多价β-冠状病毒疫苗、其设计和用途制造技术

用于预防CoV感染的多价疫苗包括衍生自在CoV基因组内编码的抗原的多于一种蛋白抗原。衍生自在CoV基因组内编码的抗原的所述多于一种蛋白抗原中的至少一种是蛋白抗原、RNA编码的遗传信息、DNA编码的遗传信息或遗传载体内的遗传信息。的遗传信息。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多价
β
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冠状病毒疫苗、其设计和用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年7月22日提交的临时申请号63,055,139的优先权，并且是所述临时申请的非临时申请，所述申请以引用方式整体并入本文。
[0003]领域
[0004]本公开涉及β
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冠状病毒疫苗，尤其是设计和组装特定抗原以诱导针对β
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冠状病毒感染的免疫反应。
[0005]背景
[0006]冠状病毒(CoV)分为四个属：α、β、γ和δ冠状病毒。β
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CoV是有包膜的正链RNA(30kb)病毒，能够感染哺乳动物，通常是蝙蝠和啮齿动物，但已知许多β
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CoV也可感染人。病毒经由血管紧张素转换酶2(ACE2)进入宿主细胞。在它们的四种主要结构蛋白中，S蛋白介导细胞受体结合。它分为由呋喃切割位点分隔的S1和S2链。SARS受体结合结构域(RBD)位于S1中，并且膜融合区段位于S2中。其他主要蛋白质包括M、N和包膜(E)蛋白。
[0007]人和动物感染CoV通常会引起持续时间较短的轻度至中度上呼吸道疾病。例外情况是严重急性呼吸系统综合征(SARS
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1)、中东呼吸系统综合征(MERS)和SARS
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CoV
‑
2(SARS
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2)(也称为COVID
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19)，其特征在于严重并且通常是致命的症状。2012年9月，沙特阿拉伯报告了首例MERS病例，2014年和2015年发生了大规模爆发，随后出现了小规模的季节性爆发。迄今为止，已观察到2,494例确诊的MERS病例，导致858名患者死亡(34.3％致死率；WHO)。据美国疾病控制中心(CDC)报告，截至2020年4月16日，仅在美国就估计有632,000例病例报告，并且估计有31,000例死亡，致死率为4.9％。SARS
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2对人具有高度传染性，Ro估计为约3(Liu 2020)。世界卫生组织(WHO)于2020年1月30日宣布SARS
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2全球大流行为全球卫生紧急事件。
[0008]在美国，所有50个州、华盛顿特区和至少4个地区都报告了SARS
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2。长期护理机构和无家可归者收容所的疫情凸显了在聚集环境中暴露和感染的风险。直接或通过飞沫在人与人之间传播被认为是SARS
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2的主要传播方式。
[0009]虽然SARS
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2大体表现为轻微疾病，最常见的症状是发烧、咳嗽或胸闷和呼吸困难，但所述疾病对老年和多病患者来说是最致命的。严重的并发症包括肺炎、高凝血、多器官功能失调(包括心肌损伤和肾脏)并最终导致死亡。在儿童中，多系统炎性综合征(MIS
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C)是一种严重的疾患，其中一些身体部位，诸如心脏、血管、肾脏、消化系统、大脑、皮肤或眼睛会发炎。
[0010]尚无针对SARS
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2的特定治疗方法，但正在研究中。目前的建议是观察无症状或轻症患者。防止疾病进一步传播的最佳方法是开发特定疫苗。除了灭活病毒疫苗外，还正在研究工程疫苗的不同方法，重点是基于RNA和病毒载体的疫苗以及基因疫苗。大多数这些疫苗使用SARS
