一种用于治疗脓毒症的脂质金纳米颗粒复合物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗脓毒症的脂质金纳米颗粒复合物，其制备方法包括如下步骤：将十二烷基硫酸钠SDS加入AuNPs的分散液中，并分散均匀；向其中加入β

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗脓毒症的脂质金纳米颗粒复合物及其制备方法


[0001]本专利技术属于脓毒症治疗药物
，具体涉及一种用于治疗脓毒症的脂质金纳米颗粒复合物及其制备方法。

技术介绍

[0002]这里的陈述仅提供与本专利技术相关的
技术介绍
，而不必然地构成现有技术。
[0003]脓毒症是指宿主对感染的反应失调，并产生危及生命的器官功能障碍。脓毒症是造成全球疾病负担的主要因素之一。患者住院时间长、治疗费用高且死亡率高。尽管近年来在抗生素治疗和支持性治疗等重症监护方面取得了进展，但目前在许多问题上仍然存在重大的知识空白，包括与脓毒症发病机理相关的基本机制仍然不明确。深入研究脓毒症发病机制，寻找新的防治途径，已成为国际危重症医学领域的迫切任务。
[0004]临床中发现脓毒症患者通常会出现进行性的皮下水肿和体腔积液，这表明脓毒症患者血管通透性普遍增加。血管通透性增加会导致水和大分子蛋白不受控制地进入组织，造成组织水肿，进一步会导致组织缺氧；同时由于间质压升高损害微血管灌注，可能造成器官功能障碍。内皮完整性的丧失与脓毒症相关的器官损伤和死亡密切相关。因此，改善内皮屏障功能，维持血管内皮完整性，可能会成为脓毒症治疗的新靶点，具有重要的临床意义。
[0005]血管内皮屏障取决于相邻血管内皮细胞之间结合的完整性。紧密连接(Tight junctions，TJs)是血管内皮细胞之间的主要连接方式之一。其中，Claudin
‑
5蛋白是紧密连接的主要组成部分，在维持内皮细胞通透性方面起到了至关重要的决定。研究表明上调Claudin
‑
5蛋白的表达，可修复受损的紧密连接，有效降低血管通透性。
[0006]基因治疗是指利用基因载体将目标基因运入靶细胞中，通过沉默致病基因或增加治疗基因的表达来治疗许多目前难解决的疑难杂症，如癌症等。因此，通过基因治疗的方式直接上调Claudin
‑
5蛋白的表达，是修复血管内皮细胞连接损伤的一种潜在的新策略。然而，核酸在体内会被核酸酶降解，导致到达目标部位的核酸浓度较低，治疗效果并不理想，这极大地限制了核酸药物的临床应用。为了解决核酸分子在体内易被核酸酶降解的问题，科学家们设计出一系列基因载体，用于保护核酸分子，提高递送效率。目前，基因治疗所用基因载体主要分为两大类，病毒载体和非病毒载体。病毒载体转染效率高，但其自身具有免疫原性，进入机体后容易触发免疫反应，大大限制了病毒载体的临床应用。

