具有抗癌活性的免疫调节蛋白-siRNA复合物制造技术

根据本发明专利技术的融合蛋白

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有抗癌活性的免疫调节蛋白
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siRNA复合物


[0001]本专利技术涉及一种具有抗癌活性的免疫调节蛋白
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siRNA复合物，更具体地，涉及一种免疫调节蛋白
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siRNA复合物，其特征在于，通过抑制癌细胞的免疫逃避机制来增加巨噬细胞的吞噬作用，从而诱导癌细胞的死亡。

技术介绍

[0002]在过去的几年里，癌症一直占据死亡原因的第一位。为了治疗这样的癌症，开发出了各种技术。作为一个例子，有阿霉素或紫杉醇等抗癌剂，具有抑制癌细胞生长或使其死亡的效果。然而，由于这样的抗癌剂对癌细胞和正常细胞均显示出毒性，与抗癌效果相比副作用严重，因此存在难以将其用作治疗剂的问题。
[0003]为了解决上述问题，正在积极进行使用siRNA的抗癌剂的开发。众所周知，siRNA通过抑制特定靶基因的表达量，起到干扰相关基因的活性的作用。因此，如果积极利用siRNA的功能，期待能够开发出将副作用最小化，同时抗癌效果优异的治疗剂。对此，开发了靶向癌基因(oncogene)、免疫细胞、肿瘤微环境调节因子等各种基因的siRNA，但存在siRNA本身在体内无法稳定存在，并且被递送到细胞内的效率明显较低的缺点。
[0004]为了解决这一问题，已经研究了使用脂质体(liposome)、壳聚糖纳米粒子(chitosan nanoparticle)、聚乳酸
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羟基乙酸共聚物(poly lactic
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co
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glycolic acid，PLGA)等各种物质的纳米粒子作为递送siRNA的递送载体(carrier)。与仅使用siRNA相比，上述纳米粒子虽然可以增加稳定性和递送性，但由于纳米粒子本身是外部物质，因此有在体内引发毒性的缺点，并且有即使该物质进入细胞内，也会在细胞内的核内体/溶酶体中被降解，基因转染(transfection)效率显著降低的缺点。因此，最近主要对通过使用体内存在的各种物质(蛋白质、外泌体(exosome)、抗体等)作为递送载体，在减少体内毒性的同时，有效地将siRNA递送到癌细胞内的材料进行研究。尽管做出了很多努力，但由于物质的递送有效性和机制相关问题，至今还未实现商用化。例如，外泌体(exosome)在体内容易被降解和崩解，因此在有效递送药物方面存在局限，而抗体由于其相对较大的尺寸而存在不能有效地将siRNA递送到细胞内的问题。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1：韩国授权专利公报第10
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1977532号
[0008]专利文献2：韩国公开专利公报第10
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2018
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0134424号

