去甲基化酶ALKBH5在治疗肝缺血再灌注损伤中的应用制造技术

本发明专利技术提供了去甲基化酶ALKBH5在治疗肝缺血再灌注损伤中的应用。所述药物的作用具有如下中的至少一种：1)治疗肝缺血再灌注损伤；2)促进肝巨噬细胞向M2型极化；3)抑制肝巨噬细胞向M1型极化；4)促进PPAR

【技术实现步骤摘要】
去甲基化酶ALKBH5在治疗肝缺血再灌注损伤中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及去甲基化酶ALKBH5在治疗肝缺血再灌注损伤中的应用。

技术介绍

[0002]缺血再灌注损伤(Ischemia/reperfusion injury,I/RI)是导致肝移植术后肝功能不良或无功能、甚至移植失败的最重要原因之一，其本质为过度的炎症应答反应，位于肝血窦内的巨噬细胞是触发I/RI的“关键性启动胞”。肝巨噬细胞具有较强的可塑性，在不同的微环境下分化为不同的表型而执行使其专门的功能。根据活化状态和功能，肝巨噬细胞主要可分为经典活化巨噬细胞(M1)和替代活化巨噬细胞(M2)。现已明确再灌注期肝巨噬细胞向M1型转化后，会大量释放活性氧自由基(ROS)、TNF
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α等多种炎症因子，影响邻近的肝细胞、血窦内皮细胞、星状细胞及中性粒细胞等，是触发I/RI的关键原因；而M2型肝巨噬细胞则通过下调MHC
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类抗原表达、减少炎性因子产生等多种途径实现抑制炎症的作用。大量研究均证实肝巨噬细胞的表型是影响肝I/RI进程及转归的关键事件，因此调节肝巨噬细胞向M2型极化可以明显改善肝缺血再灌注损伤。
[0003]ALKBH5是一种著名的m6A去甲基化酶，对许多生物过程均有重要的影响，如增殖、侵袭、转移、骨化等。ALKBH5还参与了癌症与非癌症的发生与发展。已经有研究表明了ALKBH5缓解了心脏的缺血再灌注损伤(Yongchao Zhao etc.)。然而，ALKBH5是否参与并调节了肝脏的缺血再灌注损伤过程，目前暂未所知。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中所存在的不足，本专利技术提供了去甲基化酶ALKBH5在治疗肝缺血再灌注损伤中的应用，其提供了肝脏的缺血再灌注损伤的新治疗靶点。
[0005]本专利技术一方面，提供一种去甲基化酶ALKBH5作为靶点在制备药物中的应用，所述药物的作用具有如下中的至少一种：
[0006]1)治疗肝缺血再灌注损伤；2)促进肝巨噬细胞向M2型极化；3)抑制肝巨噬细胞向M1型极化；4)促进PPAR
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γ信号通路；5)促进Arg
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1、Ym
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1、CD163、IL
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10上调；6)抑制TNF
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α、IL
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1β上调。
[0007]本专利技术另一方面，提供一种去甲基化酶ALKBH5促进剂在在制备药物中的应用，所述药物的作用具有如下中的至少一种：
[0008]1)治疗肝缺血再灌注损伤；2)促进肝巨噬细胞向M2型极化；3)抑制肝巨噬细胞向M1型极化；4)促进PPAR
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γ信号通路；5)促进Arg
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1、Ym
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1、CD163、IL
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10上调；6)抑制TNF
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α、IL
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1β上调。
[0009]进一步地，所述去甲基化酶ALKBH5促进剂包括能够促进ALKBH5表达和/或提高ALKBH5活性的制剂。
[0010]进一步地，所述制剂包括小分子化合物、包含核酸分子的构建物中的一种。
[0011]进一步地，所述核酸分子为以ALKBH5为靶序列、通过引物扩增得到，
[0012]所述引物的上游序列：CGGGACCACCAAGCGGAAATAC；
[0013]下游引物：CCTCTTCCTCCTTCTGCAACTGATG；
[0014]所述包含核酸分子的构建物为ALKBH5的过表达质粒或过表达腺相关病毒。
[0015]本专利技术又一方面，提供一种去甲基化酶ALKBH5促进剂，所述去甲基化酶ALKBH5促进剂包括能够促进ALKBH5表达和/或提高ALKBH5活性的制剂。
[0016]进一步地，所述制剂包括小分子化合物、包含核酸分子的构建物中的一种，所述核酸分子为以ALKBH5为靶序列、通过引物扩增得到，
[0017]所述引物的上游序列：CGGGACCACCAAGCGGAAATAC；
[0018]下游引物：CCTCTTCCTCCTTCTGCAACTGATG；
[0019]所述包含核酸分子的构建物为ALKBH5的过表达质粒或过表达腺相关病毒。
[0020]本专利技术又一方面，提供一种药物组合物，其特征在于：包括权利要求6或7所述的一种去甲基化酶ALKBH5促进剂，以及药学上可接受的载体。