技术实现思路

[0007]针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种用于治疗脓毒症的脂质金纳米颗粒复合物RLAC及其制备方法。本专利技术采用基因治疗的方式，通过将Claudin
‑
5过表达质粒运载进入内皮细胞中表达以升高Claudin
‑
5的表达水平，重建血管内皮屏障，从而降低血管通透性，起到治疗脓毒症的目的。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：
[0009]一种用于治疗脓毒症的脂质金纳米颗粒复合物，其制备方法包括如下步骤：
[0010]将十二烷基硫酸钠(SDS)加入金纳米颗粒(AuNPs)的分散液中，并分散均匀；
[0011]向溶液中加入β
‑
巯基乙胺(β
‑
MEA)，其中，AuNPs、SDS和β
‑
MEA的终浓度分别为(1～4nM)、(12～18mM)和(55～60mM)，继续搅拌4～10h后过滤除去SDS，将剩余溶液在12000～18000rpm/min离心浓缩，将浓缩液进行透析纯化，纯化完成后，调节pH值为4～5，得到表面带正电荷的AuNPs溶液；
[0012]向阳离子AuNPs溶液中加入Claudin
‑
5过表达质粒，搅拌过夜，得AuNP
‑
Claudin
‑
5复合物(AC)溶液；
[0013]将大豆卵磷脂、胆固醇和2
‑
二油酰基羟丙基
‑3‑
N,N,N
‑
三甲铵氯DOTAP按质量比为0.2～0.6：0.05～0.3：0.01～0.09加入茄形瓶中，并加入甲醇溶液150～200mL，加热使其溶解，然后冷却至室温，旋转蒸发除去甲醇，得到附着在茄形瓶瓶壁上的脂质体薄膜；
[0014]将AC复合物溶液加入所述茄形瓶中，震荡水化1～4h，然后超声破碎脂质体，离心纯化、过滤后，即得Lipo
‑
AuNP
‑
Claudin
‑
5复合物(LAC)。
[0015]将REDVC
‑
PEG
2000
‑
DSPE溶液加入LAC复合物溶液中，其中REDVC
‑
PEG
2000
‑
DSPE是磷脂质量的5％～20％。所述溶液震荡4～8h，使REDVC
‑
PEG
2000
‑
DSPE完全插入LAC复合物的脂质体层中，即得RLAC复合物。
[0016]阳离子AuNPs与Claudin
‑
5过表达质粒通过静电连接在一起时，AuNPs作为核，可以使附近Claudin
‑
5过表达质粒的浓度大大升高。随后在最外层包裹了一层阳离子脂质体，将Claudin
‑
5过表达质粒与AuNPs封闭在阳离子脂质体内，保护Claudin
‑
5过表达质粒不被核酸酶降解。并且阳离子脂质体因与细胞膜表面所带电荷相反，可以增加基因载体进入细胞以及发生内体逃逸的能力。在阳离子脂质体表面修饰了靶向肽REDV，通过REDV肽与内皮细胞膜上整合素α4β1的特异性作用，可以使基因载体特异性靶向血管内皮细胞。基因载体将Claudin
‑
5过表达质粒运载进入血管内皮细胞后，Claudin
‑
5过表达质粒表达，Claudin
‑
5表达水平增加，重建血管内皮屏障，降低血管通透性，起到治疗脓毒症的目的。
[0017]在一些实施例中，所述AuNPs分散液的制备方法为：在两口瓶中加入质量分数为20％～30％的四氯化金溶液和蒸馏水，四氯化金溶液和蒸馏水的体积比为10
‑3～5
×
10
‑3：4～8，加热至沸腾；
[0018]然后加入质量分数为0.8％～1.5％的柠檬酸三钠溶液，柠檬酸三钠溶液与蒸馏水的体积比为6～10：40～80，继续加热，沸腾15～30min后停止加热，降温后，即得AuNPs分散液。
[0019]优选的，柠檬酸三钠溶液的浓度为0.8％～1.2％。
[0020]在一些实施例中，所述四氯化金溶液的质量分数为24％～28％。
[0021]优选的，制得的AuNPs分散液于3～5℃避光保存。
[0022]在一些实施例中，所述滤膜为0.22μm。
[0023]在一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗脓毒症的脂质金纳米颗粒复合物，其特征在于：其制备方法包括如下步骤：将十二烷基硫酸钠加入AuNPs的分散液中，并分散均匀；向其中加入β
‑
MEA，AuNPs、SDS和β
‑
MEA的浓度分别为1～4nM、12～18mM和55～60mM，继续搅拌4～10h，后过滤除去SDS，将剩余液体在12000～18000rpm/min离心浓缩，将浓缩液进行透析纯化，纯化完成后，调节pH值为4～5，得阳离子AuNPs溶液；向阳离子AuNPs溶液中加入Claudin
‑
5过表达质粒，搅拌过夜，得AC溶液；将大豆卵磷脂、胆固醇和DOTAP按质量比为0.2～0.6：0.05～0.3：0.01～0.09加入茄形瓶中，并加入甲醇溶液，加热使三者溶解混匀，然后冷却至室温，旋转蒸发除去甲醇，得到阳离子脂质体；将AC溶液加入所述茄形瓶中，震荡水化1～4h，然后超声破碎脂质体，离心纯化、过滤后，即得RLAC复合物。2.根据权利要求1所述的用于治疗脓毒症的脂质AuNPs复合物，其特征在于：所述AuNPs分散液的制备方法为：在两口瓶中加入质量分数为20％～30％的四氯化金溶液和蒸馏水，四氯化金溶液和蒸馏水的体积比为10
‑3～5
×
10
‑3：4～8，加热至沸腾；然后加入质量分数为0.8％～1.5％的柠檬酸三钠溶液，柠檬酸三钠溶液与蒸馏水的体积比为6～10：40～80，继续加热，沸腾15～30min后停止加热，降温后，即得AuNPs分散液...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘炬，蘧文雅，李平，唐波，孟宪丽，解淑慧，尹慧利，刘雅楠，
申请(专利权)人：山东第一医科大学第一附属医院山东省千佛山医院，
类型：发明
国别省市：