一种多糖铁高效液相色谱鉴别的样品处理方法技术

本发明专利技术公开了一种多糖铁高效液相色谱鉴别的样品处理方法，包括如下步骤：1)解络合，将多糖铁供试品溶于水中，加入磷酸二氢钾解络合，沉淀，取上清液；2)水解，取步骤1)中的上清液，用酸调节pH至酸性，加热进行水解，水解完成后，冷却，用碱调节pH至4

【技术实现步骤摘要】
一种多糖铁高效液相色谱鉴别的样品处理方法


[0001]本专利技术涉及化合物分析
，特别是一种多糖铁高效液相色谱鉴别的样品处理方法。

技术介绍

[0002]合成多糖铁采用的多糖不同，可合成不同的多糖铁。多糖的差异分为分子量的差异和R基团的差异。关于多糖铁的鉴别，目前大多只对供试品进行铁鉴别和糖鉴别，其中糖鉴别仅仅是采用糖的化学反应鉴别供试品中是否含有糖，而未对糖的种类进行鉴别，所以无法达到区分不同多糖铁的目的。
[0003]申请人专利技术了采用高效液相色谱法测定多糖铁中多糖的分子量和R基团，最终达到对多糖具体种类结构进行鉴别的方法。但是如何处理样品以得到R基团，一般需要解络合，然后水解，目前多糖解络合一般采用磷酸二氢钠，但是用在多糖铁解络合时，响应值不高。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了解决上述问题，设计了一种多糖铁高效液相色谱鉴别的样品处理方法，提高响应值。
[0005]实现上述目的本专利技术的技术方案为：一种多糖铁高效液相色谱鉴别的样品处理方法，包括如下步骤：
[0006]1)解络合，将多糖铁供试品溶于水中，加入磷酸二氢钾解络合，沉淀，取上清液；
[0007]2)水解，取步骤1)中的上清液，用酸调节pH至酸性，加热进行水解，水解完成后，冷却，用碱调节pH至4
‑
6，过滤，得到多糖酸溶液；
[0008]上述方案中：步骤1)解络合时水的加入量与供试品称量的比值为8
‑
15m l/g。
[0009]上述方案中：所述磷酸盐的加入量与供试品的质量比为0.005
‑
0.08mo l/g。优选为0.014
‑
0.018mo l/g。
[0010]上述方案中：解络合的温度为80℃以上。
[0011]上述方案中：水解步骤中，用酸调节pH1
‑
2，水解温度控制在140
‑
180℃，水解时间60
‑
100mi n。
[0012]多糖铁中多糖末端基团检测，采用安捷伦高效液相色谱仪进行检测，以葡萄糖、对应多糖铁的多糖酸钠的混合溶液作为对照品，检测步骤2)水解溶液中的多糖酸与对照品中的多糖酸钠的相对保留时间是否一致，以确定多糖铁的多糖酸类别；
[0013]为区分不同的多糖铁，本专利技术采用高效液相色谱法检测多糖铁中多糖(多糖通式：Gn
‑
R，其中G表示葡萄糖，n表示葡萄糖的数量，R表示多糖的末端连接基团)的分子量及多糖的R结构(R为
‑
OCH2(CHOH)4CH2OH(对应水解产物为葡萄糖)或
‑
OCH2(CHOH)
n
COOH(对应水解产物为多碳糖酸及其含盐化合物))，从而达到区别不同多糖铁目的。
[0014]多糖铁解络合溶液用于继续水解时，解络合采用的盐应采用磷酸二氢钾。在实验
中，惊奇的发现在多糖铁用量一致的情况下，采用磷酸二氢钾解络合的溶液继续水解得到的多碳糖酸或多碳糖酸盐较使用磷酸二氢钠时的检测响应值高出许多。
附图说明
[0015]图1为实施例1多糖末端基团检测图。
[0016]图2为实施例2的多糖末端基团检测图。
[0017]图3为按照实施例1的方法，采用磷酸二氢钠解络合后，多糖末端基团检测图。
具体实施方式
[0018]下面结合附图对本专利技术进行具体描述。
[0019]实施例1
[0020]多糖铁，CAS号为：57680
‑
55
‑4[0021]1)多糖铁中多糖末端基检：
[0022]用安捷伦高效液相色谱仪进行检测，以葡萄糖、对应葡庚糖酸钠的混合溶液作为对照品，检测多糖酸溶液中的多糖酸与对照品中的多糖酸钠的保留时间是否一致，以确定多糖铁的多糖酸类别。
[0023]多糖铁解络合及多糖水解
