本发明专利技术公开了拉莫三嗪完全抗原及其在拉莫三嗪抗体制备和免疫法检测中的应用。所述拉莫三嗪完全抗原的结构如式1所示式1。本发明专利技术还公开了用该完全抗原制备的抗拉莫三嗪单克隆抗体，产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞以及用于检测拉莫三嗪类似物的检测卡和检测试剂盒。本发明专利技术公开了检测拉莫三嗪类似物的ELISA法和荧光免疫层析法，其中荧光免疫层析法操作简单、检测时间短、成本低、特异性高、重复性好。重复性好。重复性好。
【技术实现步骤摘要】
拉莫三嗪完全抗原和抗体及其制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及精神类药物的检测；具体地说，本专利技术涉及拉莫三嗪完全抗原、利用该完全抗原获得拉莫三嗪单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测拉莫三嗪类似物中的应用。
技术介绍
[0002]拉莫三嗪(Lamotrigine，LTG)的开发是最早的合理抗癫痫药物(AED)开发尝试之一。20世纪70年代，作为发现新的AEDs的合理方法的一部分，首次合成了LTG，其依据是观察到许多现有的AEDs是叶酸拮抗剂。但作为一种苯三嗪，拉莫三嗪在化学上与任何现有的AEDs无关。1993年3月，食品药物管理局(FDA)询委员会建议LTG在美国销售。与经典抗癫痫药相比，拉莫三嗪具有耐受性良好、酶诱导和酶抑制不明显、妊娠期毒性较小等优点。拉莫三嗪在肠道内吸收迅速、完全，口服生物利用度接近100％，半衰期在24.1至35小时之间，但可能通过酶诱导和抑制药物改变。患者的体重、年龄、合并用药、基因多态性等均会对拉莫三嗪的药代动力学产生影响，造成药物在不同个体间的差异较大。根据1994至2010年《中国医院知识数据库》中拉莫三嗪不良反应文献检索结果，LTG导致的不良反应包括皮肤损害、血液系统损害、中枢及神经系统损害、消化系统不良反应和诱发自身免疫性疾病及致畸等。综上所述，为了进一步优化和规范拉莫三嗪在不同人群中的使用，根据患者的病理生理情况调整给药方案，有必要对特定人群进行拉莫三嗪血药浓度监测(therapeutic drug monitoring，TDM)。
[0003]目前拉莫三嗪的检测主要包括液相色谱与质谱联用法(HPLC
‑
MS)，高效液相色谱等，仪器昂贵，操作复杂且耗时。荧光定量免疫层析技术，是结合免疫荧光技术和传统免疫层析技术相优点的新型定量检测技术。该技术操作灵活简便、成本较低、反应时间短，能做到及时定量检测。能及时为医师对病人调整用药提高数据支撑，达到个体化给药的目的，确保疗效的同时保证了用药安全性。
技术实现思路
[0004]本专利技术的技术目的是为了克服以上技术问题，提供一种操作简单、检测时间短、成本低、特异性高、重复性好的拉莫三嗪完全抗原、利用该完全抗原获得拉莫三嗪单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测拉莫三嗪类似物中的应用。
[0005]本专利技术的技术目的通过以下技术方案实现：
[0006]一种拉莫三嗪完全抗原，所述完全抗原具有式1所示的结构：
[0007][0008]其中，Protein为蛋白质载体。
[0009]一种制备权利要求1所述拉莫三嗪完全抗原的方法，所述方法包括步骤：
[0010](1)将拉莫三嗪半抗原与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)连接，以制得所述的拉莫三嗪完全抗原；
[0011](a)使拉莫三嗪半抗原用N,N
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二甲基甲酰胺(DMF)溶解为A液；
[0012](b)将步骤(a)得到的A液、25
‑
25％戊二醛加入至BSA/OVA溶液中，室温反应1.5
‑
2.5h，制得拉莫三嗪
‑
BSA/OVA偶联物，即拉莫三嗪完全抗原。
[0013]一种拉莫三嗪完全抗原的用途，其用于制备拉莫三嗪的特异性单克隆抗体。
[0014]一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合拉莫三嗪；所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生。
[0015]一种单克隆抗体，所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2022381。
[0016]一种所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述杂交瘤细胞系是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2022381的小鼠杂交瘤细胞系。
[0017]在另一优选例中，所述的单克隆抗体检测拉莫三嗪类似物的灵敏度为1.5ng/mL。
[0018]在另一优选例中，所述的单克隆抗体不结合其它精神类治疗药物。
[0019]在另一优选例中，所述的其它精神类治疗药物是丙戊酸钠、托吡酯、氯氮平、卡马西平、奥卡西平。
[0020]一种所述的单克隆抗体的用途，用于制备检测样品中拉莫三嗪的试剂、检测卡或试剂盒。
