本发明专利技术公开了一种纤维堆囊菌发酵培养基，其包括碳源、氮源、无机盐、大孔吸附树脂和水，其还含有氨基酸。其用于发酵培养纤维堆囊菌制备埃坡霉素Ｂ时，菌株性能稳定，生长快速，产品埃坡霉素Ｂ的产量明显提高。本发明专利技术还提供了使用本发明专利技术的纤维堆囊菌发酵培养基发酵培养纤维堆囊菌生产埃坡霉素Ｂ的发酵方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种纤维堆囊菌生产埃坡霉素B的发酵方法及发酵培养基。
技术介绍
埃坡霉素B作为粘细菌纤维堆囊菌的次级代谢产物，是一种微管超稳定的新型抗 肿瘤活性物质。埃坡霉素B的作用机制与紫杉醇相同，但其在抗肿瘤谱、抗肿瘤活性、安全 性、水溶性及合成方法等方面均优于紫杉醇，是一类前景广阔的新型抗肿瘤药物。为了进行埃坡霉素的大规模生产，生物发酵是理想的途径。埃坡霉素B —般由粘 细菌纤维堆囊菌Sorangium cellulosum 90发酵生产。专利W093/10121中报道，在含碳 源、氮源和无机盐的介质中培养纤维堆囊菌的菌株，并在培养过程中加入吸附性树脂，可生 产得到低产量的埃坡霉素B。文献《纤维堆囊菌的代谢产物及其生物学活性分析》(李越 中，微生物学报，2001，41 (6))，文献《粘细菌纤维堆囊菌降解纤维素多酶复合体的确证和性 质分析》(侯配斌，博士毕业论文，山东大学)，以及文献《Mutation and ahigh-throughput screening method for improving the production of Epothilonesof Sorangium》 (Guo-li Gong, J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 2007,34 :615_623)均报道，使用 M26 培养基 发酵粘细菌纤维堆囊菌，也可获得低产量的埃坡霉素B。尽管使用M26培养基发酵粘细菌纤维堆囊菌可以生产埃坡霉素B，但产量较低；若 采用诱变筛选，又由于粘细菌纤维堆囊菌难以培养，诱变筛选难度又很大。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种纤维堆囊菌发酵培养基，其用于发酵培 养纤维堆囊菌制备埃坡霉素B时，菌株性能稳定，生长快速，产品埃坡霉素B的产量明显提 高。本专利技术还提供了一种纤维堆囊菌生产埃坡霉素B的发酵方法。本专利技术提供了一种纤维堆囊菌发酵培养基，其包括碳源、氮源、无机盐、大孔吸附 树脂和水，还包括氨基酸。其中，所述的氨基酸较佳的选自赖氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸。其中，所述的氨基酸的含量较佳的为0. l_500mg/L，更佳的为1-lOmg/L。其中，所述的纤维堆囊菌发酵培养基的pH值较佳的为3-9，更佳的为5-8。其中，所述的纤维堆囊菌较佳的为Sorangium cellulosum 90。其中，所述的碳源为本领域常规使用的碳源，较佳的为0. 2_2衬％的土豆淀粉或玉 米淀粉或麦芽糊精或土豆糊精，以及0.的葡萄糖。其中，所述的氮源为本领域常规使用的氮源，较佳的为0. 05-0. 5wt %的大豆蛋白 胨或胰胨，以及0.的酵母膏。其中，所述的无机盐为本领域常规使用的无机盐，较佳的为0. 05-0. 5wt %的 MgS04 '7H20,0. 05-0.CaCl2 *2H20,以及0. 5_5ml/L的微量元素液。所述的微量元素 液为本领域常规使用的微量元素液，较佳的参考Reichenbach H. , Dworkin M.等人的《TheMyxobacteria. The Prokaryote》(2nded. 1992. 3418-3487)中相关内容配制，标准微量元 素液(1L 体系):MnCl2 4H20 lOOmg, CoCl2 20mg, CuS04 lOmg, Na2Mo04 2H20 lOmg, ZnCl2 20mg, LiCl 5mg, SnCl2 2H20 5mg, H3B03 lOmg, KBr 20mg, KI 20mg, EDTANa_Fe3+8g0其中，所述的大孔吸附树脂较佳的为非极性大孔吸附树脂，鉴于其用于发酵，为使 之不易破碎，考虑其机械强度，更佳的选择使用XAD-16大孔吸附树脂。