一种革兰氏阴性菌的抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种革兰氏阴性菌的抑制剂及其应用，属于抗菌技术领域，所述抑制剂包括罗汉松脂苷。本发明专利技术的抑制剂对大肠杆菌的细胞膜具有显著的破坏作用。本发明专利技术还提供了一种罗汉松脂苷在制备革兰氏阴性菌抑制剂中的应用，所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌。所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌。所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌。

【技术实现步骤摘要】
一种革兰氏阴性菌的抑制剂及其应用


[0001]本专利技术属于抗菌
，尤其涉及一种革兰氏阴性菌的抑制剂及其应用。

技术介绍

[0002]抗生素(antibiotics)是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生命过程中所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物，能干扰其他细胞发育功能的化学物质。而随着抗生素的广泛使用甚至滥用，导致细菌对抗生素的耐药性问题已十分严重，抗生素耐药性正在对全球健康构成威胁。
[0003]大肠杆菌是临床常见的病原菌。2020年全国细菌耐药监测报告显示，临床上大肠杆菌的分离率最高，可达29.7％。大肠杆菌对临床常见的抗菌药物如氨苄西林，头孢唑林，头孢呋辛，环丙沙星，头孢曲松，头孢噻肟，左氧氟沙星，庆大霉素，氨曲南，头孢吡肟，头孢他啶，复方磺胺甲噁唑以及氨苄西林/舒巴坦的耐药性很强。据统计，临床分离的大肠杆菌对氨苄西林的耐药率在83％以上，对头孢唑林的耐药率高达64％，对复方磺胺甲噁唑，头孢呋辛，环丙沙星，头孢曲松，头孢噻肟的耐药率在50
‑
60％之间，对左氧氟沙星和氨苄西林/舒巴坦的耐药的耐药率在40
‑
50％之间，对庆大霉素和氨曲南的耐药率在30
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40％之间，对头孢吡肟和头孢他啶的耐药率在20
‑
30％之间。可知，大肠杆菌对常见的抗生素药物已具有明显的耐药性。
[0004]目前，现有文献尚未见关于罗汉松脂苷对多重耐药大肠杆菌抑菌作用的报道。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种革兰氏阴性菌的抑制剂及其应用，本专利技术中的抑制剂对大肠杆菌细胞膜具有显著的破坏作用，为探索新型抗菌药物提供理论基础。
[0006]为实现上述目的，本专利技术通过下述技术方案来实现：
[0007]一种革兰氏阴性菌的抑制剂，包含罗汉松脂苷，所述罗汉松脂苷的浓度为1
‑
1000μg/ml；
[0008]优选的，所述罗汉松脂苷的浓度为50
‑
300μg/ml；
[0009]优选的，所述抑制剂的剂型包括片剂、注射剂或胶囊剂。
[0010]本专利技术还提供了罗汉松脂苷在制备革兰氏阴性菌抑制剂中的应用；
[0011]所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌。
[0012]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0013]本专利技术中的罗汉松脂苷能够使大肠杆菌细胞膜的完整性受损，进而导致细胞膜的通透性增加，引起大肠杆菌细胞的死亡。
附图说明
[0014]图1为罗汉松脂苷的化学结构式；
[0015]图2为未加罗汉松脂苷处理的大肠杆菌的结果；
[0016]图3为用罗汉松脂苷处理的大肠杆菌的结果；
[0017]图4为大肠杆菌细胞膜的通透性结果；
[0018]图5为未加罗汉松脂苷处理的大肠杆菌的三维图像；
[0019]图6为经罗汉松脂苷处理的大肠杆菌的三维图像。
具体实施方式
[0020]本专利技术提供了一种革兰氏阴性菌的抑制剂，包含罗汉松脂苷，所述罗汉松脂苷的浓度为1
‑
1000μg/ml；
[0021]在本专利技术中，所述罗汉松脂苷的浓度优选为50
‑
300μg/ml，进一步优选为80
‑
