Rad17作为宫颈癌标志物和治疗靶点的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了Rad17作为宫颈癌标志物和治疗靶点的应用。本发明专利技术通过研究，提供了新的宫颈癌诊断标志物Rad17，能够明确清楚地表征宫颈癌的发生发展，该标志物在临床患者宫颈癌组织中相比对应正常宫颈组织呈现特异性高表达现象，在人宫颈癌细胞系中也呈现高表达；并且证实敲低Rad17会抑制宫颈癌恶性特征。Rad17作为宫颈癌的诊断标志物，为宫颈癌的治疗提供了新的分子靶点，为宫颈癌的治疗提供了新的思路。为宫颈癌的治疗提供了新的思路。为宫颈癌的治疗提供了新的思路。

【技术实现步骤摘要】
Rad17作为宫颈癌标志物和治疗靶点的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及Rad17作为宫颈癌标志物和治疗靶点的应用。

技术介绍

[0002]在全球范围内，宫颈癌是女性癌症中发病率和死亡率第四常见的癌症，仅次于乳腺癌、结直肠癌和肺癌。持续高危型HPV感染是宫颈癌发生的主要因素，但是其机制并不清楚。目前的HPV疫苗仅能够预防几种HPV感染，并且对于已经感染的患者疫苗没有治疗效果。如何降低宫颈癌的发生率仍是目前亟待解决的重要问题。因此，深入研究宫颈癌发生发展的分子机制对于开发新的诊断标志和药物靶点具有重要的意义。
[0003]巴氏涂片是目前临床上一种发现宫颈癌前期病变和早期宫颈癌的一种途径，该方法对宫颈脱落细胞进行初步筛查，其特异性好，然而敏感性欠佳。HPV检测可以辅助诊断，但是HPV感染只是高危因素，并不能确定是否发展到癌症阶段。阴道镜检查可进一步检查可疑的宫颈癌，但这种方法对操作人员专业要求高，我国医疗水平落后的地区难以普及。因此，寻找新型肿瘤诊断分子标志物及治疗靶点显得尤为重要。
[0004]细胞周期检查点(checkpoint)是细胞周期进程中的一些控制点，主要是当DNA受到损伤(有时也包括细胞遇到营养缺乏等不利条件)时，这些调控点通过减慢或暂时中止细胞周期的进程而提供给细胞足够的时间用以修复受损的DNA(或度过危机)。细胞周期检查点相关蛋白Rad17是细胞应答DNA损伤和复制叉阻滞信号转导过程中一个关键的检控蛋白，在DNA损伤和DNA复制检控中具有非常重要的作用。目前还没有关于Rad17与宫颈癌的相关性的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对上述问题，提供Rad17作为宫颈癌标志物的新应用：用于检测生物标志物表达水平的物质在制备诊断宫颈癌的产品中的应用，所述生物标志物是Rad17。
[0006]在上述应用技术方案中，检测针对罹患或疑似罹患宫颈癌的个体的宫颈组织中的Rad17基因或蛋白表达水平。
[0007]在上述应用技术方案中，如果个体的病变宫颈组织中的Rad17基因或蛋白表达水平相较于正常宫颈组织呈现特异性高表达，则表明所述个体为宫颈癌高风险患者。
[0008]在上述应用技术方案中，所述产品为试剂或试剂盒。
[0009]在上述应用技术方案中，所述物质用于检测Rad17基因的蛋白表达水平、或Rad17基因的mRNA表达水平。
[0010]本专利技术还提供了Rad17作为靶标在筛选/制备治疗宫颈癌的药物中的应用，抑制Rad17基因的表达，抑制宫颈癌的恶性特征。
[0011]在上述应用技术方案中，抑制Rad17的表达，从而抑制宫颈细胞中HMGCS1的表达，从而降低总胆固醇并抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
[0012]本专利技术还提供了抑制Rad17表达的试剂在制备治疗宫颈癌的药物中的应用。
[0013]在上述应用技术方案中，抑制Rad17表达的试剂抑制Rad17的表达，从而抑制宫颈细胞中HMGCS1的表达，从而降低总胆固醇并抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
[0014]在上述应用技术方案中，所述抑制Rad17表达的试剂包括核酸分子、蛋白分子或化合物；优选为shRNA。
[0015]本专利技术的有益效果是：提供了新的宫颈癌诊断标志物Rad17，能够明确清楚地表征宫颈癌的发生发展，该标志物在人临床宫颈癌组织中相比对应正常宫颈组织呈现特异性高表达现象；在人宫颈癌细胞系中也呈现高表达；并且证实敲低Rad17会抑制宫颈癌恶性特征。Rad17作为宫颈癌的诊断标志物，为宫颈癌的治疗提供了新的分子靶点，为宫颈癌的治疗提供了新的思路。
附图说明
[0016]图1是分析GEO数据库中人正常宫颈组织和人宫颈癌组织中Rad17的表达。
[0017]图2是使用GEPIA在线数据库分析Rad17对宫颈癌患者无病生存期的影响。