其中，所述的大孔吸附树脂的用量较佳的为体积百分比2%。其中，所述的水较佳的为去离子水；所述水的用量较佳的为补足质量百分比 100%。其中，更佳地，碳源、氮源、无机盐和大孔吸附树脂的优选组合为M26培养基，即指 0. 8wt%土豆淀粉、0. 2wt%大豆蛋白胨、0. 2界卞％葡萄糖、0. 2界1%酵母膏、0. lwt%MgS04 *7H20、 0. lwt% CaCl2 2H20、lml/L微量元素液和2% (V V)的XAD-16大孔吸附树脂。本专利技术的纤维堆囊菌发酵培养基由下述方法制得将上述成分简单均勻混合，用 水补足含量至质量百分比100%，按照本领域常规方式杀菌消毒，即可。本专利技术的发酵培养基特别适合纤维堆囊菌的发酵培养，本专利技术还提供了一种纤维 堆囊菌生产埃坡霉素B的发酵方法，其步骤包括在本专利技术的纤维堆囊菌发酵培养基中接 种纤维堆囊菌，培养，生产埃坡霉素B。其中，所述的纤维堆囊菌较佳的为Sorangium cellulosum 90。其中，所述的纤维堆囊菌的接种量为本领域常规使用接种量，较佳的为 5% -50%，更佳的为10% -30%，百分比为质量百分比。其中，所述的培养的温度较佳的为20_40°C，更佳的为25-30°C。其中，所述的培养的pH值较佳的为3-9，更佳的为5-8。其中，所述的接种使用的种子为经过二级培养的本领域常规使用的粘细菌纤维 堆囊菌种子。其中，所述的二级培养为本领域常规方法培养，包括斜面菌种培养和种子培 养。所述的斜面菌种培养为现有技术常规方法培养，即使用VY/2斜面培养基在30°C条件 下，培养箱培养3-7天。所述的种子培养为现有技术常规方法培养，即使用M7种子培养基， 30°C、200rpm 培养 2-5 天。所述的 VY/2 培养基含有鲜酵母 0. 5wt% ；CaCl2 2H20 0. lwt% ； VB120. 00005wt%;琼脂1. 5wt%;ffi 3mol/L的K0H调pH至7. 2。所述的M7种子培养基含有 蛋白胨 0. 3wt% ；胰胨 0. 3wt% ；淀粉 0. 5wt% ；葡萄糖 0. 2wt% ；酵母膏 0. lwt% ;MgS04 7H20 0. lwt% ；CaCl2 2H20 0. lwt% ；VB120. 00001wt% ；用 3mol/L 的 K0H 调 pH 至 7. 2。本专利技术所用试剂和原料均市售可得。本专利技术中，上述的各技术特征的优选条件可以任意组合，得到较佳的技术方案用于生产高产量的发酵埃坡霉素B。本专利技术的积极进步效果在于本专利技术提供了一种纤维堆囊菌发酵培养基及其生产 埃坡霉素B的发酵方法。使用本专利技术纤维堆囊菌发酵培养基培养菌株时，菌株性能稳定，生 长快速，制备埃坡霉素B相较于使用常规发酵培养基M26，在制备埃坡霉素B时的产量明显 提高50-100%，效果显著。具体实施例方式下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中。实施例中的百分比，如无特殊说明，均为质量百分比。实施例1-4表1给出了本专利技术的发酵培养基实施例1 4的配方，按表1中所列组分及其含 量(百分比均为质量百分比)简单混合均勻，用去离子水补足含量至质量百分比100%，杀 菌消毒，即制得各发酵培养基。其中，微量元素液配制(1L体系):MnCl2 4H20 lOOmg, CoCl220mg, CuS0410mg, Na2Mo04 2H20 l本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种纤维堆囊菌发酵培养基，其包括碳源、氮源、无机盐、大孔吸附树脂和水，其特征在于：其还包括氨基酸。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈少欣，田刚，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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