一种混合芽孢杆菌的培养方法技术

本发明专利技术属于多种芽孢杆菌混合培养技术领域，具体涉及多种微生物菌剂的制备方法。本发明专利技术的复合微生物菌剂有四种芽孢杆菌（Bacillus）按1:1:1:1的比例混合发酵而成，其中芽孢杆菌的有效活菌数≥2

【技术实现步骤摘要】
一种混合芽孢杆菌的培养方法


[0001]本专利技术属于芽孢混合发酵
，具体涉及多种微生物菌剂的培养方法。

技术介绍

[0002]由于分别单一发酵的周期较长，单个发酵罐只能发酵一种芽孢，在发酵效率上降低明显，大大增加对机器设备的损耗同时增加了人工劳动以及电力资源的浪费。若不进行改善将是很大的经济开支。利用混合培养发酵，一来可以提高发酵效率缩短发酵周期，二来，可以节约电力资源，同时可以减少劳动消耗以及设备的损耗，因此混合培养微生物的方法成为研发的重中之重。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种发酵方法使多种微生物在一个发酵罐中同时发酵，且还要保证其有效活菌含量不能低于现有水平，同时，发酵过程中相对减少人力电力的浪费。达到菌含量达标和节约成本的目的。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：选用四种芽孢杆菌，所述芽孢杆菌其编号为1,2,3,4，通过混合培养使其芽孢杆菌的有效活菌数≥2
×
10
9 cfu/g。
[0005]所述混合芽孢杆菌的培养方法，包括以下步骤：（1）菌种优化：将四种芽孢杆菌分别进行液态发酵，得到大量的微生物菌体；（2）培养基优化：对四种芽孢发酵培养基进行优化筛选获得新的培养基，Plackett
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Burman(PB)筛选技术：通过对每个因子取两水平来进行分析，通过比较各个因子两水平之间的差异来确定因子的显著性来优化培养基；（3）阶段性接种方法：将芽孢杆菌分别在不同时期进行接种，保持各菌的活性；（4）流加营养元素：在发酵过程中通过流加营养元素来保持菌体生长需要，同时有效控制芽孢率，其中芽孢杆菌有效活菌数≥2
×
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9 cfu/g。
[0006]所述芽孢杆菌菌种优化采用以下步骤：将四种芽孢杆菌菌株从斜面分别接种至培养基中培养2
‑
3 d，挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2
‑
3次，从而得到生长良好的菌落，挑选其中部分菌落接种到摇瓶培养基中培养得到菌液。
[0007]所述种子培养基相同，配方为0.5%酵母提取物，1%胰蛋白胨，1%氯化钠，琼脂1.5%
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2%，pH为7.0
‑
7.5；摇瓶培养基配方为0.5%酵母提取物，1%胰蛋白胨，1%氯化钠。
[0008]所述发酵条件为温度为37
‑
37.5℃。
[0009]所述固态发酵条件为温度为60
‑
65℃，初始pH值为7.0
‑
8.0。
[0010]所述混合芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述芽孢杆菌的阶段性接种采用以下步骤：（1）把优化后培养出来的1号芽孢菌液接入发酵罐培养基中，培养2
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4h；
（2）把优化后培养出来的2号芽孢菌液接入发酵罐培养基中，培养2
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4h；（3）把优化后培养出来的3号芽孢菌液接入发酵罐培养基中，培养2
‑
4h；（4）把优化后培养出来的4号芽孢菌液接入发酵罐培养基中，培养3h.所述发酵罐培养基的配方为玉米淀粉1.8kg，牛肉膏0.18kg，蛋白胨0.8kg， 酵母粉0.64kg，磷酸二氢钾0.24kg，磷酸氢二钾0.12kg，硫酸镁0.032kg，乙酸钠0.2kg，柠檬酸钠0.16kg，碳酸钙0.24kg，硫酸锰8g，硫酸亚铁16g，消泡剂0.24kg，pH 7.0
‑
7.5。
[0011]所述的混合芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述芽孢杆菌在发酵阶段流加营养元素，营养元素配方为蛋白胨5%，酵母粉2.5%，硫酸镁1%，牛肉膏1%。
[0012]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术所述混合芽孢杆菌的培养方法由四种芽孢杆菌（Bacillus）混合培养发酵而成，本专利技术通过对菌种和培养基的优化达到四种芽孢在发酵罐共存生长，在保证菌含量达标的情况下相比分别发酵缩短了发酵周期，减少人员劳动，同时节约电力资源，达到资源节约减少成本的目的。
附图说明
[0013]图1为本专利技术所述混合芽孢杆菌培养的方法流程图。
具体实施方式
[0014]下面结合具体附图和实施例对本专利技术作进一步说明。
[0015]实施例1以上所述，仅是本专利技术的较佳实施例，并非对本专利技术作任何限制。凡是根据本专利技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本专利技术技术方案的保护范围内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种混合芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述复合微生物菌剂由四种芽孢杆菌1:1:1:1的比例混合培养而成，其中芽孢杆菌的有效活菌数≥2
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9 cfu/g。2.权利要求1所述复合微生物菌剂的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）菌种优化：将四种芽孢杆菌分别进行液态发酵，得到大量的微生物菌体；（2）培养基优化：对四种芽孢发酵培养基进行优化筛选获得新的培养基；（3）阶段性接种方法：将芽孢杆菌分别在不同时期进行接种，保持各菌的活性；（4）流加营养元素：在发酵过程中通过流加营养元素来保持菌体生长需要，同时有效控制芽孢率，其中芽孢杆菌有效活菌数≥2
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9 cfu/g。3.如权利要求2所述复合微生物菌剂的培养方法，其特征在于，所述芽孢杆菌发酵产物中菌含量为2
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9 cfu/g。4.如权利要求2所述混合芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述四种芽孢杆菌菌种优化采用以下步骤：将四种芽孢杆菌菌株从斜面分别接种至培养基中培养2
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3 d，挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2
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3次，从而得到生长良好的菌落，挑选其中部分菌落接种到摇瓶培养基中培养得到菌液；所述种子培养基相同，配方为0.5%...

【专利技术属性】
技术研发人员：张六六，朱选，陆沙，
申请(专利权)人：江苏纳克生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：