无动物源成分的细胞冻存液及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种无动物源成分的细胞冻存液，其组分包括：葡萄糖、二糖、右旋糖酐、细胞冷冻保护剂、聚乙二醇，所述聚乙二醇的质量分数为0.1％

【技术实现步骤摘要】
无动物源成分的细胞冻存液及其制备方法


[0001]本专利技术专利涉及一种无动物源成分的细胞冻存液及其制备方法，属于细胞培养


技术介绍

[0002]细胞冻存是目前最主流的细胞保存方法。具体操作为将对数生长期的细胞与冷冻保护剂及多种营养成分均匀重悬后置于
‑
196℃液氮中低温保存，使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，以便发生各种情况时再复苏细胞用于实验。
[0003]冻存细胞的传统方案是将胎牛血清(FBS)与二甲基亚砜(DMSO)按合适比例混合培养基后，应用于细胞的冻存。其中，胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、蛋白酶抑制剂、无机物，在细胞冻存和复苏过程中可保护细胞避免受伤害。但胎牛血清成本高，且动物源血清因动物个体、血清产地、批号等指标的不同，成分不稳定，且存在着污染的风险，如带入支原体、病毒等对细胞产生潜在的不利影响。此外，有研究表明，长期与胎牛血清接触的细胞会对溶液介质中的胎牛血清进行内吞，内吞胎牛血清后的间充质干细胞有可能发生某些蛋白表达的变化，应用于人体后可发生异种动物蛋白引起的免疫反应，不能直接用于临床输注。因此，利用含有血清的冻存液冻存的细胞会给临床使用带来一定的风险。
[0004]随着医疗技术的发展，细胞治疗手段的进步，体外细胞培养的要求也越来越高。无血清的细胞培养基和冻存液一方面可以避免动物源成分和过敏源的引入，另一方面明确已知成分的培养及冻存条件能够保证后续实验条件的确定。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种细胞复苏后成活率高、无动物源成分的细胞冻存液。
[0006]本专利技术采用的技术方案为：
[0007]一种无动物源成分的细胞冻存液，其组分包括：二糖、细胞冷冻保护剂、聚乙二醇、缓冲剂或含葡萄糖的培养基；所述聚乙二醇的质量分数为0.1％
‑
3.0％；
[0008]当选择缓冲剂时，还应添加葡萄糖。
[0009]优选的，所述葡萄糖的质量分数为0.1％
‑
2.0％。
[0010]在本专利技术中，质量分数指溶液中溶质质量与溶液体积之比，例如，质量分数为0.1％
‑
3.0％的聚乙二醇指每100mL溶液中含有0.1g
‑
3g的聚乙二醇。
[0011]在本专利技术中，缓冲剂是为了避免细胞冻存时环境pH值发生剧烈变化而添加的生物缓冲液，缓冲剂可以是Tris缓冲液、HEPES缓冲液。在一些实施例中，缓冲剂为HEPES缓冲液，其包括氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸钠。在另外一些实施例中，缓冲剂可替换为培养基，该培养基为不含血清、含葡萄糖的培养基，该培养基的作用类似缓冲剂，为避免细胞冻存时环境发生剧烈变化而添加，尤其是pH值的变化。优选为高糖DMEM培养基。高糖DMEM培养基是一种细胞培养、冻存中常规使用的培养基，该培养基不含血清等动
物源成分，本领域技术人员可根据需求组合使用。当选择高糖DMEM培养基时，该培养基含有葡萄糖组分，应选择其葡萄糖的质量分数满足0.1％
‑
2.0％的高糖DMEM培养基，即细胞冻存液体系中葡萄糖的质量浓度为0.1％
‑
2.0％，如常规的高糖DMEM培养基的葡萄糖质量分数为0.45％，所以，无再额外添加葡萄糖组分。
[0012]优选的，还包括葡聚糖，所述葡聚糖的质量分数为0.5％
‑
3.0％。
[0013]优选的，本专利技术提供的无动物源成分的细胞冻存液，其组分包括：
[0014]质量分数为0.1％
‑
3.0％的聚乙二醇；
[0015]质量分数为1.0％
‑
5.0％的二糖；
[0016]质量分数为0.5％
‑
3.0％的葡聚糖；
[0017]质量分数为0.1％
‑
2.0％的葡萄糖；
[0018]质量分数为5.0％
‑
18％的细胞冷冻保护剂；
[0019]余量为缓冲剂的水溶液；
[0020]其中所述二糖为海藻糖、半乳糖、麦芽糖或者壳二糖中的一种或多种；
[0021]所述细胞冷冻保护剂为二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或者乙酰胺中的一种或数种。
[0022]优选的，所述缓冲剂包括氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠以及4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸钠，其中，
[0023]氯化钠的质量分数为0.1
‑
0.50％；