[0021]本专利技术再一方面，提供一种去甲基化酶ALKBH5作为靶点在制备探针中的应用，所述探针用于诊断肝缺血再灌注损伤。
[0022]进一步地，所述探针为小干扰RNA，所述小干扰RNA的正义链如SEQ ID NO.1所示，反义链如SEQ ID NO.2所示；
[0023]和/或所述小干扰RNA的正义链如SEQ ID NO.3所示，反义链如SEQ ID NO.4所示；
[0024]和/或所述小干扰RNA的正义链如SEQ ID NO.5所示，反义链如SEQ ID NO.6所示。
[0025]本专利技术的技术原理为：专利技术人在试验过程中，小鼠肝脏缺血期的微环境诱导了肝巨噬细胞向M2型极化。因为缺氧是缺血微环境的最核心事件，其与巨噬细胞极化及I/RI调控的紧密关系已获共识，因此在体外实验中专利技术人将巨噬细胞进行缺氧培养，发现了随着缺氧时间的延长，巨噬细胞M1型标记物逐渐降低，而M2型标记物逐渐上升。此外，巨噬细胞中的三类m6A甲基化修饰酶(甲基化修饰酶Mettl3、Mettl14，去甲基化酶FTO、ALKBH5，甲基化阅读蛋白酶YTHDF1、YTHDF2和YTHDF3)中只有ALKBH5表达量随着缺氧时间的延长逐渐增加，与巨噬细胞M2型极化关系存在着正相关的关系，表明ALKBH5有可能是调节巨噬细胞极化的关键因子。在敲低ALKBH5的表达后进行缺氧培养，巨噬细胞M2型标记物的表达降低，而M1标记物的表达有所回升，表明了ALKBH5可以调控巨噬细胞向M2型极化。在巨噬细胞低表达和正常表达ALKBH5进行缺氧后进行mRNA测序得到差异表达基因，生信分析发现这些差异基因富集在PPAR
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γ信号通路，后经实验进行了验证，表明巨噬细胞在缺氧条件下，由ALKBH5介导影响PPAR
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γ信号通路从而促进巨噬细胞向M2极化。
[0026]相比于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：ALKBH5具有抑制肝缺血再灌注损伤的作用，丰富了对肝缺血再灌注损伤的认知，并为肝缺血再灌注损伤的潜在生物标志物和治疗靶标提供了新的见解，为开发新的预防、缓解和/或治疗缺血再灌注损伤的药物提供新的思路，为肝I/R损伤提供新的药物靶点。
附图说明
[0027]图1为本专利技术实施例2
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4中巨噬细胞M1型和M2型表达标记物的western
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blot和PCR检测图，炎症因子分泌的Elisa检测图。
[0028]图2为本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种去甲基化酶ALKBH5作为靶点在制备药物中的应用，所述药物的作用具有如下中的至少一种：1)治疗肝缺血再灌注损伤；2)促进肝巨噬细胞向M2型极化；3)抑制肝巨噬细胞向M1型极化；4)促进PPAR
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γ信号通路；5)促进Arg
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1、Ym
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1、CD163、IL
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10上调；6)抑制TNF
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α、IL
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1β上调。2.一种去甲基化酶ALKBH5促进剂在在制备药物中的应用，所述药物的作用具有如下中的至少一种：1)治疗肝缺血再灌注损伤；2)促进肝巨噬细胞向M2型极化；3)抑制肝巨噬细胞向M1型极化；4)促进PPAR
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γ信号通路；5)促进Arg
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1、Ym
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1、CD163、IL
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10上调；6)抑制TNF
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α、IL
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1β上调。3.如权利要求2所述的一种去甲基化酶ALKBH5促进剂在制备治疗药物中的应用，其特征在于：所述去甲基化酶ALKBH5促进剂包括能够促进ALKBH5表达和/或提高ALKBH5活性的制剂。4.如权利要求3所述的一种去甲基化酶ALKBH5在制备治疗肝缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于：所述制剂包括小分子化合物、包含核酸分子的构建物中的一种。5.如权利要求4所述的一种去甲基化酶ALKBH5在制备治疗肝缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋华，刘作金，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：