一株类布氏乳杆菌、其微生态制剂及其制备方法技术

一株类布氏乳杆菌、其微生态制剂及其制备方法，该类布氏乳杆菌，于2022年6月23日被保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022951，分类命名为类布氏乳杆菌LPB

【技术实现步骤摘要】
一株类布氏乳杆菌、其微生态制剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一株类布氏乳杆菌，具体涉及一株类布氏乳杆菌、其微生态制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]水产养殖业作为一种向人们提供营养需求的关键产业在近年来发展迅速，已成为我国重要的支柱产业之一。然而，由于高密度、集约化的养殖模式，极易导致残饵和养殖动物排泄物堆积，从而造成水环境稳态和功能结构破坏，致使多种鱼类细菌性病害频发，严重影响水产养殖业的可持续发展。当前水产养殖病害具有种类多、防控难和致死率高等特点，常使用抗生素、疫苗、中草药作为防控的主要手段。但是过度使用抗生素会导致抗性基因水平转移，增加病原菌的耐药性，同时污染水生环境。疫苗也存在保护效率易受抗原位点干扰，研发成本较高，耗时较长等问题，很难及时应对新型病原微生物引发的流行病害。目前国内对中草药防治鱼病的药用机理研究尚不成熟，对其使用剂量的把控不精确，很容易引起毒副反应。而且中草药的特异性较差，药用效果不稳定，价格昂贵，很难进行产业化生产。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一株类布氏乳杆菌、其微生态制剂及其制备方法，所述类布氏乳杆菌对多种鱼类致病菌具有较好的拮抗作用，所述微生态制剂可用于抑制鱼类致病菌。
[0004]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下：一株类布氏乳杆菌，其分类命名为类布氏乳杆菌LPB
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4，拉丁文学名为Lactobacillus parabuchneri LPB
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4，于2022年6月23日被保藏于中国典型培养物保藏中心(简称“CCTCC”)，保藏编号为CCTCC NO：M 2022951。
[0005]本专利技术之类布氏乳杆菌LPB
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4的16S rRNA序列如序列表SEQ ID
№
1所示。经16S rRNA基因序列测定鉴定为类布氏乳杆菌。
[0006]本专利技术类布氏乳杆菌的应用，作为鱼类致病菌拮抗菌。
[0007]本专利技术类布氏乳杆菌，可制成微生态制剂使用。这样使用较为方便。
[0008]优选地，所述微生态制剂为液体制剂或固体制剂。
[0009]优选地，所述微生态制剂用于水产养殖。
[0010]优选地，所述水产养殖的动物为淡水鱼；更优选草鱼、鲤鱼或鲤鱼。
[0011]本专利技术微生态制剂的制备方法，包括下列步骤：
[0012](1)接种活化：将类布氏乳杆菌LPB
‑
4接种于斜面固体MRS培养基上，挑取单克隆菌落到MRS液体培养基中进行发酵培养，收集发酵种子液；
[0013](2)第一次扩大培养：将步骤(1)所得的发酵种子液接种到装有发酵培养基的发酵罐中进行第一次扩大培养，得扩大培养液I；
[0014](3)第二次扩大培养：将步骤(2)所得扩大培养液I接种到装有发酵培养基的发酵罐，进行第二次扩大培养，得扩大培养液II；
[0015](4)浓缩收集：收集步骤(3)所得的扩大培养液II，浓缩，得到液体制剂；
[0016]固体制剂是是通过将所述液体制剂或扩大培养液II喷雾干燥所得。
[0017]优选地，步骤(2)中，发酵种子液接种到发酵罐时，接种量为1～2％。
[0018]优选地，步骤(3)中，所述扩大培养液I的接种量是培养基体积的10～15％。
[0019]优选地，步骤(2)和步骤(3)中，所用发酵培养基的溶剂为水，配方为：蛋白胨8～12g/L，牛肉粉7～10g/L，酵母粉3～5g/L，葡萄糖18～25g/L，磷酸氢二钾1.5～3g/L，柠檬酸氢二铵1～3g/L，乙酸钠4～6g/L，硫酸镁0.1～0.3g/L，硫酸锰0.03～0.05g/L，吐温80 0.5～2g/L。
[0020]优选地，第一次扩大培养和第二次扩大培养为厌氧发酵，温度为35～37℃；培养过程中使用发酵消泡剂避免起泡。
[0021]本专利技术之类布氏乳杆菌LPB
‑
4筛选自甘肃省天水湖鱼塘底泥土壤。该菌株发酵液中抑菌活性物质具高温及蛋白酶稳定性，在实际生产应用中较为稳定；对淡水鱼类病原菌具有较好的的抗菌作用，能够改善鱼类生长，提高鱼类的抗病性能。通过微生态制剂，可简洁方便地将类布氏乳杆菌LPB
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4添加到需要使用的环境中，如将微生态制剂掺入饲料或加入水体环境中等。
[0022]本专利技术有益效果：
[0023](1)本专利技术类布氏乳杆菌LPB
