疗同样具
有良好的安全性。目前，已经对卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌等多种实体瘤的治疗进行了多项临床研究，多项数据表明了该疗法的可行性和安全性。
[0006]Natural killer T（NKT）细胞，又称自然杀伤T细胞，是一类表面既表达T细胞受体，又表达NK细胞受体的特殊T细胞亚群。NKT主要分成3种类型，I型和II型NKT细胞主要识别脂类或糖酯类分子，都可以被α
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半乳糖神经酰胺激活，其中I型NKT为恒定NKT（invariantNKT，简称iNKT），iNKT细胞的特点是其T细胞受体alpha链的可变区含有V24a恒定氨基酸序列。不含有V24a氨基酸序列的归为II型NKT。第三类型NKT不能被α
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半乳糖神经酰胺激活，识别的抗原主要为多肽，通常被称为NK
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like T细胞。
[0007]NKT细胞表面标志物主要有T细胞的标志物CD3以及NK细胞的表面标志物CD56，NKG2D等。这类NKT细胞遇到靶细胞后被激活并分泌穿孔素和颗粒酶，因而可以有效清除体内的多种肿瘤细胞以及病毒感染的细胞。

技术实现思路

[0008]专利技术目的：针对现有技术存在的问题，本专利技术目的是提供一种NKT细胞、其衍生细胞及在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0009]技术方案：为了达到上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案如下：本专利技术提供了一种NKT细胞，命名为ABL
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01，保藏于中国典型培养物保藏中心（武汉大学保藏中心），保藏日期为2023年1月11日，保藏编号为C202314。
[0010]所述NKT细胞含有如SEQ ID NO.1所示的基因序列。
[0011]所述NKT细胞来源于口腔癌术后康复的肿瘤患者外周血。
[0012]本专利技术还提供了上述NKT细胞的衍生细胞，将所述NKT细胞经过嵌合抗原受体修饰，构建CAR
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UNKT细胞，即为所述衍生细胞。
[0013]进一步的，所述衍生细胞是利用靶向间皮素的单链抗体基因对NKT细胞进行基因修饰。
[0014]进一步的，所述嵌合抗原受体包括依序连接的EF
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1α核心启动子、CD8 A前导体、MSLN scFv、CD8 A铰链、CD8 A跨膜结构域、共刺激域4
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1BB和CD3Z的细胞内结构域。优选的，所述MSLN scFv基因序列为SEQ ID NO.2所示序列。
[0015]本专利技术最后提供了所述的NKT细胞、所述的衍生细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0016]进一步的，所述肿瘤包括卵巢癌、肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、胰腺癌、胆管癌、前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、皮肤癌、胶质瘤、膀胱癌、食管癌、纤维肉瘤、B淋巴细胞白血病或T淋巴细胞白血病。
[0017]一种NKT细胞，其含有如SEQ ID NO.1所示的基因序列，或者含有与该序列同源性等于或高于90%的基因序列。
[0018]本专利技术发现的ABL
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01细胞属于第三类型的NKT，由于NKT不会引起排异反应，因此适合回输给不同的癌症患者，所以我们又称ABL...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种NKT细胞，命名为ABL
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01，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2023年1月11日，保藏编号为C202314。2.根据权利要求1所述的NKT细胞，其特征在于，所述NKT细胞含有基因序列同源性等于或高于90%的SEQ ID NO.1所示的基因序列。3.根据权利要求1所述的NKT细胞，其特征在于，所述NKT细胞来源于口腔癌术后康复的肿瘤患者的外周血。4.权利要求1所述的NKT细胞的衍生细胞，其特征在于，将所述NKT细胞经过嵌合抗原受体修饰，构建CAR
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UNKT细胞，即为所述衍生细胞。5.根据权利要求4所述的衍生细胞，其特征在于，所述衍生细胞是利用靶向间皮素（MSLN）的单链抗体基因对NKT细胞进行基因修饰。6.根据权利要求4所述的衍生细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：许卫东，焦峰，顾国生，
申请(专利权)人：南京爱比洛医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：