眼镜蛇科蛇磷脂酶A2在治疗糖尿病肾病上的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种药物组合，所述药物组合物包含眼镜蛇科蛇磷脂酶A2和其药学上可接受的载体。此药物组合物可以用来治疗糖尿病肾病患者的微量蛋白尿及尿白蛋白和尿肌酐比例升高的肾功能损伤指标，由此来控制和延缓肾脏病理性进展，改善肾功能，对糖尿病肾病的治疗有着极其重要的意义。极其重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
眼镜蛇科蛇磷脂酶A2在治疗糖尿病肾病上的应用
一、

[0001]本专利技术涉及一种治疗糖尿病肾病的药物组合物，属生物制药领域。
二、
技术介绍

[0002]糖尿病是以血糖增高为代表性的代谢紊乱性综合征，主要临床表现为多饮多尿体重减少。糖尿病肾病是因糖尿病而引起的肾小球硬化，属于糖尿病的慢性并发症，是引起终末期肾病的重要因素，治疗不及时将会导致患者肾功能衰竭，甚至导致患者死亡。因此临床需加强对糖尿病肾病的诊断，及早发现病症，并控制疾病恶化，保证患者生命健康安全。
[0003]糖尿病肾病患者早期临床症状不显著，可持续多年微量蛋白尿，当患者病症加重，出现明显蛋白尿或水肿现象时才会引起注意。其实，在患有多年糖尿病肾病的病人会有少量的血液白蛋白开始泄漏到尿液中，此时为慢性肾炎的第一阶段，称为微量白蛋白尿。尽管微量白蛋白尿也有可能与高血压、高血脂、动脉粥样硬化等相关心血管疾病存在一些关联，但当反应肾功能的其他指标蛋白如免疫球蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白、转铁蛋白等在尿中也发生明显升高时，侧可以证实肾功能已发生病理性变化。[1
‑
11][0004]肾小球功能减退时，β2微球蛋白将会进入尿液，导致其在尿液中含量显著上升，因此尿β2微球蛋白能直接反映肾小球功能。[12,13]血液中α1微球蛋白通过肾小球滤过膜后会在肾近曲小管中被重新吸收，只有微量会从尿液中排除，因此当尿液中α1微球蛋白含量升高时，能直接反映肾小管的重吸收功能和肾小球的滤过功能的异常[14,15,16]。转铁蛋白是血浆中含铁蛋白质，主要负责运载铁元素，转铁蛋白分子所带负电荷较少,易通过肾小球的电荷屏障,尤其在糖尿病肾病早期,滤过膜负电荷减少,而滤孔尚无变化时,尿中转铁蛋白可较白蛋白出现更早,可作为诊断早期肾脏病变的一项更为敏感指标,当人体肾功能出现紊乱时，其含量将会明显升高[17
‑
21]。免疫球蛋白G侧是人体自身免疫反应的一个直接指标。因此，人体尿液中微量白蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白、转铁蛋白、免疫球蛋白G等相关肾功能指标能直接反映人体的肾功能及肾脏病变状况。当肾脏发生病变时，尿微量白蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白、转铁蛋白、免疫球蛋白G含量将会明显升高。有实验证据表明:尿中微量白蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白、转铁蛋白、免疫球蛋白G等多种微量蛋白的同时检测为临床提供了更可靠的参数,克服了各种微量蛋白出现的不均一性。[1
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3][0005]在对糖尿病肾病的进一步研究中，Lemann等证实尿白蛋白与尿肌酐的比值能准确的反应肾脏蛋白的排泄量，能对糖尿病性肾病早期作出诊断；[22]李小明等也通过临床研究证实尿白蛋白与尿肌酐的比值是糖尿病性肾病早期诊断的一个敏感指标。[23]三、
技术实现思路