技术实现思路

[0009]专利技术所要解决的问题
[0010]本专利技术是针对上述问题而提出的，本专利技术的目的在于，提供一种具有优异抗癌活性的融合蛋白
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siRNA复合物，其通过癌细胞受体特异性递送至癌细胞，从而通过双重抑制癌细胞的免疫逃避机制来提高巨噬细胞的吞噬作用。
[0011]本专利技术是针对上述问题而提出的，本专利技术的目的在于，提供一种用于治疗或预防癌症的组合物，其将融合蛋白
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siRNA复合物作为有效成分。
[0012]用于解决问题的方案
[0013]为达到上述目的，本专利技术提供一种融合蛋白
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siRNA复合物，其特征在于，上述融合蛋白
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siRNA复合物包括：免疫调节融合蛋白(A)；以及siRNA(B)；且上述免疫调节融合蛋白(A)由SIPRα蛋白和被溶酶体降解酶切割的连接肽结合而成。
[0014]上述SIPR蛋白由选自SEQ ID No.3、5、7、9和11中任何一个表示，上述连接肽能够以SEQ ID NO.13表示。
[0015]上述免疫调节融合蛋白(A)可以由SEQ ID NO.1表示。
[0016]上述siRNA可以是CD47 siRNA。
[0017]上述siRNA可以由SEQ ID NO.17或18表示。
[0018]上述融合蛋白
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siRNA复合物的平均分子量可以是20kDa至60kDa。
[0019]为了实现上述的其他目的，本专利技术提供一种用于治疗或预防癌症的药物组合物，其将上述融合蛋白
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siRNA复合物作为有效成分。
[0020]上述癌症可以是由脑肿瘤、脊髓肿瘤、视网膜母细胞瘤、口腔癌、鼻腔癌、鼻窦癌、咽癌、喉癌、颈癌、头颈癌、黑色素瘤、皮肤癌、乳腺癌、甲状腺癌、恶性肾上腺肿瘤、内分泌癌、肺癌、胸膜肿瘤、呼吸道癌、食管癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、肛门癌、肝癌、胆道癌、胰腺癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、阴茎癌、宫颈癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、卵巢癌、急性和慢性白血病、恶性淋巴瘤、包括多发性脊髓病的血癌、骨肿瘤、软组织肿瘤、小儿白血病以及小儿癌症组成的组中的一种以上。
[0021]专利技术效果
[0022]根据本专利技术的融合蛋白
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siRNA复合物被在癌细胞中特异性过表达的受体吸收到细胞内，并且通过双重控制癌细胞的免疫防御功能，从而具有最大化的抗癌活性。另外，由于细胞毒性少且递送效率高，具有几乎无副作用的优点。
[0023]此外，其不直接诱导癌细胞死亡，而是抑制癌细胞的免疫，使其通过患者的自身免疫(巨噬细胞的吞噬作用)被清除，因此对身体的负担较轻。
附图说明
[0024]图1是示意性地示出融合蛋白
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siRNA复合物的结构的图。
[0025]图2是示意性地示出融合蛋白
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siRNA复合物结构的作用机制的图。免疫调节蛋白和siRNA抗癌剂通过1)在蛋白质水平和2)在mRNA水平；对癌细胞的相同受体进行双重控制，从而使癌症免疫治疗效率最大化。
[0026]图3是从实施例1制备的筛选的转染体中获得菌落(colony)后，进行PCR并通过凝胶图像系统(Gel documentation)分析的结果。
[0027]图4是将从实施例1中分离、纯化的融合蛋白的结合，通过SDS
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PAGE凝胶确认的结果，泳道(lane)1是显示对照组(control)的结果，泳道2是显示融合蛋白(SIPRα
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linker)的结果。
[0028]图5是将从实施例2中分离、纯化的融合蛋白
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siRNA复合物通过琼脂糖凝胶(agarose gel)确认的结果。
[0029]图6是将从实施例2中分离、纯化的融合蛋白
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siRNA复合物通过HPLC分析的结果。
[0030]图7是将从实施例2中分离、纯化的融合蛋白
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siRNA复合物用木瓜蛋白酶处理后，通过HPLC分析的结果。
[0031]图8是用于确认实施例2制备的融合蛋白
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种融合蛋白
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siRNA复合物，其特征在于，包括：免疫调节融合蛋白(A)；以及siRNA(B)，所述免疫调节融合蛋白(A)由SIPRα蛋白和被溶酶体降解酶切割的连接肽结合而成。2.根据权利要求1中所述的融合蛋白
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siRNA复合物，其特征在于，所述SIPRα蛋白为选自SEQ ID NO.3、5、7、9和11中任何一个所表示的氨基酸序列，所述连接肽以SEQ ID NO.13表示。3.根据权利要求1中所述的融合蛋白
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siRNA复合物，其特征在于，所述免疫调节融合蛋白(A)以SEQ ID NO.1表示。4.根据权利要求1中所述的融合蛋白
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siRNA复合物，其特征在于，所述siRNA为CD47 siRNA。5.根据权利要求1中所述的融合蛋白
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siRNA复合物，其特征在于，所述siRNA以SEQ ID NO.17或18...

【专利技术属性】
技术研发人员：金善花，权翊赞，金仁山，金光明，梁有秀，高英智，
申请(专利权)人：韩国科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：