[0024]磷酸二氢钾的质量分数为0.001％
‑
0.01％；
[0025]磷酸氢二钠的质量分数为0.01％
‑
0.08％；
[0026]4‑
羟乙基哌嗪乙磺酸钠的质量分数为0.01％
‑
0.1％。
[0027]优选的，
[0028]聚乙二醇的质量分数为0.8％
‑
1.5％；
[0029]二糖的质量分数为1.5％
‑
2.5％；
[0030]右旋糖酐的质量分数为0.8％
‑
1.5％；
[0031]葡萄糖的质量分数为0.1％
‑
1.0％；
[0032]氯化钠的质量分数为0.1％
‑
0.50％；
[0033]磷酸二氢钾的质量分数为0.004％
‑
0.008％；
[0034]磷酸氢二钠的质量分数为0.04％
‑
0.07％；
[0035]4‑
羟乙基哌嗪乙磺酸钠的质量分数为0.04％
‑
0.07％。
[0036]优选的，还包括15
‑
25ug/L的抗坏血酸。
[0037]优选的，其组分包括：质量分数为0.1％
‑
3.0％的聚乙二醇；
[0038]质量分数为1.0％
‑
5.0％的二糖；
[0039]质量分数为0.5％
‑
3.0％的右旋糖酐；
[0040]质量分数为5.0％
‑
18％的细胞冷冻保护剂；
[0041]余量为高糖DMEM培养基，所述高糖DMEM培养基中含有葡萄糖，使得细胞冻存液体系中葡萄糖的质量分数为0.1％
‑
2.0％；
[0042]所述二糖为海藻糖、半乳糖、麦芽糖或者壳二糖中的一种或多种；
[0043]所述细胞冷冻保护剂为二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或者乙酰胺中的一种或多种。
[0044]优选的，所述聚乙二醇的分子量为800
‑
10000。
[0045]优选的，所述右旋糖酐的分子量为2000
‑
200000。
[0046]本专利技术还公开了上述的无动物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无动物源成分的细胞冻存液，其特征在于其组分包括：二糖、细胞冷冻保护剂、聚乙二醇、缓冲剂或含葡萄糖的培养基；所述聚乙二醇的质量分数为0.1％
‑
3.0％；当选择缓冲剂时，还应添加葡萄糖。2.根据权利要求1所述的无动物源成分的细胞冻存液，其特征在于所述葡萄糖的质量分数为0.1％
‑
2.0％。3.根据权利要求1所述的无动物源成分的细胞冻存液，其特征在于还包括葡聚糖，所述葡聚糖的质量分数为0.5％
‑
3.0％。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的无动物源成分的细胞冻存液，其特征在于其组分包括：质量分数为0.1％
‑
3.0％的聚乙二醇；质量分数为1.0％
‑
5.0％的二糖；质量分数为0.5％
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3.0％的右旋糖酐；质量分数为0.1％
‑
2.0％的葡萄糖；质量分数为5.0％
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18％的细胞冷冻保护剂；余量为缓冲剂的水溶液；所述二糖为海藻糖、半乳糖、麦芽糖或者壳二糖中的一种或多种；所述细胞冷冻保护剂为二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或者乙酰胺中的一种或多种。5.根据权利要求4所述的无动物源成分的细胞冻存液，其特征在于：聚乙二醇的质量分数为0.8％
‑
1.5％；二糖的质量分数为1.5％
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2.5％；右旋糖酐的质量分数为0.8％
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1.5％；葡萄糖的质量分数为0.1％
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1.0％；氯化钠的质量分数为0.1％
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0.50％；磷酸二氢钾的质量分数为0.004％
‑
0.008％；磷酸氢二钠的质量分数为0.04％
‑
0.07％；4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸钠的质量分数为0.04％
‑
0.07％。6.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的无动物源成分的细胞冻存液，其特征在于还包括15
‑
25μg...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓迪，滕以刚，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：