[0024]取CAS号为：57680
‑
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‑
4的多糖铁10g，加80ml水80℃加热溶解，加入约24g磷酸二氢钾(0.176mo l)，80℃加热解络合至灰绿色，离心沉淀，取上清液，用浓盐酸调节pH值至1.5左右，密封，置160℃水解反应80mi n，取出放冷，用5mo l/L的氢氧化钠调节pH至4.5左右，过滤即得葡庚糖酸溶液。
[0025]取CAS号为：57680
‑
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‑
4的多糖铁10g，加80ml水80℃加热溶解，加入约24g磷酸二氢钠，80℃加热解络合至灰绿色，离心沉淀，取上清液，用浓盐酸调节pH值至1.5左右，密封，置160℃水解反应80mi n，取出放冷，用5mo l/L的氢氧化钠调节pH至4.5左右，过滤即得葡庚糖酸溶液。
[0026]采用磷酸二氢钠解络合所得检测结果如图3所示，对比图1磷酸二氢钾解络合的溶液继续水解得到的多碳糖酸或多碳糖酸盐较使用磷酸二氢钠时的检测响应值高出许多。
[0027]溶液配制
[0028]系统适用性溶液：取葡萄糖5mg、葡萄糖酸钠1mg、葡庚糖酸钠1mg置同一进样小瓶中，加1m l空白溶剂溶解即得/(葡萄糖定位溶液：取葡萄糖对照品适量，空白溶剂(流动相，10mmo l/L的磷酸氢二钠(磷酸调pH至2.8)—乙腈(80:20))配成每1m l含葡萄糖5mg的溶液；葡萄糖酸钠定位溶液：取葡萄糖酸钠对照品适量，空白溶剂配成每1m l含葡萄糖酸钠1mg的溶液；葡庚糖酸钠定位溶液：取葡庚糖酸钠对照品适量，空白溶剂配成每1m l含葡庚糖酸钠1mg的溶液。)
[0029]色谱条件
[0030]采用XAmi de色谱柱(5m 100A 4.6*250nm)；10mmo l/L的磷酸氢二钠(磷酸调pH至2.8)—乙腈(20:80)为流动相，流速1.0m l/mi n,柱温35℃；采用紫外检测器，检测波长为200nm。
[0031]分别精密吸取空白溶剂、系统适用性溶液、水解溶液各10μl，分别注入液相色谱
仪，记录色谱图，空白溶剂、葡萄糖、葡萄糖酸钠、葡庚糖酸钠、样品色谱图见图1。结果表明空白溶剂、葡萄糖、葡萄糖酸不干扰葡庚糖酸测定。
[0032]系统精密度试验
[0033]精密吸取系统适用性溶液10μl，连续进样6次，计算系统适用性溶液主峰保留时间的RSD％值，结果见表1。结果表明，系统适用性溶液6次进样结果中主峰保留时间RSD％分别为0.3％、0.2％、0.2％，说明本验证方法系统精密度良好。
[0034]表1系统精密度试验结果
[0035][0036][0037]重复性试验
[0038]平行制备6份供试品溶液，进样10μl进行测定。计算葡庚糖酸峰保留时间的RSD％值，结果见表2。结果表明，6份供试品进样检测后均有葡庚糖酸峰，出峰时间RSD％值为0.1％，说明本验证方法的重复性良好。
[0039]表2重复性试验
[0040][0041]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多糖铁高效液相色谱鉴别的样品处理方法，包括如下步骤：1)解络合，将多糖铁供试品溶于水中，加入磷酸二氢钾解络合，沉淀，取上清液；2)水解，取步骤1)中的上清液，用酸调节pH至酸性，加热进行水解，水解完成后，冷却，用碱调节pH至4
‑
6，过滤，得到多糖酸溶液。2.根据权利要求1所述多糖铁高效液相色谱鉴别的样品处理方法，其特征在于：步骤1)解络合时水的加入量与供试品称量的比值为8
‑
15ml/g。3.根据权利要求2所述多糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：周兴国，周敏，罗艺，王源，何东贤，
申请(专利权)人：重庆医药高等专科学校，
类型：发明
国别省市：