一种抗热应激益生菌制剂及其应用制造技术

本发明专利技术属于益生菌功能技术领域。本发明专利技术公开了一种抗热应激的益生菌，该菌已于2022年5月12日保藏于中国微生物菌种保藏中心，地址为北京市阐扬去北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC NO.24883，分类命名粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。本发明专利技术主要解决动物热应激引起的肠道损伤问题。物热应激引起的肠道损伤问题。

【技术实现步骤摘要】
一种抗热应激益生菌制剂及其应用


[0001]本专利技术属于微生物工程领域，具体涉及一种益生菌功能


技术介绍

[0002]热应激是指机体在高温条件下对热暴露所做出的非特异性生理反应的总和。当畜禽过度暴露在高温环境时会引起各种生理及病理变化。畜禽体内的热量无法有效的排出体外进而出现张口呼吸、精神沉郁、采食量下降、增重减慢，严重时可导致死亡，同时使动物福利受到挑战。热应激时动物体温升高，机体代谢提高，产生更多自由基，机体或细胞内自由基产生与清除的机体效能之间的生理平衡被打破，导致活性氧簇在体内蓄积对细胞造成损伤危害动物机体，进而导致畜禽生产性能下降影响经济效益。大量研究表明，抗氧化剂可通过自由基清除作用来降低或缓解细胞损伤甚至凋亡。但市面上化学合成类抗氧化剂大多有副作用，因此，寻找无副作用或副作用小的天然抗氧化剂具有十分重要意义。
[0003]益生菌是指能改善宿主相关或周围微生物菌群、提高饲料营养、增强宿主对疾病抗感染力或提高生存环境质量的活的微生物，可通过生物夺氧、竞争性抑制、产生酸性物质等维持肠道菌群的平衡、提高机体抗病力。构建一种抗热应激的益生菌将显著提高畜牧业应对动物热应激问题的能力。

技术实现思路

[0004]本专利技术公开了一种抗热应激的益生菌，该菌已于2022年5月12日保藏于中国微生物菌种保藏中心，地址为北京市阐扬去北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC NO.24883，分类命名粪肠球菌(Enterococcus faeca l i s)。本专利技术主要解决动物热应激引起的肠道损伤问题。
[0005]本专利技术技术方案如下：
[0006]1.配置MRS培养基平板，将梯度稀释后的奶牛瘤胃液涂布于培养板中，倒置于39℃厌氧培养箱中培养1
‑
2d，直至有类似乳酸菌菌落长出。
[0007]2.选择出长势优越的乳酸菌类似菌落，分别进行划线分离和纯化，直至得到单一菌落。
[0008]本专利技术有益效果为：具有抗氧化和抗炎作用，具有缓解热应激引起的动物肠道组织结构损伤的作用。
附图说明
[0009]图1各组小鼠空肠结构(HE染色，100
×
)A：空白组；B：热处理模型组；C：低剂量益生菌组；D：中剂量益生菌组；E：高剂量益生菌组
具体实施例
[0010]验证分离乳酸菌抗热应激功能
[0011]1.选择身体健康，无疾病的4周龄昆明小鼠为试验动物，试验分为5组，分组1为空白对照组，在25℃环境温度中饲养，分组2为热应激模型组，每天42℃恒温培养箱中热处理2h，分组3
‑
5为粪肠球菌试验组。
[0012]试验小鼠不限饮水，饲料，每组6只小鼠，分组1为空白对照组灌服与试验组相同剂量的生理盐水，分组2每天在42℃环境中处理2h，分组3
‑
5灌服粪肠球菌(浓度分别为1
×
107CFU/mL，1
×
108CFU/mL，1
×
109CFU/mL)后1h与分组2同时进行热处理。
[0013]试验所用菌液均为当天配置，每天准备不同浓度菌液各1管，观察小鼠生理状态、存活等情况，每天做好记录。
[0014]2.直肠温度检测
[0015]热处理前后分别记录小鼠直肠温度
[0016]小鼠直肠温度如表1所示，热处理前空白组与模型组无差异(p>0.05)，与模型组相比，灌服粪肠球菌高剂量组与模型组差异显著(p<0.05)，低、中剂量组与模型组无差异(p>0.05)。热处理后与空白组相比模型组直肠温度显著升高(p<0.05)，与模型组相比，灌服粪肠球菌低、中剂量组直肠温度降低(p<0.05)，其中中剂量组温度降低最多。
[0017][0018]表1小鼠直肠温度注：用Duncan法进行多重比较，同行数据上角标不同小写字母表示组间差异显著(P<0.05)，相同小写字母表示组间差异不显著(P>0.05)，数据表示为平均值
±
标准误差。
[0019]3.小鼠血清指标检测
[0020]最后一天热处理后，各组小鼠用眼球摘除法采集血液，在室温条件下，血液凝固1h后，3500r/mi n离心l 0mi n取血清，
‑
20℃保存。用试剂盒检测I L
‑
1、I L
‑
10、I L
‑
6、TNF
‑
α表达水平。
[0021]各血清指标的影响如表2所示，结果显示，与空白组相比，模型组血清中促炎因子TNF
‑
α、I L
‑
1、I L
‑
6水平极显著升高(p<0.01)，抗炎因子I L
‑
10水平极显著降低(p<0.01)，说明热处理时模型组小鼠有炎性反应出现。另外灌服粪肠球菌：与模型组相比，各剂量组抗
炎因子I L
‑
10水平显著升高，促炎因子TNF
‑
α、I L
‑
1、I L
‑
6水平显著降低，说明灌服粪肠球菌可以降低炎症相关血液指标水平，提高抗炎因子水平，起到抗炎作用，其中中剂量组各血清指标水平趋近于空白对照组，效果最佳。
[0022][0023]表2小鼠血清炎性因子水平注：用Duncan法进行多重比较，同行数据上角标不同小写字母表示组间差异显著(P<0.05)，相同小写字母表示组间差异不显著(P>0.05)，数据表示为平均值
±
标准误差。
[0024]4.HE染色检测空肠组织损伤情况
[0025]动物处死后，采集空肠组织，用生理盐水清洗肠组织，清除肠道内容物，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋。观察各组小鼠肠道结构的完整。各组切片结果如图1显示，空白组空肠结构完整，绒毛紧密，与空白组相比热处理组空肠出现绒毛断裂，绒毛缩短的现象，灌服粪肠球菌组与模型组相比空肠结构完整，低、高剂量组绒毛有少量断裂，但结构完整，中剂量组结构完整，绒毛排列紧密。说明灌服粪肠球菌有维持肠道结构完整的作用。
[0026]试验结果表明，热应激模型小鼠灌服粪肠球菌有抗炎、抗氧化作用，能够缓解热应激引起的肠道组织结构损伤，起到抗热应激作用。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗热应激的益生菌，其特征为：保藏编号CGMCC NO.24883，分类命名粪肠球菌，拉丁文学名Enteroc...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秋菊，徐闯，孙愉，张昊，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：