一种上呼吸道病原体的检测试剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种上呼吸道病原体的检测试剂及其制备方法和应用，涉及生物检测领域。本发明专利技术通过对多种呼吸道病原体的序列进行研究，设计了特异性的引物和探针组合，具体包括如SEQ ID No.1～43所示序列，该引物和探针组合即保证了引物探针设计的保守性，又避免了不同引物探针之间出现相互干扰配对，提高了检测结果的灵敏度和特异性，且检测时间短，为上呼吸道病毒感染的检测提供了更好的途径。吸道病毒感染的检测提供了更好的途径。吸道病毒感染的检测提供了更好的途径。

【技术实现步骤摘要】
一种上呼吸道病原体的检测试剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，具体而言，涉及一种上呼吸道病原体的检测试剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]呼吸道感染(Respiratorytract infection，RTI)是全球范围内引起人群发病和死亡率的主要原因之一。上呼吸道感染引起的临床症状比较相似，具体表现主要为发热、鼻炎、咽炎喉炎、扁桃体炎等，严重时可能引起气管炎、支气管炎及肺炎。不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程不相同。目前大部分上呼吸道疾病80％是病毒性感染，少数为细菌。常见的上呼吸道病原体主要有呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒、副流感病毒、博卡病毒、偏肺病毒、肺炎链球菌、肺炎支原体等。
[0003]流行性感冒病毒(influenza virus)是一种RNA病毒，分为甲(A)、乙(B)、丙(C)和丁(D)亚型。甲型流感病毒抗原性易发生变异，形成新亚型(如H1N1
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H2N2、H2N2
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H3N2)，由于人群缺少对变异病毒株的免疫力，从而多次引起流感的世界性大流行。例如1918～1919年的西班牙流感大流行导致至少2000～4000万人死亡；1946～1957年流行的甲型流感病毒H1N1；1957～1968年流行的甲型流感病毒H2N2；1968～1977年流行的甲型流感病毒H3N2，都说明自然流行情况下可发生的变异。乙型流感病毒对人类致病性也比较强，分为Victoria和Yamagata两个亚型，但尚未发现乙型流感病毒引起过世界性大流行；丙型和丁型流感病毒只引起人类不明显的或轻微的上呼吸道感染，很少造成流行。
[0004]呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)是一种RNA病毒，分为A和B亚型。该病毒经空气飞沫和密切接触传播，其感染多见于新生儿和6个月以内的婴儿。RSV肺炎是一种小儿常见的间质性肺炎，婴幼儿症状较重，可有高热、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表现为细支气管炎及肺炎。少数病儿可并发中耳炎、胸膜炎及心肌炎等。近年来RSV肺炎及毛细支气管炎占我国婴幼儿病毒性肺炎第一位。
[0005]副流感病毒(Human Parainfuenza Viruses，HPIV)属于副黏病毒的RNA病毒。HPIV引起的主要疾病有普通感冒、支气管炎、细支气管炎和肺炎等。与RSV一样，HPIV可以造成反复发作的上呼吸道感染如感冒和喉咙痛等，也能造成严重的反复感染的下呼吸道疾病如肺炎、支气管炎和细支气管炎等，特别是在老年人中和有免疫缺陷人群中常见。HPIV分为四型，即PIV1～4。四种亚型各有不同的临床和流行病学特征。I型和II型的最典型的临床特征是造成儿童喉气管支气管炎，I型是主要原因，II型次之。III型经常导致肺炎和细支气管炎。IV型检出较少，可能是因为它很少导致严重的疾病。
[0006]腺病毒(adenovirus，ADV)是一种DNA病毒，自上个世纪50年代发现并成功分离以来，已陆续发现了人腺病毒有52种，分为A、B、C、D、E和F六个亚群。由腺病毒导致的呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发热、寒战、头痛和肌肉痛等。
[0007]博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)属于细小病毒科，是2005年8月首次在儿童呼吸道分泌物中发现的一种新型RNA病毒，该病毒分为1～4亚型。HBoV与人类急性呼吸道感染
密切相关，容易使婴幼儿罹患肺炎、支气管炎和支气管肺炎等疾病。其主要临床表现为咳嗽、发热、喘息、腹泻等症状，高发人群为6个月至3岁的婴幼儿，高发季节为秋冬季。博卡病毒可与其他呼吸道病毒共同感染患者，共感染率可高达51％。
[0008]鼻病毒(Human Rhino Virus，HRV)是一种小RNA病毒，引发普通感冒的主要病原。鼻病毒抗原性复杂，感染后可获得免疫力，但维持时间短，不同型鼻病毒之间很少交叉保护，因而可多次感染，无特异预防和治疗方法。HRV感染后常表现为感冒症状，大约有10％～20％的成年人感冒是由HRV感染引起，而婴幼儿感冒有15％～30％是由HRV致病。HRV的感染具有自限性，有时会引起诸如哮喘、充血性心衰、支气管扩张，包囊纤维化等严重并发症。并且HRV多与其它呼吸道病毒合并感染，例如呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒、冠状病毒以及肠道病毒等。对于儿童和患有呼吸道基础疾病的易感群体，HRV感染后还可能会出现较为严重的后遗症，严重影响患者的生活质量，给家庭和社会带来沉重的经济负担。