[0021]一种检测生物样品中是否存在拉莫三嗪的方法，所述方法包括步骤：
[0022](a)将所述生物样品与所述的单克隆抗体接触；
[0023](b)检测是否形成抗原
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抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在拉莫三嗪；
[0024]其中，所述单克隆抗体带有可检测标记物；所述的标记物选自下组：胶体金标记物、有色标记物或荧光标记物；所述检测方法为荧光检测法。
[0025]一种检测拉莫三嗪类似物的荧光免疫层析检测卡，所述检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其特征在于，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和加样部件，其中，检测带上包被有权利要求1所述的完全抗原，质控带上包被有兔抗原IgG；所述拉莫三嗪荧光免疫层析检测卡还包括卡盒，所述卡盒由下盖和上盖组成，上盖设有加样窗口和检测窗口，所述拉莫三嗪荧光免疫层析检测卡完全设置于下盖中，所述检测窗口和加样窗口分别对应与所述拉莫三嗪荧光免疫层析检测卡上的加样部件和质控带及检测带。
[0026]在一优选例中，所述上盖上还设有产品编号区；条形码识别区。
[0027]在一优选例中，所述基片是深色硬质基片；优选黑色PVC基片。
[0028]在一优选例中，所述检测部件是硝酸纤维素膜。
[0029]在一优选例中，所述加样部件是玻璃纤维。
[0030]在一优选例中，所述吸液部件是吸水纸。
[0031]一种检测拉莫三嗪类似物的检测试剂盒，其所述试剂盒装有：
[0032](a)所述的拉莫三嗪荧光免疫层析检测卡；
[0033](b)与所述的拉莫三嗪荧光免疫层析检测卡配套的拉莫三嗪检测分析液；
[0034](c)所述拉莫三嗪检测试剂盒检测拉莫三嗪类似物的使用说明书；
[0035]其中，所述检测分析液为包含有荧光标记的权利要求4或5所述的单克隆抗体和抗兔IgG抗体的检测分析液；
[0036]所述检测分析液中的标记用荧光染料包括但不限于，Alexa Fluor 647、CF
TM
647、TRITC(Rhodamine)等。
[0037]在一优选例中，所述检测分析液的溶剂部分是含有BSA的磷酸缓冲液。
[0038]应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
[0039]图1显示了拉莫三嗪免疫原和包被原的紫外扫描图谱；
[0040]图2显示了拉莫三嗪荧光免疫层析检本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.拉莫三嗪完全抗原，其特征在于，所述完全抗原具有式1所示的结构：其中，Protein为蛋白质载体。2.一种制备权利要求1所述拉莫三嗪完全抗原的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)将拉莫三嗪半抗原与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)连接，以制得权利要求1所述的拉莫三嗪完全抗原；(a)使拉莫三嗪半抗原用N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)溶解为A液；(b)将步骤(a)得到的A液、25
‑
25％戊二醛加入至BSA/OVA溶液中，室温反应1.5
‑
2.5h，制得拉莫三嗪
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BSA/OVA偶联物，即拉莫三嗪完全抗原。3.一种权利要求1所述拉莫三嗪完全抗原的用途，其特征在于，其用于制备拉莫三嗪的特异性单克隆抗体。4.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性结合拉莫三嗪；所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生。5.根据权利要求4所述的一种单克隆抗体，其特征在于，所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCCNO:C2022381。6.一种如权利要求4或5所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其特征在于，所述杂交瘤细胞系是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2022381的小鼠杂交瘤细胞系。7.一种如权利要求4或5所述的单克隆抗体的用途，其特征在于，用于制备检测样品中拉莫三嗪的试剂、检测卡或试剂盒。8.一种检测生物样品中是否存在拉莫三嗪的方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：李忠鹏，何扬锦，陈颖，费晓旭，
申请(专利权)人：浙江准策生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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