用于治疗眼部疾病的组合物和方法技术

一种用于治疗眼部疾病的系统和一种用于使用所述系统来治疗眼部疾病的方法。使用所述系统来治疗眼部疾病的方法。使用所述系统来治疗眼部疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗眼部疾病的组合物和方法
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求于2020年7月21日提交的中国专利申请号202010706658.X(代理人卷号57837
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709.711)和于2020年7月21日提交的中国专利申请号202010706505.5(代理人案卷号57837
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712.711)的权益，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文。

技术介绍

[0002]血管生成是指组织中血管的新形成或生长或者现有毛细血管或血管的进一步形成或生长，血管生成在疾病和健康中起着重要作用。病理性眼部血管生成或新生血管形成可能发生在视网膜、脉络膜和角膜中，并且可能造成严重的视力障碍。眼部血管生成与多种疾病相关联，包括湿性年龄相关性黄斑变性(湿性AMD)、糖尿病性视网膜病变、黄斑水肿等。
[0003]已经开发出许多用于治疗血管生成相关病症的药物，诸如抗VEGF抗体(诸如Lucentis)或融合蛋白(诸如艾力雅(Eylea))。然而，由于这些药物的半衰期短，所以需要频繁重复的注射以维持功效。因此，需要针对血管生成的新疗法来治疗与血管生成有关的眼部疾病。序列表
[0004]本申请包含序列表，其按ASCII格式以电子方式提交并且据此以引用的方式整体并入。所述ASCII副本创建2021年7月19日，名称为57837
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712_601_SL且大小为24,376字节。

