基因疗法制造技术

一种AAV载体，所述AAV载体包含编码因子I或因子H或者其片段或衍生物的核苷酸序列。该载体用于治疗或预防补体介导的眼部病症。载体用于治疗或预防补体介导的眼部病症。载体用于治疗或预防补体介导的眼部病症。

【技术实现步骤摘要】
基因疗法
[0001]本申请是基于申请日为2016年10月27日，优先权日为2015年10月28日，申请号为201680073421.4，专利技术名称为：“基因疗法”的专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及用于眼部疾病的基因疗法的化合物。更具体地，本专利技术涉及腺相关病毒(AAV)载体用于治疗或预防年龄相关的黄斑变性(AMD)的用途，其中所述载体能够向眼部递送因子I和/或因子H或者其片段或衍生物。

技术介绍

[0003]黄斑是与视神经毗邻的眼部视网膜上的一个小区域，其大小约为3至5毫米。该区域是视网膜上最敏感的区域并含有中央凹，中央凹一个具有高视敏度并含有非常密集的锥体的凹陷区域，锥体是负责色觉的光感受器。
[0004]年龄相关的黄斑变性(AMD)是导致发达国家50岁以上人群功能性失明的最常见原因(Seddon,J M.Epidemiology of age
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related macular degeneration.In:Ogden,T E,et al.,eds.Ryan S J,ed
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in
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chief.Retina Vol II.3rd ed.St.Louis,Mo.:Mosby；2001:1039
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50)。AMD与来源于脉络膜并延伸至视网膜下腔的新生血管形成有关。此外，AMD的特征是视网膜、视网膜色素上皮细胞(RPE)和脉络膜下(位于RPE下方，在视网膜和巩膜之间的具有大量血管的组织)进行性退化。
[0005]包括氧化应激、具有可能的自身免疫成分的炎症、遗传背景(例如，突变)以及环境或行为因素(如吸烟和饮食)在内的多种因素可能有助于AMD的发病机制。
[0006]根据黄斑改变所处的阶段对AMD的临床进展进行表征。早期AMD的标志是玻璃膜疣，其是视网膜下累积的细胞外碎片，在临床检查和眼底照片上显示为视网膜上的黄色斑点。按照尺寸将玻璃膜疣分为小型(<63μm)、中型(63
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124μm)和大型(>124μm)。根据眼科检查中其边缘的外观，还将其判定为硬的或软的。硬的玻璃膜疣具有清楚的边界，而软的具有不清楚且流动的边界。年龄相关的眼部疾病研究(AREDS)眼底照片严重程度分级是用于这种病况的主要分类系统之一。
[0007]将AMD分类为“干”型和“湿”(渗出或新生血管)型。干性AMD比湿性AMD更为常见，但干型能够进展为湿型，且在很多情况下这两种情况同时发生。干性AMD的典型特征是上覆感光细胞的RPE层中的细胞进行性凋亡，以及通常脉络膜毛细血管层以下的细胞也进行性凋亡。将伴有上覆光感受器萎缩的RPE细胞死亡的汇合区域称为地图状萎缩。这种形式AMD患者的中央视觉经历缓慢且进行性的恶化。
[0008]湿性AMD的特征是从RPE和黄斑下的脉络膜血管(脉络膜毛细血管)生长的异常血管出血和/或流体渗漏，其可能会导致突然的视力丧失。据估计，患者出现的大部分视力丧失是由于这种脉络膜新生血管形成(CNV)及其继发性并发症所致。将新生血管性AMD亚型称为视网膜血管瘤样增生(RAP)。在这里，血管瘤样增生从视网膜开始并向下延伸到视网膜下腔，在一些情况下最终与脉络膜心血管相连通。
[0009]根据对AMD患者眼部玻璃膜疣中CS成分的鉴定发现，补体系统(CS)参与早期AMD的发病机制。在AMD中，已经鉴定出至少129种类型的玻璃疣沉积蛋白，包括不同类型的载脂蛋白(E、B或A
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I)、若干淀粉样肽(P、Aβ或SA
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1)、TIMP
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3、血清白蛋白以及与细胞功能相关的某些蛋白(例如，ATP合酶β亚基、清道夫受体B2和视黄醇脱氢酶)。来源于AMD的玻璃膜疣还含有几乎所有的补体蛋白，包括以单独的和复合形式存在的调控蛋白(CFH、补体受体1(CR1)、玻连蛋白和凝聚素)、CS的活化和降解产物(C1q、C3、C3a、C3b和C5a)以及包含MAC成分(即，5、6、8(α、β和γ)和9)的终末CS通路成员。玻璃膜疣的累积可以激活CS，触发局部炎性介质的产生并吸引白细胞，进而增强AMD中存在的局部炎症状态。
[0010]AMD目前的治疗选择包括使用苯并卟啉进行光动力疗法(Arch Ophthalmol.1999；117:1329
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1345)以及靶向血管内皮生长因子(VEGF)通路的多种疗法。这种VEGF靶向疗法的实例包括适体培加他尼(N Engl J Med.2004；351:2805
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2816)和诸如雷珠单抗(N Engl J Med.2006Oct 5；355(14):1432
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44)和贝伐单抗(BMJ.2010Jun 9；340:c2459.)的抗体。然而，并非所有的患者均对使用抗
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VEGF抗体的治疗产生应答，其或者不能恢复视力或者发展成注册失明(registered blindness)。
[0011]已开发了一种用于治疗地图状萎缩的疗法，该疗法目前正在进行III期临床研究(Genentech/Roche的MAHALO研究)。Lampalizumab是一种针对补体因子D的人源化单克隆抑制性抗体，通过玻璃体内注射施用以阻止地图状萎缩的进展速率。如图1中所示，因子D是C3b反馈(“扩增”)循环的一部分。因子D以非常低的血清浓度存在，并且是替代通路的关键因子。尽管如此，由于其尺寸较小(27kDa)，使得因子D被肾脏迅速清除并快速重新合成。该疗法需要每月进行玻璃体内注射。
[0012]本领域中需要治疗AMD的新方法。