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4，对嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、欧文氏菌、温和气单胞菌等多种淡水鱼类病原菌的抑菌效果显著；
[0024](2)类布氏乳杆菌LPB
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4发酵液性质稳定，腹腔注射该菌株可在鱼体内抑制维氏气单胞菌的生长；
[0025](3)将类布氏乳杆菌LPB
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4作为饲料添加剂饲喂鱼类，能够改善鱼体的生长性能，增强鱼体对病原菌的抵抗力；
[0026](4)将类布氏乳杆菌制备成微生态制剂的方法简便，生产成本较低，同时还能有效降低抗生素滥用所导致的药物残留、致病菌耐药等风险，具有良好的应用前景。
[0027]微生物保藏情况说明
[0028]本专利技术之类布氏乳杆菌，于2022年6月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉武汉大学)，菌种保藏号为CCTCC NO： M 2022951；分类命名为：类布氏乳杆菌LPB
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4；拉丁学名：Lactobacillusparabuchneri LPB
‑
4。
附图说明
[0029]图1是本专利技术类布氏乳杆菌LPB
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4对鱼类病原菌的抑菌效果图，PL为磷酸缓冲盐对照，MRS为乳酸菌培养基对照，LPB为类布氏乳杆菌LPB
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4发酵上清；
[0030]图2是本专利技术类布氏乳杆菌LPB
‑
4形态学特征观察图，a：菌株LPB
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4的平板菌落形态特征；b：菌株LPB
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4的相差显微镜观察(1000
×
)；c：菌株LPB
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4 的革兰氏染色观察(1000
×
)；d：菌株LPB
‑
4扫描电镜观察(20000
×
)；e：菌株 LPB
‑
4扫描电镜观察(10000
×
)；
[0031]图3是本专利技术类布氏乳杆菌LPB
‑
4的16S rDNA序列构建系统发育树图；
[0032]图4是本专利技术类布氏乳杆菌LPB
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4抑菌活性物质理化性质分析图，a：胰蛋白酶(trypsin)和蛋白酶K(protease K)处理的LPB
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4发酵液；b：40℃
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100℃处理的LPB
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4发酵液；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株类布氏乳杆菌，其特征在于，其分类命名为类布氏乳杆菌LPB
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4（Lactobacillus parabuchneri LPB
‑
4），于2022年6月23日被保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022951。2.如权利要求1所述的类布氏乳杆菌的应用，其特征在于，作为鱼类致病菌拮抗菌。3.如权利要求1所述的类布氏乳杆菌制成的微生态制剂。4.根据权利要求3所述的微生态制剂，其特征在于，为液体制剂或固体制剂；用于水产养殖。5.根据权利要求4所述的微生态制剂，其特征在于，所述水产养殖的动物为淡水鱼；优选草鱼、鲤鱼或鲤鱼。6.一种如权利要求3~5之一所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：（1）接种活化：将类布氏乳杆菌LPB
‑
4接种于斜面固体MRS培养基上，挑取单克隆菌落到MRS液体培养基中进行发酵培养，收集发酵种子液；（2）第一次扩大培养：将步骤（1）所得的发酵种子液接种到装有发酵培养基的发酵罐中进行第一次扩大培养，得扩大培养液I；（3）第二次扩大培养：将步骤（2）所得扩大培养液I...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏立秋，易敢峰，刘绍春，翟峰，周锡勋，丁学知，穰杰，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：