SCRN1抑制剂在制备肝细胞癌治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，提供了SCRN1的新用途，具体是SCRN1抑制剂在制备肝细胞癌治疗药物中的应用。本发明专利技术进一步提供了SCRN1抑制剂重组载体，以及以SCRN1抑制剂或其重组表达载体为活性组分的肝细胞癌治疗药物组合物。实验结果显示，SCRN1在肿瘤组织中表达均升高，其不影响肝癌细胞的正常增殖，但能降低细胞对索拉非尼敏感性。SCRN1

【技术实现步骤摘要】
SCRN1抑制剂在制备肝细胞癌治疗药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及SCRN1作为分子标志物在治疗肝细胞癌中的应用，具体涉及SCRN1抑制剂在制备肝细胞癌治疗药物中的应用，进一步涉及SCRN1sgRNA等抑制剂在制备抗肝细胞癌生物治疗药物，尤其是作为抗肿瘤获得性耐药抑制剂中的应用。

技术介绍

[0002]肝癌是全球最常见的实体恶性肿瘤之一，其致死率在恶性肿瘤中位列前三。肝癌可分为肝内胆管癌、肝母细胞瘤和肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)。HCC起源于肝细胞，占原发性肝癌的75％
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85％，其致病因素复杂多样，包括乙/丙型肝炎病毒感染、脂肪肝、糖尿病、黄曲霉毒素感染、细胞基因组改变、表观遗传修饰等。针对复杂的发病因素和病程进展，临床治疗手段主要采取手术切除、肿瘤消融、肝动脉栓塞治疗和全身治疗。早期发现、及时治疗可延长肝癌患者的生存期，然而由于肝癌病因复杂、起病隐匿、进展迅速，患者被确诊时多处于中晚期。因此，全身治疗作为中晚期患者的首选治疗方案尤为重要。
[0003]索拉非尼是FDA批准的肝癌一线全身治疗药物。作为多靶点激酶抑制剂，索拉非尼可通过抑制丝氨酸/苏氨酸激酶(Serine/Threonine Kinase,Raf)/丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen
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Activated Protein Kinase 1,MAPK)通路以阻断肿瘤细胞增殖；还可通过调节血小板衍生生长因子受体、FMS样酪氨酸激酶、肝细胞因子受体以及血管内皮生长因子受体抑制肿瘤血管生成。此外，诱导肿瘤细胞发生程序性细胞死亡也是其发挥抗肿瘤效应的重要环节。然而，治疗初期对索拉非尼敏感的患者通常在6个月内即出现获得性耐药(Zhu Y J等.New knowledge of the mechanisms of sorafenib resistance in liver cancer[J].Acta Pharmacol Sin,2017,38(5):614
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622.)。目前关于索拉非尼耐药机制研究主要包括药物转运与代谢、细胞增殖与程序性死亡、上皮间质转化、肿瘤微环境和基因修饰等。既往的研究认为索拉非尼通过靶向细胞膜上激酶受体诱导细胞发生凋亡和自噬。然而，近年来越来越多的研究表明，索拉非尼主要通过抑制细胞膜上的谷氨酸
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半胱氨酸转运系统System xc
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诱导铁死亡，并且这一过程不依赖于经典的激酶抑制功能。临床数据表明，铁代谢相关基因MT1G表达升高是肝细胞癌索拉非尼耐药的生物学标志，敲低MT1G可促进细胞发生铁死亡，进而恢复耐药细胞对索拉非尼的敏感性。此外，表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)表达降低及肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)活化均可激活AKT/ERK1/2
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EGFR1通路导致细胞对索拉非尼敏感性降低；转运蛋白SLC22(Solute Carrier Family 22,SLC22)甲基化修饰水平升高可导致其表达降低，抑制细胞对索拉非尼的摄取；持续使用索拉非尼可导致组织微血管密度下降，细胞内缺氧，进而促进缺氧诱导因子(Hypoxia Inducible Factor,HIF)表达升高，有利于选择适应缺氧微环境的耐药细胞。尽管对于索拉非尼获得性耐药的机制已有部分认识和研究，临床上仍然有广大肝癌患者不能从中获益，而且无法预测不同个体对治疗的响应性，因此索拉非尼仍只能有效延长肝癌患者半年左右的生存期。
[0004]因此，鉴定筛选与肝细胞癌索拉非尼敏感性相关的标志物，筛选出索拉非尼治疗
的获益群体，对改进晚期肝细胞癌全身治疗疗效至关重要，这也很可能有助于发现未来新药针对性研发的潜在靶点。
