一种骨修复材料胶原蛋白总量控制方法技术

本申请涉及骨修复材料的技术领域，具体公开了一种骨修复材料胶原蛋白总量控制方法，其控制方法包括以下步骤：S1：取低温深冻的人源骨原料,剔除软组织并刮除骨髓和骨膜，并切成大小不一的骨原料备用；S2：将上述骨原料用温水清洗，并用去离子水浸泡超声清洗，再进行消毒灭菌处理；S3：将步骤S2中的骨原料浸泡到脱脂剂的溶液中，经过搅拌进行脱脂；S4：将步骤S3中脱脂后的骨原料浸泡在脱钙剂溶液中,经过搅拌进行脱钙处理；S4：将步骤S4中的骨原料浸泡在脱杂蛋白溶液中浸泡，接着进行冻干处理，即可得到骨修复材料。本申请可调节骨修复材料中不同的胶原蛋白含量，并针对不同的治疗目的可以选择胶原蛋白含量不同的骨修复材料。以选择胶原蛋白含量不同的骨修复材料。

【技术实现步骤摘要】
一种骨修复材料胶原蛋白总量控制方法


[0001]本申请涉及骨修复材料的
，更具体地说，它涉及一种骨修复材料胶原蛋白总量控制方法。

技术介绍

[0002]迄今为止，创伤、感染和肿瘤切除造成的大块骨缺损的修复是国内外临床医学长期以来的一个难题。自体骨来源有限，且患者可能需要承受额外的痛苦。其他骨修复材料，如同种异体骨或异种骨则容易导致潜在感染及免疫排斥等问题。人工骨由于和天然骨结构差异较大，仍存在许多不足。因此，人工骨复材料从成分和结构方面仿生，能大大提高其应用价值。
[0003]目前，临床上使用的胶原基骨组织修复材料主要为羟基磷灰石、β
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磷酸三钙、生物活性玻璃与胶原蛋白等的复合物，具有良好的生物相容性及降解性，对骨缺损部位进行填充与修复，诱导自体骨再生。此外，胶原蛋白在引导骨组织再生过程中也发挥着积极作用，可在骨缺损部位形成生物屏障膜，为再生组织细胞的增殖创造良好条件。胶原基骨修复材料产品已被成功用于人体骨缺损及骨缝充填重建等，表现出了良好的临床治疗效果。但是对于同一种骨修复材料可调节其不同的胶原蛋白含量，然后针对不同的治疗目的可以选择胶原蛋白含量不同的骨修复材料。因此，如何制备不同的胶原蛋白含量的骨修复材料是目前亟需要解决的技术问题。

