ACSS2作为治疗神经母细胞瘤的新靶点的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了ACSS2基因作为靶标在筛选/制备治疗神经母细胞瘤的药物中的应用，抑制ACSS2基因表达的试剂制备治疗神经母细胞瘤的药物中的应用，以及检测ACSS2表达的试剂在制备用于诊断神经母细胞瘤或者神经母细胞瘤预后的试剂盒中的用途。通过实验证明敲低ACSS2可以阻断MYCN转录，抑制神经母细胞瘤的生长，为神经母细胞瘤的治疗提供了新的靶点，可通过抑制细胞核中ACSS2介导乙酸生成乙酰辅酶A，减少组蛋白乙酰化，抑制MYCN的转录，从而达到缓解或者治疗神经母细胞瘤的目的。为神经母细胞瘤的治疗提供了新的方向和思路，有望应用在治疗神经母细胞瘤的新药研发中。研发中。

【技术实现步骤摘要】
ACSS2作为治疗神经母细胞瘤的新靶点的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及ACSS2作为治疗神经母细胞瘤的新靶点的应用。

技术介绍

[0002]神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)是儿童最常见的实体肿瘤，约占儿童癌症相关死亡率的15％。研究发现，约20％的神经母细胞瘤为MYCN多拷贝突变，该突变在中晚期患者中甚至高于40％。MYCN多拷贝突变与神经母细胞瘤患者的不良预后密切相关。
[0003]MYCN(v
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myc avian myelocytomatosis viral oncogene neuroblastoma derived homolog)基因是MYC癌基因家族中的一员，它作为转录调节因子，控制细胞增殖、生长、蛋白质合成、代谢、凋亡和分化等靶基因的表达，在促进神经母细胞瘤的发生和发展中起着至关重要的作用。研究表明，缺失MYCN能明显抑制神经母细胞瘤的发展，这表明MYCN可成为治疗神经母细胞瘤的一个有前景的靶点。然而，由于MYCN缺乏小分子抑制剂的特定结合位点，用小分子或低分子量化合物(如IIA6B17,10058
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F4)直接靶向MYCN效果并不理想。同时，目前技术也难以实现向细胞核递送特定抗体抑制MYCN活性。因此，针对MYCN上游调控因子的治疗策略已被开发作为治疗MYCN多拷贝突变神经母细胞瘤的新方法。
[0004]基因表达的表观遗传调控影响生长发育。表观遗传失调会导致包括癌症在内的多种人类疾病的发生。组蛋白乙酰化是一种重要的表观遗传修饰，通过组蛋白N
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端赖氨酸残基上的乙酰化和去乙酰化来改变染色质结构并调节基因表达。这些反应分别由组蛋白乙酰转移酶和组蛋白脱乙酰酶共同调节。通常组蛋白乙酰转移酶和组蛋白脱乙酰酶保持着动态平衡，然而这种平衡一旦被破坏则会引起基因的表达改变，已成为公认的致癌机制。大量研究表明，新开发的组蛋白乙酰化酶抑制剂，如BF1、PU139和PU141，在体外可通过去组蛋白作用，阻断神经母细胞瘤细胞的生长，而体内实验也证明可阻断神经母细胞异种移植瘤的生长。因此，利用神经母细胞瘤对表观遗传调节剂的靶向易损性是治疗神经细胞瘤，特别是高风险MYCN多拷贝突变的神经母细瘤的另一种有效策略。
[0005]从表观遗传学角度看，肿瘤的发生也依赖于细胞代谢重编程。代谢改变可能对表观遗传和转录组调节有深远的影响。乙酸盐是一种丰富的碳源，可被肿瘤细胞用作支持脂质生物合成的重要生物能量燃料。此外，乙酸是组蛋白和非组蛋白乙酰化乙酰辅酶A的前体，可作为表观遗传代谢物。乙酰辅酶A合成酶短链家族成员2(Acyl
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CoA synthetase short chainfamilymember2,ACSS2)是在细胞质和细胞核中将乙酸转化为乙酰辅酶A的关键酶。研究发现ACSS2的缺失对小鼠的生长发育没有影响，但可以显著抑制不同类型癌症的发展，如乳腺癌和肝细胞癌。此外，ACSS2在多种肿瘤中高表达，其表达水平与不良预后有关。