技术实现思路

[0005]目前，本领域中需要开发可以有效地治疗与血管生成相关联的眼部疾病的组合物和方法。
[0006]在一些方面中，本公开内容提供了一种组合物，其包含：第一多核苷酸，其包含可操作地连接至第一启动子的第一序列和可操作地连接至第二启动子的第二序列，其中第一序列编码腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其中第二序列编码AAV rep蛋白；和第二多核苷酸，其包含可操作地连接至第三启动子的第三序列，其中第三序列包含编码血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂的密码子优化的核酸序列。
[0007]在一些实施方案中，VEGF抑制剂是融合蛋白或者VEGF抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的蛋白质。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的蛋白质。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的蛋白质。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列包含与SEQ ID NO:13相比数目不同的CpG二核苷酸。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列包含少于60个、55个、50个、45个、40个、35个、30个、25个、20个、15个、10个或5个CpG二核苷酸。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列不包含CpG二核苷酸。在一些实施方案中，第三序列包含序列SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16。在一些实施方案
中，第一启动子和第二启动子适合于在昆虫细胞或哺乳动物细胞中表达。在一些实施方案中，昆虫细胞是Sf9细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是HEK293细胞或其衍生细胞。在一些实施方案中，衍生细胞是HEK293T细胞。在一些实施方案中，第一启动子或第二启动子是p10启动子或polh启动子。在一些实施方案中，第三启动子是CMV启动子、CAG启动子、MNDU3启动子、PGK启动子、EF1a启动子或眼部特异性启动子。在一些实施方案中，眼部特异性启动子选自RPE 65基因启动子、人视网膜结合蛋白基因启动子、鼠11
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顺式类视黄醇(retinoid alcohol)脱氢酶基因启动子、视紫红质启动子、视紫红质激酶启动子、金属蛋白酶组织抑制因子3启动子、光感受器视黄醇结合蛋白启动子、卵黄状黄斑营养不良2启动子和光感受器间类视黄醇(retinoid)结合蛋白启动子。在一些实施方案中，第一序列、第二序列或第三序列的3'端还包含多聚A序列。在一些实施方案中，多聚A序列是hGH多聚(A)、SV40多聚(A)或β
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珠蛋白多聚(A)。在一些实施方案中，第一序列和第二序列通过接头连接。在一些实施方案中，接头是可切割接头。在一些实施方案中，接头包含2A肽。在一些实施方案中，接头包含内部核糖体进入位点(IRES)。在一些实施方案中，IRES来自口蹄疫病毒(FMDV)。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含内含子或调控元件。在一些实施方案中，内含子包含嵌合内含子。在一些实施方案中，调控元件包含TPL(来自腺病毒的三联前导序列)和eMLP(来自腺病毒主要晚期启动子的增强子元件)序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含Kozak序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸包含人支架附着区(SAR)序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸还包含增强子。在一些实施方案中，增强子是CMV增强子。在一些实施方案中，第二多核苷酸还包含填充序列。在一些实施方案中，第二多核苷酸还包含反向末端重复(ITR)序列。在一些实施方案中，ITR序列是AAV2 ITR。在一些实施方案中，第二多核苷酸还包含编码额外治疗性蛋白质的第四序列。在一些实施方案中，额外治疗性蛋白质选自VEGF抑制剂、PDGF抑制剂、胎盘生长因子抑制剂、整联蛋白抑制剂、mTOR抑制剂、血管生成素抑制剂和TGFβ抑制剂。在一些实施方案中，第三序列和第四序列通过接头连接。在一些实施方案中，接头是可切割接头。在一些实施方案中，接头包含2A肽。
[0008]在另一方面中，本公开内容提供了一种重组腺相关病毒(rAAV)颗粒，其通过将本文公开的任何多核苷酸或本文公开的任何组合物引入到细胞中来制备。在一些实施方案中，细胞是昆虫细胞或哺乳动物细胞。在一些实施方案中，昆虫细胞是Sf9细胞。在一些实施方案中，哺乳动物细胞是HEK293细胞或其衍生细胞。在一些实施方案中，衍生细胞是HEK293T细胞。
[0009]在另一方面中，本公开内容提供了一种多核苷酸，其包含密码子优化的核酸序列，所述密码子优化的核酸序列编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的蛋白质。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的蛋白质。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列包含与SEQ ID NO:13相比数目不同的CpG二核苷酸。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列包含少于60个、55个、50个、45个、40个、35个、30个、25个、20个、15个、10个或5个CpG二核苷酸。在一些实施方案中，密码子优化的核酸序列不包含CpG二核苷酸。在一些实施方案中，第三序列包含序列SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包含：(i)第一多核苷酸，其包含可操作地连接至第一启动子的第一序列和可操作地连接至第二启动子的第二序列，其中所述第一序列编码腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其中所述第二序列编码AAV rep蛋白，和(ii)第二多核苷酸，其包含可操作地连接至第三启动子的第三序列，其中所述第三序列包含编码血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂的密码子优化的核酸序列。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述VEGF抑制剂是融合蛋白或者VEGF抗体或其抗原结合片段。3.如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述密码子优化的核酸序列编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的蛋白质。4.如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述密码子优化的核酸序列编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的蛋白质。5.如权利要求3所述的组合物，其中所述密码子优化的核酸序列编码包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的蛋白质。6.如权利要求5所述的组合物，其中所述密码子优化的核酸序列包含与SEQ ID NO:13相比数目不同的CpG二核苷酸。7.如权利要求6所述的组合物，其中所述密码子优化的核酸序列包含少于60个、55个、50个、45个、40个、35个、30个、25个、20个、15个、10个或5个CpG二核苷酸。8.如权利要求7所述的组合物，其中所述密码子优化的核酸序列不包含CpG二核苷酸。9.如权利要求1
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8中任一项所述的组合物，其中所述第三序列包含序列SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:17或SEQ ID NO:18。10.如权利要求1
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9中任一项所述的组合物，其中所述第一启动子和所述第二启动子适合于在昆虫细胞或哺乳动物细胞中表达。11.如权利要求10所述的组合物，其中所述昆虫细胞是Sf9细胞。12.如权利要求10所述的组合物，其中所述哺乳动物细胞是HEK293细胞或其衍生细胞。13.如权利要求12所述的组合物，其中所述衍生细胞是HEK293T细胞。14.如权利要求1
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13中任一项所述的组合物，其中所述第一启动子或所述第二启动子是p10启动子或polh启动子。15.如权利要求1
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14中任一项所述的组合物，其中所述第三启动子是CMV启动子、CAG启动子、MNDU3启动子、PGK启动子、EF1a启动子或眼部特异性启动子。16.如权利要求15所述的组合物，其中所述眼部特异性启动子选自RPE 65基因启动子、人视网膜结合蛋白基因启动子、鼠11
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顺式类视黄醇脱氢酶基因启动子、视紫红质启动子、视紫红质激酶启动子、金属蛋白酶组织抑制因子3启动子、光感受器视黄醇结合蛋白启动子、卵黄状黄斑营养不良2启动子和光感受器间类视黄醇结合蛋白启动子。17.如权利要求1
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16中任一项所述的组合物，其中所述第一序列、所述第二序列或所述第三序列的3'端还包含多聚(A)序列。
18.如权利要求17所述的组合物，其中所述多聚(A)序列是hGH多聚(A)、SV40多聚(A)或β
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珠蛋白多聚(A)。19.如权利要求1
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18中任一项所述的组合物，其中所述第二多核苷酸包含内含子或调控元件。20.如权利要求19所述的组合物，其中所述内含子包含嵌合内含子。21.如权利要求19所述的组合物，其中所述调控元件包含TPL(来自腺病毒的三联前导序列)和eMLP(来自腺病毒主要晚期启动子的增强子元件)序列。22.如权利要求1
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21中任一项所述的组合物，其中所述第二多核苷酸包含Kozak序列。23.如权利要求1
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22中任一项所述的组合物，其中所述第二多核苷酸包含人支架附着区(SAR)序列。24.如权利要求1
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23中任一项所述的组合物，其中所述第二多核苷酸还包含增强子。25.如权利要求23所述的组合物，其中所述增强子是CMV增强子。26.如权利要求1
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25中任一项所述的组合物，其中所述第二多核苷酸还包含填充序列。27.如权利要求1
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26中任一项所述的组合物，其中所述第二多核苷酸还包含反向末端重复(ITR)序列。28.如权利要求27所述的组合物，其中所述ITR序列是AAV2ITR。29.如权利要求1
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28中任一项所述的组合物，其中所述第二多核苷酸还包含编码额外治疗性蛋白质的第四序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：施中东，赵巍，
申请(专利权)人：方拓生物科技公司，
类型：发明
国别省市：