[0005]SCRN1属于分离蛋白(Secernin)家族，该家族仅有三个成员(SCRN1
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3)，其中SCRN1是最早被发现且研究较多的分子。SCRN1主要表达于神经组织，肾脏、子宫内膜、卵巢等脏器中也有分布，在正常肝脏组织中表达较低。蛋白结构层面，SCRN1的N端包含一个C69结构域，C端包含一个卷曲螺旋结构域，其中C端被预测包含FFAT类似基序。
[0006]近年来，SCRN1在神经系统中的功能逐渐被揭示：连续动态的内质网是细胞中最丰富的细胞器之一。在神经元中，树突含有粗面内质网和滑面内质网，而轴突只含有滑面内质网。滑面内质网缺乏核糖体，不参与蛋白质翻译，然而它对Ca
2+
稳态、脂质合成转运以及信号传递至关重要。内质网跨膜蛋白(VAMP associated protein,VAP)是促进内质网和其他细胞内膜之间紧密膜连接的关键分子，在不同的细胞类型中广泛表达。VAP包含一个插入内质网膜的C端跨膜结构域和一个处于细胞质的N端结构域以及一个精子蛋白(MSP)结构域。MSP结构域具有一个VAP蛋白特有的FFAT基序结合位点，这也是其与SCRN1结合的结构基础。SCRN1可以与VAP相互作用进而维持神经元间Ca
2+
交换和脂质转移(Lindhout FW等.VAP
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SCRN1 interaction regulates dynamic endoplasmic reticulum remodeling and presynaptic function[J].EMBO J,2019,38(20):e101345.)。此外，SCRN1还被鉴定为一种新型淀粉样斑块相关的神经元蛋白，在阿尔茨海默病和唐氏综合症等神经退行性疾病的神经元纤维和轴突中大量累积。因此，SCRN1也有潜力作为一种新的阿尔茨海默症的生物标志物和治疗靶点。
[0007]此外，既往也有研究提示SCRN1与肿瘤进展存在一些潜在联系。例如，SCRN1是结直肠癌、胃癌、前列腺癌、白血病等癌症的易感基因；在结肠癌中，SCRN1可能通过增强基质金属蛋白酶2/9的分泌促进肿瘤细胞的生长和迁移(LinS等.Secernin
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1 contributes to colon cancer progression through enhancing matrix metalloproteinase
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2/9 exocytosis[J].Dis Markers,2015,2015:230703.)。上述研究提示SCRN1可能参与多种肿瘤生物学调控，目前国内外尚未有关于SCRN1直接参与调控肝癌进展或索拉非尼耐药的研究报道。而本领域迫切需要寻找到可有效用于肝细胞癌治疗，尤其是获得性耐药抑制剂的分子，并将其用于这些用途中。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供SCRN1抑制剂在肿瘤治疗，尤其是肿瘤索拉非尼治疗联合用药中的用途。本专利技术第二目的在于提供一种肝细胞癌的治疗药物，尤其与肝细胞癌治疗药物联用的获得性耐药抑制剂分子，其本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SCRN1抑制剂在制备肝细胞癌治疗药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肝细胞癌治疗药物为肝细胞癌获得性耐药抑制剂。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：其中，所述SCRN1选自如下任一种物质：SCRN1基因、SCRN1的mRNA或cDNA、SCRN1蛋白或前述任一种的活性或标志性片段，所述SCRN1抑制剂选自如下任一种物质：降低SCRN1表达水平、降低SCRN1活性或促进SCRN1代谢的物质。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：其中，所述SCRN1抑制剂包括SCRN1的sgRNA及Crisper
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CAS9 mRNA、小干扰RNA分子、短发夹RNA、反义核苷酸中的任意一种，或携带上述任一种物质的纳米颗粒、病毒载体、PEG修饰蛋白、蛋白微球、脂质体或细胞外囊泡。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述SCRN1抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐胜，于益芝，殷书磊，陶翊桀，薛逸荃，吴芸杨，李春震，沈鑫，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学，
类型：发明
国别省市：