[0018]图3是RT
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qPCR检测Rad17在人正常宫颈组织和人宫颈癌组织中的mRNA水平。
[0019]图4是IHC检测Rad17在人正常宫颈癌组织、CIN组织、癌症组织中的蛋白表达水平。
[0020]图5是westernblot检测Rad17在永生化的人正常宫颈上皮细胞(H8)和几种人宫颈癌细胞系(CaSki、SiHa和HeLa)中的蛋白表达水平。
[0021]图6是RT
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qPCR检测Rad17在永生化的人正常宫颈上皮细胞(H8)和几种人宫颈癌细胞系(CaSki、SiHa和HeLa)中的mRNA相对表达量。
[0022]图7是westernblot和RT
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qPCR验证CaSki和SiHa中Rad17的敲低效率。
[0023]图8是RTCA检测CaSki和SiHa中敲低Rad17后的增殖能力。
[0024]图9是CCK8检测CaSki和SiHa中敲低Rad17后的增殖能力。
[0025]图10是克隆形成实验检测CaSki和SiHa中敲低Rad17后的增殖能力。
[0026]图11是划痕实验检测CaSki和SiHa中敲低Rad17后的迁移能力。
[0027]图12是Transwell实验检测CaSki和SiHa中敲低Rad17后的迁移能力和侵袭能力。
[0028]图13是GEPIA数据库分析宫颈癌组织中HMGCS1和Rad17的相关性。
[0029]图14是westernblot和RT
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qPCR检测CaSki中敲低Rad17后HMGCS1的蛋白水平和mRNA水平。
[0030]图15是总胆固醇定量实验检测CaSki中敲低Rad17后总胆固醇的含量。
[0031]图16是总胆固醇定量实验检测CaSki中过表达Rad17后和过表达Rad17细胞用HMGCS1抑制剂Dipyridamole处理后的总胆固醇含量。
[0032]图17是GEO数据库分析HMGCS1在宫颈癌中的表达。
[0033]图18是westernblot和RT
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qPCR检测HMGCS1在永生化的人正常宫颈上皮细胞和几种人宫颈癌细胞系中的蛋白和mRNA表达水平。
[0034]图19是westernblot检测HMGCS1的敲低效果。
[0035]图20是总胆固醇定量实验检测CaSki中敲低HMGCS1后总胆固醇的含量。
[0036]图21是CCK8检测CaSki和SiHa中敲低HMGCS1后的增殖能力。
[0037]图22是Transwell实验检测CaSki和SiHa中敲低HMGCS1后的迁移能力和侵袭能力。
[0038]图23是下调Rad17的瘤体组织与对照瘤体组织体积的对比。
[0039]图24是下调Rad17的瘤体组织与对照瘤体组织重量的对比。
[0040]图25是IHC检测移植瘤实验15天时HMGCS1的变化。
具体实施方式
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测生物标志物表达水平的物质在制备诊断宫颈癌的产品中的应用，其特征在于：所述生物标志物是Rad17。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：检测针对罹患或疑似罹患宫颈癌的个体的宫颈组织中的Rad17基因或蛋白表达水平。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：如果个体的病变宫颈组织中的Rad17基因或蛋白表达水平相较于正常宫颈组织呈现特异性高表达，则表明所述个体为宫颈癌高风险患者。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述产品为试剂或试剂盒。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述物质用于检测Rad17基因的蛋白表达水平、或Rad17基因的mRNA表达水平。6.Rad17作为靶标在筛选/制...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄廷，洪世垣，吴迪，刘燕飞，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：