技术实现思路

[0013]本专利技术人现提供了一种用于调节补体系统的方法，该方法用于例如治疗AMD。本专利技术提供了通过基因疗法递送的因子I，其目的是通过靶向分解循环负向调节补体C3b反馈循环(图1)。替代通路反馈回路的所产生的重新平衡将促进C3b和iC3b分解，从而消除补体介导的病症中的主要疾病因子，特别是在替代通路调控中具有潜在缺陷的病症。或者，也可以使用因子H。
[0014]在一个方面中，本专利技术提供了一种腺相关病毒(AAV)载体，所述AAV载体包含编码因子I或者其片段或衍生物的核苷酸序列。在另一个方面中，本专利技术提供了一种腺相关病毒(AAV)载体，所述AAV载体包含编码因子H或者其片段或衍生物的核苷酸序列。在另一个方面中，本专利技术提供了一种腺相关病毒(AAV)载体，所述AAV载体包含编码抗
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因子D抗体的核苷酸序列。在另一个方面中，本专利技术提供了一种腺相关病毒(AAV)载体，所述AAV载体包含编码抗
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补体成分5(C5)抗体的核苷酸序列。
[0015]在一个实施方式中，编码因子I或者其片段或衍生物的核苷酸序列包含选自下组的序列：
[0016](a)编码与SEQ ID NO：1或9具有至少70％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列；
[0017](b)与SEQ ID NO：2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.药物组合物，其包含腺相关病毒(AAV)载体与药学上可接受的运载体、稀释剂或赋形剂的组合，所述AAV载体包含编码因子I的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述编码因子I的核苷酸序列包含编码与SEQ ID NO：1具有至少98％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述编码因子I的核苷酸序列包含编码与SEQ ID NO：1具有至少99％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述编码因子I的核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少95％同一性的核苷酸序列。5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述编码因子I的核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少98％同一性的核苷酸序列。6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述编码因子I的核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少99％同一性的核苷酸序列。7.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述编码因子I的核苷酸序列包含SEQ ID NO：2的核苷酸序列。8.根据前述权利要求中任意一项所述的药物组合物，其中所述编码因子I的核苷酸序列与CAG启动子可操作地连接。9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述编码因子I的核苷酸序列与具有SEQ ID NO：5的核苷酸序列的启动子可操作地连接。10.根据前述权利要求中任意一项所述的药物组合物，其中所述AAV载体是AAV颗粒的形式。11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述AAV颗粒是AAV2、AAV5或AAV8血清型。12.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述AAV病毒颗粒包含AAV2基因组和AAV2衣壳蛋白、AAV2基因组和AAV5衣壳蛋白、或AAV2基因组和AAV8衣壳蛋白。13.根据权利要求1
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12中任意一项所述的药物组...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：辛科纳知识产权控股有限公司，
类型：发明
国别省市：