TGF-β-RII结合蛋白质制造技术

本申请涉及TGF

【技术实现步骤摘要】
TGF
‑
β
‑
RII结合蛋白质
[0001]本申请是申请号为202080094188.4的专利技术名称为“TGF
‑
β
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RII结合蛋白质”的中国专利申请的分案申请，原申请是2020年12月22日提交的PCT国际申请PCT/NL2020/050813于2022年07月22日进入中国国家阶段的申请。


[0002]本专利技术涉及医药领域。更具体而言，本专利技术涉及结合转形生长因子
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β受体II(TGF
‑
βRII)的蛋白质及其在治疗人类(尤其是在治疗癌症)中的用途。

技术介绍

[0003]转形生长因子
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β(TGF
‑
β)是TGF
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β超家族的传讯分子部分。有三种调控各种细胞功能的TGF
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β配体(TGF
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β1、2及3)。TGF
‑
β传讯在正常细胞中具有肿瘤抑制作用，但在恶性细胞中则能够具有肿瘤促进作用。其在诸如增生、迁移、分化、细胞凋亡、血管生成、及上皮细胞间质转化(epithelial
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mesenchymal transition)的程序中扮演角色(Bierie and Moses,2006.Siegel and Massague,2003)。这些讯号是透过与TGF
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β受体第2型(TGF
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βRII)的结合来介导，这会导致与TGF/>‑
βRI的二聚化及TGF
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βRI的磷酸化。此由两个TGF
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βRII及两个TGF
‑
βRI构成的异四聚体复合物接着会招募并磷酸化SMAD2及SMAD3，其继而招募并结合至co
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SMAD分子SMAD4而形成SMAD/co
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SMAD复合物，并转位至核中，在此处其调控TGF
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β目标基因的转录(Hata and Chen,2016.Vander Ark,Cao等,2018)。
[0004]高TGF
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β表达水平已显示与癌症预后不佳相关联。TGF
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β可诱导上皮细胞间质转化，此会促进癌细胞的迁移及转移。基因表达谱已指示，TGF
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β传讯是大肠直肠癌的肝转移的重要路径(Jung,Staudacher等,2017)。此外，已报导基质
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上皮交互作用(stromal
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epithelial interaction)在癌症进展中扮演角色。实体肿瘤中所发现的丰富基质细胞组分是癌症相关纤维母细胞(CAF)，其除了建造及重塑可作为肿瘤支架的胞外基质外，也促成免疫逃避(immune evasion)，并促进肿瘤发展及生长(Quail and Joyce,2013)。肿瘤衍生的TGF
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β1通过结合至TGFβRII而诱导纤维母细胞转分化(transdifferentiation)成“活化”CAF，此能够促进促肿瘤形成的基质环境(pro
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tumorigenic stromal environment)。
[0005]至今，靶向TGF
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β传讯路径以抑制CAF及肿瘤的异常TGF
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β传讯特性的现有模式具有未达最佳的疗效和/或开发负债(development liability)。一种抗TGF
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βRII单株抗体是公开于WO2010/053814中的LY3022859，据报导其会阻断TGF
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βRII的外域(ectodomain)。然而，第I期剂量增量研究导致细胞介素释放综合征，且在患有晚期实体肿瘤的患者中被视为是不安全的。另一种药剂(公开于WO2012/093125中)是具有较短半衰期的抗TGF
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βRII单可变域，且其中此分子的精确作用机制或结合域尚未建立。至今，尚没有已成功完成临床试验的抗TGF
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βRII抗体，因为TGF
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β肿瘤调控的复杂性及多效性本质使得药物开发相当具有挑战性(Hao,Baker等,2019)。在本文中，我们描述能够结合TGF
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βRII的新颖重链可变区、重链、Fab、及全长IgG单特异性抗体。这些抗体、或包含这些重链或重链可变区的抗体靶向TGF
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βRII上的新颖位置，并阻断受体与其配体的间的交互作用，此相较于现有抗体是一项
改善。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种用于治疗人类疾病(尤其是用于治疗癌症)的新颖药剂。此目的是通过提供一种特异性结合至人类TGF
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βRII的胞外域的抗体或其抗体片段、及特定结合域(如本文所述及所要求保护)而获得满足。
[0007]在第一方面，本专利技术涉及一种特异性结合至人类TGF
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βRII的胞外域的抗体或其抗体片段，其中该抗体或抗体片段结合至人类TGF
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βRII的该胞外域的表位，其中人类TGF
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βRII同功型A的位置25处的苯丙氨酸(F)、或人类TGF
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βRII同功型B的位置50处的苯丙氨酸(F)对于结合是关键残基。
[0008]优选地，此类抗体或抗体片段结合至TGF
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βRII，阻断或抑制人类TGF
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β与人类TGF
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βRII的结合，从而抑制讯息传导至细胞中，并阻断或抑制TGF
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βRII的异二聚化。
[0009]在第二方面，本专利技术涉及一种载体，其包含编码如本文所述的抗体或抗体片段的重链及轻链中的任一者或两者的多核苷酸。
[0010]在第三方面，本专利技术涉及一种细胞，其生产如本文所述的抗体或抗体片段。
[0011]在第四方面，本专利技术涉及一种医药组合物，其包含如本文所述的抗体或抗体片段及医药上可接受的载剂、稀释剂、或赋形剂。
[0012]在第五方面，本专利技术涉及一种用于预防癌症、抑制癌症的症状进展或再发、及/或治疗癌症的药剂，其中该药剂包含如本文所述的抗体或抗体片段作为活性成分。
[0013]在第六方面，本专利技术涉及一种治疗受试者中的癌症的方法，该方法包含向该受试者投予有效量的如本文所述的抗体或抗体片段、或如本文所述的医药组合物。
[0014]在第七方面，本专利技术涉及一种阻断人类TGF
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β与细胞上的人类TGF
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βRII的结合的方法，该方法包含提供如本文所述的抗体或抗体片段至该细胞、及让该抗体或抗体片段结合至该细胞的该人类TGF
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βRII，由此阻断人类TGF