技术实现思路

为了制得胶原蛋白含量不同的骨修复材料，本申请提供一种骨修复材料胶原蛋白总量控制方法。
[0005]本申请提供的一种骨修复材料胶原蛋白总量控制方法，采用如下的技术方案：一种骨修复材料胶原蛋白总量控制方法，包括以下步骤：S1：取低温深冻6个月的人源骨原料,剔除软组织并刮除骨髓和骨膜，并切成大小不一的骨原料备用；S2：将上述骨原料用温水清洗，并用去离子水浸泡超声清洗，再进行消毒灭菌处理；S3：将步骤S2中的骨原料浸泡到脱脂剂的溶液中，经过搅拌进行脱脂后捞出，真空干燥脱除残留的脱脂剂；S4：将步骤S3中脱脂后的骨原料浸泡在脱钙剂溶液中,经过搅拌脱钙后捞出，再进行水洗去除残留的脱钙剂；S4：将步骤S4中脱钙后的骨原料浸泡在脱杂蛋白溶液中，在恒温箱中浸泡，再将脱除杂蛋白的骨原料进行冻干处理，即可得到骨修复材料。
[0006]通过采用上述技术方案，将人源骨原料先进行冷冻处理，然后再去除骨材料中的软组织并刮除骨髓和骨膜，以减少其对骨原料移植的影响；接着再进行消毒杀菌处理，减少
细菌病毒的引入；然后再对骨原料进行脱脂和脱钙处理，以减少骨原料中的抗原性并最大限度的保存骨原料中的胶原蛋白以及骨生长因子的生物活性，之后再对骨原料进行脱杂蛋白处理，以进一步保持骨原料中的所需的胶原蛋白的纯度；骨原料经过一系列的适当处理能保留其骨诱导作用,使其具有骨传导作用,在很大程度上减弱或消除了其免疫源性，并能够去除掉骨原料中的其他杂质，保留所需的胶原蛋白的含量及纯度；本申请制得骨修复材料中的胶原蛋白的含量在20％
‑
80％范围内，可制备其不同的胶原蛋白含量的骨修复材料，然后针对不同的治疗目的可以精确制备胶原蛋白含量不同的骨修复材料；本申请采用人源骨原料为新鲜健康成人尸体髂骨，相比于其他类型的骨代用材料，自体骨因富含多种生长因子具有优秀的骨诱导、骨传导和骨生成作用，不引起免疫炎症反应，被认为是最佳骨移植材料，而本申请能够采用这些骨原料制备不同胶原蛋白含量的骨修复材料，有效的提高了其治疗效果。
[0007]优选地，步骤S3中，所述脱脂剂为三氯甲烷和甲醇的混合溶液，且三氯甲烷和甲醇的质量分数比为1:1，其浸泡时间为2
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4h，搅拌转速为50
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100rpm/min。
[0008]通过采用上述技术方案，由于采用脱脂剂对骨原料进行脱脂，可以减少其免疫源性，本申请采用的脱脂剂为三氯甲烷和甲醇的质量分数比为1:1的混合溶液，该混合溶液具有对骨原料脱脂效果好的特点以及具有脱除部分糖类杂蛋白等特点，且需要的脱脂条件简单，以便于进行脱脂操作，并且，能够通过调节浸泡时间以及搅拌转速等参数来调节脱脂速度以及脱脂率，因此，获得脱脂效果好以及脱脂效率高并且脱脂操作简单的效果。
[0009]优选地，所述脱脂剂配置后，封口放置于恒温冰柜于2
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10℃下4
‑
5h待用。
[0010]通过采用上述技术方案，在本申请中，当将三氯甲烷和甲醇的按照质量分数比为1:1进行配置形成混合溶液后，将其放置于恒温冰柜中，保持冰柜的温度在2
‑
10℃，且保温处理4
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5h；对脱脂剂进行低温处理，可以使得整个脱脂剂溶液处于2
‑
10℃低温状态，该低温环境下可以有效的保持骨原料中的胶原蛋白的活性；若没有脱脂剂进行低温处理，骨原料在常温或者高温状态下的脱脂剂溶液中，会造成胶原蛋白变性失活。
[0011]优选地，步骤S3中，所述脱脂剂为环己酮、丙酮和乙酸乙酯中的一种或者几种组合。
[0012]通过采用上述技术方案，在本申请中，脱脂剂除了选择三氯甲烷和甲醇的按照质量分数比为1:1配置的混合溶液，还可以选择环己酮、丙酮和乙酸乙酯中的一种或者几种组合。
[0013]优选地，步骤S4中，所述脱钙剂由盐酸溶液、氯化钙溶液以及乙二胺四乙酸二钠溶液组成。
[0014]优选地，将步骤S3中脱脂后的骨原料放置于盐酸溶液中，在2
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10℃边浸泡边搅拌20
‑
24h，搅拌转速为10
‑
20rmp/min；接着再将骨原料添加于氯化钙溶液中，在恒温箱中25
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30℃中边搅拌边浸泡，浸泡20
‑
24h，搅拌转速为10
‑
20rmp/min；最后将骨原料添加到乙二胺四乙酸二钠溶液中，在恒温冰柜中2
‑
10℃下搅拌浸泡2
‑
4小时，搅拌转速为10
‑
20rmp/min。
[0015]通过采用上述技术方案，在骨原料进行脱钙操作时，可以根据需求来调节其上述参数，以用来调节骨原料中钙的含量，通过调节钙的含量，便可以有效的精准调节骨原料中的胶原蛋白的含量。
[0016]优选地，步骤S5中，所述脱杂蛋白溶液为氯化锂溶液，其在恒温箱中30
‑
35℃静止
浸泡18
‑
24小时。
[0017]通过采用上述技术方案，骨原料在氯化锂溶液中，可以脱除骨原料中的糖类以及其他杂蛋白，以用于保持骨原料中胶原蛋白的纯度以及精准的含量。
[0018]优选地，步骤S5中，所述脱杂蛋白溶液为苯基亚磷酸和2
‑
氨基苯基磷酸中的一种或者多种的组合物；优选地，所述苯基亚磷酸和2
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氨基苯基磷酸的质量之比为1：(1～2)。
[0019]通过采用上述技术方案，杂蛋白中，以糖蛋白含量较多，且难以脱除，同时糖蛋白中普遍存在有顺式二醇基团；苯基亚磷酸能够与糖蛋白中的顺式二醇基团在水溶液中可逆性地共价结合，形成五元环状酯，且糖蛋白中的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种骨修复材料胶原蛋白总量控制方法，其特征在于,包括以下步骤：S1：取低温深冻6个月的人源骨原料,剔除软组织并刮除骨髓和骨膜，并切成大小不一的骨原料备用；S2：将上述骨原料用温水清洗，并用去离子水浸泡超声清洗，再进行消毒灭菌处理；S3：将步骤S2中的骨原料浸泡到脱脂剂的溶液中，经过搅拌进行脱脂后捞出，真空干燥脱除残留的脱脂剂；S4：将步骤S3中脱脂后的骨原料浸泡在脱钙剂溶液中,经过搅拌脱钙后捞出，再进行水洗去除残留的脱钙剂;S4：将步骤S4中脱钙后的骨原料浸泡在脱杂蛋白溶液中，在恒温箱中浸泡，再将脱除杂蛋白的骨原料进行冻干处理，即可得到骨修复材料。2.根据权利要求1所述的骨修复材料胶原蛋白总量控制方法，其特征在于：步骤S3中，所述脱脂剂为三氯甲烷和甲醇的混合溶液，且三氯甲烷和甲醇的质量分数比为1:1，其浸泡时间为2
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4h，搅拌转速为50
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100rpm /min。3.根据权利要求2所述的骨修复材料胶原蛋白总量控制方法，其特征在于：所述脱脂剂配置后，封口放置于恒温冰柜于2
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10℃下4
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5h待用。4.根据权利要求1所述的骨修复材料胶原蛋白总量控制方法，其特征在于：步骤S3中，所述脱脂剂为环己酮、丙酮和乙酸乙酯中的一种或者几种组合。5.根据权利要求1所述的骨修复材料胶原蛋白总量控制方法，其特征在于：步骤S4中，所述脱钙剂由盐酸溶液、氯化钙溶液以及乙二...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕晓寰，漆传凤，卢小琴，赵金叶，陈家效，
申请(专利权)人：深圳市光明创博生物制品发展有限公司，
类型：发明
国别省市：