200μg/ml，更进一步优选为100
‑
150μg/ml；所述抑制剂的剂型为片剂、注射剂或胶囊剂。
[0022]本专利技术还提供了所述罗汉松脂苷在制备革兰氏阴性菌抑制剂中的应用；
[0023]在本专利技术中，所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌BNCC358242，购自北京北纳创联生物技术研究院；在进行抑菌实验时，将所述罗汉松脂苷加入DMSO中进行溶解处理。
[0024]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0025]在本专利技术中，以下所用的试剂及原料等均为市售产品，可常规获得。实施例1：罗汉松脂苷对细菌表面形态的影响
[0026](1)在浓度为1
×
108CFU/mL的大肠杆菌BNCC358242悬浮液中加入浓度为100μg/ml的罗汉松脂苷，在37℃下摇床培养4h，获得含罗汉松脂苷的大肠杆菌混合物；
[0027](2)将所述含罗汉松脂苷的大肠杆菌混合物以5000g的离心力离心5min，获得沉淀后用PBS缓冲液清洗两次，加入含有2.5％(v/v)戊二醛的PBS缓冲液中，4℃过夜，获得固定化的大肠杆菌；
[0028](3)将所述固定化的大肠杆菌以5000g的离心力离心5min，依次用30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％和100％的乙醇对大肠杆菌进行梯度脱水15min，再用叔丁醇处理2次，每次10min，将大肠杆菌样品滴在锡箔纸上进行真空冷冻干燥处理，所述真空冷冻干燥的条件为先在4℃下预冻10min，再将其置于
‑
18℃冷冻15min，获得冷冻干燥处理的大肠杆菌；
[0029](4)将所述冷冻干燥处理的大肠杆菌样品置于镀金仪中真空喷金90s，用扫描电子显微镜进行成像以观察其外形变化。
[0030]同时，设定未经处理的大肠杆菌的对照组，具体方法与上述方法相同，仅在步骤(1)中省略罗汉松脂苷的使用。
[0031]所述外形变化的结果如图2和图3所示。
[0032]由图2和图3可知，未经处理的大肠杆菌细胞完整且呈短棒状；而经罗汉松脂苷处理的大肠杆菌呈现变形、凹陷、萎缩、融合及胞内物质析出的现象。这些形态变化表明罗汉松脂苷能够破坏大肠杆菌细胞的渗透性和完整性，从而引起胞内物质，如离子、蛋白质和遗传物质等的泄露，导致大肠杆菌的形态异常。
[0033]实施例2：大肠杆菌细胞膜的通透性检测
[0034](1)取1ml浓度为1
×
108CFU/mL的大肠杆菌BNCC358242悬浮液置于无菌离心管中，加入0.2ml浓度为300μg/ml的罗汉松脂苷，于37℃恒温培育4h；
[0035](2)取0.2ml恒温培育后的大肠杆菌悬浮液和60μlPI+SYTO9加入试管中，在黑暗中静置15min，获得染色后的大肠杆菌悬浮液；
[0036](3)取10μl染色后的大肠杆菌悬浮液置于载玻片上并用盖玻片覆盖，置于共聚焦显微镜下观察大肠杆菌细胞膜的通透性。结果如图4所示。
[0037]所述PI是一种核酸荧光染料，其本身荧光强度较弱，一旦结合至核酸物质当中，其荧光强度大幅度增加；PI不能穿透活细菌的细胞膜；当细菌的细胞膜通透性增加，细菌死亡后，PI能够穿透细菌细胞膜，结合至核酸物质当中，显示出特有的红色。所述SYTO9可对活细胞染色，显示绿色。
[0038]由图4可以看出，未经处理的大肠杆菌显示绿色荧光的区域最大，显示红色荧光的区域较少；而经处理的大肠杆菌细胞呈现红色的区域较多。表明大肠杆菌暴露于罗汉松脂苷后细胞膜本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种革兰氏阴性菌的抑制剂，其特征在于，包含罗汉松脂苷，所述罗汉松脂苷的浓度为1
‑
1000μg/ml。2.根据权利要求1所述的抑制剂，其特征在于，所述罗汉松脂苷的浓度为50
‑
300μg/ml。3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏小娟，张继瑜，王玮玮，白玉彬，周绪正，李冰，王玲，程富胜，杨枭荣，翟斌涛，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，
类型：发明
国别省市：