[0006]磷脂酶A2(Phospholipase A2，PLA2)是一类分布广泛的酶家族，存在于各种动物组织，尤其在蛇毒等动物的毒液和哺乳动物的胰脏分泌液中。它们都具有一种共同的基本作用，即以生物膜磷脂为天然底物，催化甘油磷脂sn
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2位上的酰键发生水解反应，产生溶血磷脂和脂肪酸，参与磷脂的代谢。蛇毒磷脂酶A2在结构和水解功能上与哺乳动物的分泌型
PLA2非常相似。
[0007]我们的动物模型研究首次发现，眼镜蛇科的蛇磷脂酶A2可以抑制链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠糖尿病肾病的微量蛋白尿，扭转尿微量白蛋白与尿肌酐比值的升高，改善糖尿病肾病的肾功能受损。眼镜蛇科的蛇磷脂酶A2，包括中华眼镜蛇，孟加拉眼镜蛇、印度眼镜蛇毒磷脂酶A2、银环蛇磷脂酶A2；金环蛇磷脂酶A2，都达到了几乎一致的治疗大鼠糖尿病肾病微量蛋白尿及尿白蛋白与尿肌酐的比值升高的肾功能损伤的实验结果。在蛋白结构上，它们都属于IA型PLA2，此结构主要来自眼镜蛇、金环蛇和银环蛇，分子量为13～14KD，分子内含7个二硫键，它们都具有典型的I型PLA2的11位和77位的特征二硫键，[24，25]在氨基酸序列上它们的成熟蛋白具有高度的同源性，具有118或119个氨基酸残基，共同的功能结构使得它们具有共同的生理活性。它们成熟蛋白的氨基酸序列(FASTA)分别如下：
[0008]中华眼镜蛇Najaatra磷脂酶A2(SEQ ID No.1)
[0009]nlyqfknmiqctvpsrswwdfadygcycgrggsgtpvddldrccqvhdhcyneaekisgcwpysktysyecsqgtltckggnnacaaavcdcdrlaaicfagapynnnnynidlkarcq
[0010]银环蛇Bungarusmulticinctus磷脂酶A2(SEQ ID No.2)
[0011]nlyqfknmivcagtrpwigyvnygcycgaggsgtpvdeldrccyvhdncygeaekipgcnpktktysytctkpnltctdaagtcarivcdcdrtaaicfaaapyninnfmisssthcq
[0012]孟加拉眼镜蛇Najakaouthia磷脂酶A2(SEQ ID No.3)
[0013]nlyqfknmiqctvpsrswwdfadygcycgrggsgtpvddldrccqvhdncyneaekisgcwpyfktysyecsqgtltckggnnacaaavcdcdrlaaicfagapynnnnynidlkarcq
[0014]印度眼镜蛇Najanaja磷脂酶A2(SEQ ID No.4)
[0015]nlyqfknmvqctvpnrswwdfadygcycgrggsgtpvddldrccqvhdncygeaekisrcwpyfktysyecsqgtltckggnnacaaavcdcdrlaaicfagapyndnnynidlkarcq
[0016]金环蛇Bungarusfasciatus磷脂酶A2(SEQ ID No.5)
[0017]nlyqfknmiecagtrtwlayvkygcycgpggtgtpldeldrccqthdhcydnakkfgncipylktyvytcnkpditctgakgscgrtvcdcdraaaicfaaapynlanfgidkekhcq
[0018]本专利技术解决的另一个问题是在生产上，因为本专利技术所公开的分子具有明确的氨基酸序列，故能够通过基因工程来生产，解决了蛇毒资源稀缺的实际问题；即使如果继续通过天然蛇毒的分离纯化来得到磷脂酶A2，因为过程中由于有了明确的氨基酸序列而更容易达到质量和纯度上的控制，这为蛇毒中单体成分的药品开发奠定了必要的基础。
[0019]四、实施方式
[0020]以下结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，但以下实施例并非对本专利技术的限定；同时凡依照本专利技术公开内容所进行的本领域等同替换，均属于本专利技术的保护范围。
[0021]实施案例：
[0022]案例A:中华眼镜蛇磷脂酶A2(SEQ ID No.1)的获得
[0023]对中华眼镜蛇粗毒进行分离纯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种治疗病人糖尿病肾病的药物组合物，通过使用该组合物含有的治疗有效量的眼镜蛇科蛇磷脂酶A2，及药物可接受载体，用它们的组合物来治疗糖尿病肾病。2.根据权利要求(1)所述的糖尿病肾病是指糖尿病患者的蛋白尿及肾功能的损伤，它的特征为，它们是糖尿病肾病产生的微量蛋白尿，及衡量肾功能的尿白蛋白和尿肌酐之比升高至超过医学所规定的正常范围。3.根据权利要求(2)所述的微量蛋白尿是指包括由白蛋白，疫球蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白、转铁蛋白等泄漏到尿液中导致以上蛋白在尿液中含量升高至超过医学上定义的正常范围而导致的蛋白尿。4.根据权利要求(3)所述的蛋白尿，它的特征是指包括由白蛋白，疫球蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白、转铁蛋白中其中一个、多个、或全部蛋白指标升高而导致的蛋白尿。5.根据权利要求(2)所述的蛋白尿还包括24小时尿蛋白升高超过正常范围所导致的蛋白尿。6.根据权利要求(1)所述眼镜蛇科蛇磷脂酶A2，其特征在于，它是具有SEQ ID No.1
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SEQ ID No.5所示的成熟蛋白氨基酸序列的眼镜蛇科蛇磷脂酶A2；或分别与SEQ ID No.1
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SEQ ID No.5中的眼镜蛇科蛇磷脂酶A2具有70％或以上同源性的成熟蛋白，该成熟蛋白的功能与SEQ ID No.1
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SEQ ID No.5所示的氨基酸序列的眼镜蛇科蛇磷脂酶A2功能相同或相似。7.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：祁展楷，祁海亚特，
申请(专利权)人：江苏毫末医药生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：