【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种基于等位基因特异性扩增的双探针基因突变检测方法,包括如下步骤:以待检测的来自于人体组织的基因组为模板,用针对突变位点设计的引物组和没有3’-5’端外切酶活性的DNA聚合酶进行多重等位基因特异性PCR扩增,然后将得到的PCR产物与相应的根据该突变位点设计的等位基因特异性探针进行杂交,根据杂交结果确定各基因位点的突变类型;其中 所说的引物组包括以下5条引物:野生型等位基因内引物Inner primer-W、突变型等位基因内引物Inner primer-M、野生型等位基因 外引物Outer primer-W、突变型等位基因外引物Outer primer-M、特异性扩增辅助引物GC-primer; 所述等位基因特异性内引物的结构为:靠近其5’端的是一段长度为8-15nt的由G和C组成的与模板DNA不匹配的 序列;靠近其3’端的是一段包括17-30nt的序列,且3’端最后一个碱基恰好位于待检测的一个基因突变位点上,与该位点的突变型或野生型碱基匹配,其余碱基与突变位点前的相应片段完全匹配; 所述各个位点共用的特异性扩增辅助引物GC-prim er是一段由G和C组成 ...
【技术特征摘要】
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