‑
2刺突(S)蛋白作为主要抗原。已经发布了来自动物实验和早期临床试验的数据。需要初免/加强免疫方案来诱导强烈的中和抗体反应。然而，与多剂量或需要加强免疫的方案相比，许多患者更喜欢单剂量方案。需要研究具有多于一个单一抗原的工程疫苗在单次施用后是否进一步增强免疫保护。
[0011]CoV诱导体液和细胞免疫反应。动物以及临床研究证明，SARS
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1和MERS感染会产生针对S蛋白的强效中和抗体反应。此外，SARS
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2的体液反应类似地以S蛋白为目标，其他抗体与M蛋白结合。M蛋白也充当CD8
+
T细胞反应的焦点。抗SARS
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2CD4
+
T细胞主要同时识别N和S抗原。灭活病毒疫苗本质上是多价的。它们可提供比单一S蛋白疫苗更强的SARS
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2反应。动物研究表明，灭活病毒疫苗容易诱导Th2型，可能是抗N疾病增强的免疫反应。使用基于S的组分疫苗也观察到疾病增强，但它们在病毒载体抗S疫苗中并不明显。FDA更倾向于能够证明Th1型T细胞极化以及强中和抗体的SARS
‑
2疫苗。
[0012]SARS相关(SARSr)病毒的总体突变率已计算为0.1个突变/代。动物SARSr病毒S受体结合结构域的微小变化可增强与人ACE2的结合，并且因此有助于跳转到人群中。比对S蛋白序列揭示了整个基因的显著差异，在S2区内具有显著的稳定区域，而SARSr病毒的M和N总体上显示出显著较低的突变率。因此，多价疫苗将针对SARS
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2变体提供更好的保护。
[0013]与其他疫苗系统相比，目前设计为Ad载体的疫苗已反复证明具有更高和更持久的免疫原性。最小修饰的早代(eg)Ad载体携带大量内源性Ad基因，针对这些基因可诱导强烈的体液和细胞免疫反应。因此，使用egad疫苗的初免/加强疫苗接种方案依赖于第二剂不同设计的疫苗。然而，在最近的一项临床试验中，一种动物来源的的eg Ad疫苗在加强注射后增加了免疫反应。通过完全缺失(fd)所有内源性Ad基因的Ad载体，可最有效地减少抗Ad反应。此类fdAd载体增强了转基因表达、延长了体内维持并提高了免疫原性。fdAd基因组的包装信息最初是与第二病毒构建体一起递送的，即杂合杆状病毒
‑
腺病毒或辅助病毒，这导致了具有复制能力的Ad(RCA)或辅助病毒的污染。
[0014]为了避免这些问题，已经开发了辅助病毒非依赖性技术。辅助病毒非依赖性疫苗通过完全缺失所有内源基因并包装到稀有定型(诸如人Ad6)的衣壳中，最大限度地减少了预先存在的和诱导的干扰性抗Ad反应。当前的辅助病毒非依赖性技术建立在两个可独立修改的组件之上——(i)能够接受高达33kb的转基因构建体的基础载体模块，其携带ITR和包装信号，以及(ii)基于Ad2、Ad5、Ad6和Ad35定型的不同环状包装质粒(pPaC2/5/6和pPaB35)。基础载体模块移除了所有Ad基因，并替换为衍生自人管家基因5
‑
氨基咪唑
‑4‑
羧酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶基因(ATIC)片段的大小补偿填充片段。在环状包装质粒中，左侧的ITR、包装信号以及E1、E3和蛋白IX基因缺失。使用HEK
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293衍生的HTP7/Q7包装细胞，通过优化的一周共转染方案封装载体模块。希望使用相同的技术来提供具有强大免疫原性的CoV疫苗，并且需要单剂量即可提供针对多种CoV的保护。

技术实现思路

[0015]在一个实施方案中，本公开提供了多价疫苗。根据本公开的实施方案，用于预防CoV感染的多价疫苗包含多于一种蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于预防CoV感染的多价疫苗，其包含衍生自在CoV基因组内编码的抗原的多于一种蛋白抗原。2.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中衍生自在CoV基因组内编码的抗原的所述多于一种蛋白抗原中的至少一种选自由以下组成的组：蛋白抗原、RNA编码的遗传信息、DNA编码的遗传信息、遗传载体内的遗传信息和它们的组合。3.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种是在CoV颗粒上或由CoV颗粒表达的蛋白质。4.