技术实现思路

[0006]本专利技术通过对神经母细胞瘤患者的临床病理资料进行整理研究，使用免疫测定方
法中的免疫组织化学(IHC)检测ACSS2在癌组织和癌旁组织中的表达水平，并分析ACSS2的表达与神经母细胞瘤患者临床分期，通过构建Cox风险比例回归模型，进一步分析ACSS2在预判神经母细胞瘤患者的预后中的意义，为神经母细胞瘤的诊断及预后提供重要的理论依据。同时，又通过敲低神经母细胞瘤细胞系中ACSS2的表达，研究ACSS2对MYCN转录和神经母细胞瘤发生发展的影响，为神经母细胞瘤的治疗提供了新靶点。
[0007]基于此，本专利技术提供了如下技术方案：ACSS2基因作为靶标在筛选/制备治疗神经母细胞瘤的药物中的应用，调控ACSS2基因，ACSS2表达的降低缓解或抑制神经母细胞瘤的发展。
[0008]在上述的应用技术方案中，通过调控ACSS2基因，抑制ACSS2介导乙酸生成乙酰辅酶A，降低组蛋白乙酰化，进而减少MYCN的转录，达到缓解或抑制神经母细胞瘤发展的目的。
[0009]在上述的应用技术方案中，ACSS2通过CBP调控的组蛋白乙酰化来调控MYCN的转录。
[0010]本专利技术还提供了抑制ACSS2基因表达的试剂制备治疗神经母细胞瘤的药物中的应用。
[0011]在上述的应用技术方案中，抑制ACSS2基因表达的试剂抑制ACSS2表达，抑制ACSS2介导乙酸生成乙酰辅酶A，降低组蛋白乙酰化，进而减少MYCN的转录，达到缓解或抑制神经母细胞瘤发展的目的。
[0012]在上述的应用技术方案中，所述抑制ACSS2基因表达的试剂为小分子或低分子量化合物、ACSS2蛋白特异性结合剂或者核酸分子，所述ACSS2蛋白特异性结合剂包括针对ACSS2的抗体、肽抗体、凝集素、结合剂。
[0013]优选地，所述核酸分子为siRNA。
[0014]本专利技术还提供了检测ACSS2表达的试剂在制备用于诊断神经母细胞瘤或者神经母细胞瘤预后的试剂盒中的用途。
[0015]在上述的用途技术方案中，ACSS2的高表达预示患者患有神经母细胞瘤，或者预示神经母细胞瘤患者的预后不良。
[0016]本专利技术的有益效果是：通过实验证明敲低ACSS2可以阻断MYCN转录，抑制神经母细胞瘤的生长，为神经母细胞瘤的治疗提供了新的靶点，开发靶向ACSS2的药物，可通过抑制细胞核中ACSS2介导乙酸生成乙酰辅酶A，减少组蛋白乙酰化，抑制MYCN的转录，从而达到缓解或者治疗神经母细胞瘤的目的。为神经母细胞瘤的治疗提供了新的方向和思路，有望应用在治疗神经母细胞瘤的新药研发中。
附图说明
[0017]图1.ACSS2与MYCN表达及神经母细胞瘤患者预后相关：A.乙酰辅酶A在线粒体和核
‑
细胞质中的代谢示意图；B.在GSE45547队列中，ACSS2的高表达与较低的总生存率和MYCN表达相关；C.在GSE49710队列中，ACSS2的高表达与较低的总生存率和MYCN表达相关；D.使用GraphPad软件定量分析MYCN多拷贝和非多拷贝时GSE45547中ACSS2的表达；E.神经母细胞瘤患者(n＝74)与周围正常神经组织(n＝14)中ACSS2和MYCN蛋白表达的IHC染色和定量分析的代表性图像；F.在神经母细胞瘤组织中，ACSS2蛋白水平与MYCN蛋白表达呈正相关；G.火山图显示了两组间基因上调或下调的差异；H.基因本体分析显示各组间生物过程
变化最大；I.代谢过程基因集中显著上调和下调基因的热图；J
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K.Western blot(J)和Real
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time
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PCR(K)分析转染ACSS2小干扰RNA(siACSS2)或scramble对照(siControl)的BE(2)
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C和IMR32细胞中MYCN蛋白和mRNA的相关表达。
[0018]图2.ACSS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ACSS2基因作为靶标在筛选/制备治疗神经母细胞瘤的药物中的应用，其特征在于：调控ACSS2基因，ACSS2表达的降低缓解或抑制神经母细胞瘤的发展。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：通过调控ACSS2基因，抑制ACSS2介导乙酸生成乙酰辅酶A，降低组蛋白乙酰化，进而减少MYCN的转录，达到缓解或抑制神经母细胞瘤发展的目的。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：ACSS2通过CBP调控的组蛋白乙酰化来调控MYCN的转录。4.抑制ACSS2基因表达的试剂制备治疗神经母细胞瘤的药物中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：抑制ACSS2基因表达的试剂抑制ACSS2表达，抑制ACSS2介导...

【专利技术属性】
技术研发人员：张静，胡文全，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：