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β与该细胞上的人类TGF
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βRII的结合。
[0015]在第八方面，本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合至人类TGF
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βRII的胞外域的抗体或其抗体片段，其中该抗体或抗体片段包含选自下列的重链可变区(VH)中的任一者：(A)具有下列的VH(a)包含SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列的VH
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CDR1、(b)包含SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列的VH
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CDR2、及(c)包含SEQ ID No.3中所示的氨基酸序列的VH
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CDR3；(B)具有下列的VH(a)包含SEQ ID No.4中所示的氨基酸序列的VH
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CDR1、(b)包含SEQ ID No.5中所示的氨基酸序列的VH
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CDR2、及(c)包含SEQ ID No.6中所示的氨基酸序列的VH
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CDR3；(C)具有下列的VH(a)包含SEQ ID No.7中所示的氨基酸序列的VH
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CDR1、(b)包含SEQ ID No.8中所示的氨基酸序列的VH
‑
CDR2、及(c)包含SEQ ID No.9中所示的氨基酸序列的VH
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CDR3，其中一至五个氨基酸残基在任何一个或多个选自VH
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CDR1、VH
‑
CDR2及VH
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CDR3中的CDR中可经其保守性氨基酸取代。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗体片段，其中该VH的FR1、FR2、FR3及FR4区对应于由生殖系V基因IGHV3
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15及IGHV3
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23编码的氨基酸序列，生殖系V基因IGHV3
‑
15及IGHV3
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23可包含体细胞突变。3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体包含选自下列的VH氨基酸序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFDIYAMTWVRQAPGKGLEWV SVISGSGGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRG QYRDIVGATDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:10)；QVQLVESGGGLVEPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWV GRIKTTISGGATDFAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTLD LRDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:11)；QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFRRYAMSWVRQAPGKGLEWV SAISASGDRTHNTDSVKGRFSISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKGIA ASGKNYFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:12)，或与其具有至少80％同一性的VH氨基酸序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体包含选自SEQ ID NO:22
‑
24、26
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28、32、39、40、42、43、48、51
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53、56、61、63、65、67、70、72、74、76、79、81、83、87、93中任一者的VH氨基酸序列、或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的VH氨基酸序列。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体或抗体片段进一步包含：具有下列的轻链可变区(VL)(a)包含SEQ ID No.19中所示的氨基酸序列的VL
‑
CDR1、(b)包含SEQ ID No.20中所示的氨基酸序列的VL
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CDR2、及(c)包含SEQ ID No.21中所示的氨基酸序列的VL
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CDR3，其中一至五个氨基酸残基在任何一个或多个选自VL
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CDR1、VL
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CDR2及VL
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CDR3的CDR中
可经其保守性氨基酸取代。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体包含VL氨基酸序列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYA ASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKV EIK(SEQ ID NO:16)、或与其具有至少80％同一性的VL氨基酸序列。7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体包含SEQ ID NO:10、11或12的重链可变区及SEQ ID NO:16的轻链可变区。8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体包含SEQ ID NO:22
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24、26
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28、32、39、40、42、43、48、51
‑
53、56、61、63、65、67、70、72、74、76、79、81、83、87、93中任一者的重链可变区及SEQ IDNO:16的轻链可变区。9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体包含两个SEQ ID NO:10的重链可变区及两个SEQ ID NO:16的轻链可变区、两个SEQ ID NO:11的重链可变区及两个SEQ ID NO:16的轻链可变区、或两个SEQ ID NO:12的重链可变区及两个SEQ ID NO:16的轻链可变区。10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体包含两个SEQ ID NO:22
‑
24、26
‑
28、32、39、40、42、43、48、51
‑
53、56、61、63、65、67、70、72、74、76、79、81、83、87、93中任一者的重链可变区及两个SEQ ID NO:16的轻链可变区。11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中该抗体是IgG抗体。12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中该抗体是IgG1抗体或IgG4抗体。13.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体，其中该抗体是IgG1抗体。14.根据权利要求1至13中任一项所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体或抗体片段进一步包含含有SEQ ID No.17中所示的氨基酸序列的重链恒定区。15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体或其抗体片段，其中该抗体或抗体片段进一步包含含有SEQ ID No.18中所示的氨基酸序列的轻链恒定区。16.根据权利要求1至15中任一项所述的抗体，其中该抗体与Fc受体的结合经消除或减...

【专利技术属性】
技术研发人员：马克，
申请(专利权)人：美勒斯公司，
类型：发明
国别省市：