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种是在感染CoV的细胞上或由其表达的蛋白质。5.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种是从生产细胞获得的蛋白质，所述生产细胞用CoV遗传信息转染以产生所述蛋白质。6.根据权利要求5所述的多价疫苗，其中所述生产细胞是真核细胞。7.根据权利要求5所述的多价疫苗，其中所述生产细胞是细菌。8.根据权利要求5所述的多价疫苗，其中所述生产细胞是真菌。9.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种是RNA编码的遗传信息，其编码所述多于一种蛋白抗原中的至少一种的表达。10.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种是DNA编码的遗传信息，其编码所述多于一种蛋白抗原中的至少一种的表达。11.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种是遗传载体内的遗传信息。12.根据权利要求11所述的多价疫苗，其中所述遗传载体是病毒遗传载体。13.根据权利要求12所述的多价疫苗，其中所述病毒遗传载体选自由以下组成的组：腺病毒相关病毒载体、腺病毒载体、痘苗病毒载体、多瘤病毒载体、α
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病毒载体和它们的组合。14.根据权利要求12所述的多价疫苗，其中所述病毒遗传载体是细菌。15.根据权利要求11所述的多价疫苗，其中所述遗传载体是细菌遗传载体。16.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中所述CoV是β
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CoV。17.根据权利要求16所述的多价疫苗，其中所述β
‑
CoV选自由SARSr病毒、MERS病毒和它们的组合组成的组。18.根据权利要求17所述的多价疫苗，其中所述β
‑
CoV是SARSr病毒。19.根据权利要求18所述的多价疫苗，其中所述SARSr选自由SARS
‑
1病毒、SARS
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2病毒和它们的组合组成的组。20.根据权利要求19所述的多价疫苗，其中所述SARSr是SARS
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2病毒。21.根据权利要求17所述的多价疫苗，其中所述β
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CoV是MERS病毒。22.根据权利要求1所述的多价疫苗，其包含至少三种不同的蛋白抗原，所述蛋白抗原衍生自在CoV基因组内编码的抗原。23.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种衍生自选自由以下组成的组的蛋白质：CoV刺突(S)蛋白、CoV膜(M)蛋白、CoV核衣壳(N)蛋白、CoV包膜(E)蛋白、复制酶1a/1b蛋白以及ORF 4、9、10和13编码的蛋白。24.根据权利要求23所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种衍生
自CoV S蛋白。25.根据权利要求23所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种衍生自CoV M蛋白。26.根据权利要求23所述的多价疫苗，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种衍生自CoV N蛋白。27.根据权利要求1所述的多价疫苗，其中所述疫苗包含至少一种衍生自CoV S蛋白的蛋白抗原和至少一种衍生自选自由CoV M蛋白、CoV N蛋白和CoV E蛋白组成的组的蛋白质的蛋白抗原。28.一种刺激受试者的免疫反应的方法，其包括向所述受试者施用有效量的组合物，所述组合物包含衍生自在CoV基因组内编码的抗原的多于一种蛋白抗原。29.根据权利要求28所述的方法，其中衍生自在CoV基因组内编码的抗原的所述多于一种蛋白抗原中的至少一种选自由以下组成的组：蛋白抗原、RNA编码的遗传信息、DNA编码的遗传信息、遗传载体内的遗传信息和它们的组合。30.根据权利要求28所述的方法，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种是在CoV颗粒上或由CoV颗粒表达的蛋白质。31.根据权利要求28所述的方法，其中所述多于一种蛋白抗原中的至少一种是在感染CoV的细胞上或由其表达的蛋白质。32.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：乌韦，
申请(专利权)人：格雷菲克斯公司，
类型：发明
国别省市：