[0009]肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)于1881年首次由巴斯德(Louis Pasteur)及G.M.Sternberg分别在法国及美国从患者痰液中分离出。为革兰染色阳性，菌体似矛头状，成双或成短链状排列的双球菌，有毒株菌体外有化学成分为多糖的荚膜。肺炎链球主要引起人类大叶性肺炎。75％的成年人肺炎链球菌肺炎及50％以上严重的肺炎链球菌菌血症是由1
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8型肺炎链球菌引起。肺炎链球菌6、14、19及23型，常引起儿童肺炎链球菌性疾病。
[0010]肺炎支原体(Mycoplasma Pneumonia,MP)是社区获得性肺炎的常见病原体，感染MP后可引起非典型性肺炎(Atypical pneumonias)，病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎。MP主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。临床症状较轻，大多数患者只有头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状；少数会持续高热不退，剧烈咳嗽，病情进展快，短时间内出现呼吸衰竭，多器官功能性障碍等危重症变现。
[0011]现有方法用于检测多种病毒、支原体和/或支原体的方法还存在灵敏度不高，特异性不强的技术问题，尤其是针对多重扩增的情况。
[0012]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0013]本专利技术的目的在于提供一种上呼吸道病原体的检测试剂及其制备方法和应用。
[0014]本专利技术是这样实现的：
[0015]第一方面，本专利技术实施例提供了一种上呼吸道病原体的检测试剂，其包括：引物对1～13中的至少一种；其中，引物对1的核苷酸序列如SEQ ID No.1～2所示，引物对2的核苷酸序列如SEQ ID No.4～5所示，引物对3的核苷酸序列如SEQ ID No.7～8所示，引物对4的核苷酸序列如SEQ ID No.10～11所示，引物对5的核苷酸序列如SEQ ID No.13～14所示，引物对6的核苷酸序列如SEQ ID No.16～17所示，引物对7的核苷酸序列如SEQ ID No.19～20所示，引物对8的核苷酸序列如SEQ ID No.22～23所示，引物对9的核苷酸序列如SEQ ID No.25～26所示，引物对10的核苷酸序列如SEQ ID No.28、30所示或如SEQ ID No.29～30所示或SEQ ID No.28～30所示，引物对11的核苷酸序列如SEQ ID No.32～33所示，引物对1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种上呼吸道病原体的检测试剂，其特征在于，其包括：引物对1～13中的至少一种；其中，引物对1的核苷酸序列如SEQ ID No.1～2所示，引物对2的核苷酸序列如SEQ ID No.4～5所示，引物对3的核苷酸序列如SEQ ID No.7～8所示，引物对4的核苷酸序列如SEQ ID No.10～11所示，引物对5的核苷酸序列如SEQ ID No.13～14所示，引物对6的核苷酸序列如SEQ ID No.16～17所示，引物对7的核苷酸序列如SEQ ID No.19～20所示，引物对8的核苷酸序列如SEQ ID No.22～23所示，引物对9的核苷酸序列如SEQ ID No.25～26所示，引物对10的核苷酸序列如SEQ ID No.28、30所示或如SEQ ID No.29～30所示或SEQ ID No.28～30所示，引物对11的核苷酸序列如SEQ ID No.32～33所示，引物对12的核苷酸序列如SEQIDNo.所示，引物对13的核苷酸序列如SEQ ID No.38～39所示。2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括：第一核酸组合和第二核酸组合中的至少一种；其中，所述第一核酸组合包括所述引物对1～7和13，所述第二核酸组合包括所述引物对8～12；可选地，所述检测试剂包括：所述引物对1～13。3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括：用于检测上呼吸道病原体的探针；可选地，所述探针包括探针1～13中的至少一种，探针1～13的核苷酸序列依次如SEQ ID No.3、SEQ ID No.6、SEQ ID No.9、SEQ ID No.12、SEQ ID No.15、SEQ ID No.18、SEQ ID No.21、SEQ ID No.24、SEQ ID No.27、SEQ ID No.31、SEQ ID No.34、SEQ ID No.37、SEQ ID No.40和SEQ ID No.43所示；可选地，所述第一核酸组合还包括：探针1～7和13，所述第二核酸组合还包括：探针8～12；可选地，所述探针的5
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端连接有荧光报告基团，3
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端连接有荧光淬灭基团或MGB；可选地，所述荧光报告基团选自：5
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FAM、6
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FAM、HEX、TET、VIC、JOE、Cy3、Cy3.5、NED、TAMRA、ROX、Texas Red、Cy5、Cy5.5和Quasar67...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘亚宝，储倩，王丽娟，
申请(专利权)人：四川省亚中基因科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：