表达人CR1的啮齿动物制造技术

本文公开了一种经遗传修饰的啮齿动物，所述啮齿动物在其基因组中包含含有编码人CR1多肽的核苷酸序列的核酸，其中所述啮齿动物显示出人CR1多肽的类人表达。本文还公开了包括啮齿动物胚胎干细胞的分离的啮齿动物细胞和啮齿动物组织。还公开了核酸载体和制备所述经遗传修饰的啮齿动物的方法，以及使用此类经遗传修饰的啮齿动物筛选和测试候选化合物的方法。修饰的啮齿动物筛选和测试候选化合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达人CR1的啮齿动物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年10月1日提交的美国临时申请第63/086,167号的优先权权益，其全部内容通过引用并入本文。
[0003]序列表以引用的方式并入
[0004]序列表为2021年9月29日创建的名称为38224_10747WO01_Sequence Listing、大小为42KB的ASCII文本文件，其经由EFS
‑
Web提交给美国专利及商标局，并且以引用的方式并入本文。

技术介绍

[0005]在临床前药物开发阶段，通常基于候选药剂的功效、毒性和其他药代动力学和药效学性质来研究候选药剂。候选药剂诸如抗体通常靶向人抗原，因为研究的最终目标是开发人类疗法。隔离补体途径的能力为候选治疗剂提供了显著的优势。补体途径是先天免疫反应的一部分，并协助体液免疫反应将巨噬细胞和吞噬细胞募集到抗原位点。补体途径的激活导致细胞因子释放和吞噬细胞对抗体结合抗原的调理作用。在开发旨在激活补体途径和先天免疫反应以对抗人疾病的治疗剂的过程中，允许研究该药剂的作用机制和/或治疗潜力的非人动物模型系统将是非常有价值的。

技术实现思路

[0006]在一个方面，本文公开了一种经遗传修饰的啮齿动物，在其基因组中包含含有编码人CR1多肽的核苷酸序列的核酸，其中啮齿动物显示出人CR1多肽的类人表达。
[0007]在一些实施方案中，编码人CR1多肽的核苷酸序列是基因组DNA序列。在一些实施方案中，编码人CR1多肽的核苷酸序列是cDNA序列。r/>[0008]在一些实施方案中，核酸插入到啮齿动物基因组中的啮齿动物Cr2基因座和啮齿动物Cr1样(Cr1l)基因座之间。在一些实施方案中，通过随机整合将核酸插入到啮齿动物基因组中，例如，插入到啮齿动物的X染色体中(诸如除啮齿动物Gata
‑
1基因座以外的基因座)。
[0009]在一些实施方案中，核酸包含人CR1基因的5'调控区，其与编码人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。在一些实施方案中，5'调控区包含人CR1基因的启动子区。在一些实施方案中，5'调控区包含人CR1基因的5'非翻译区(5'UTR)，其与编码人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。在一些实施方案中，5'调控区包含人CR1基因的启动子和5'非翻译区(5'UTR)。
[0010]在一些实施方案中，核酸包含人CR1基因的3'调控区，其与编码人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。在一些实施方案中，3'调控区包含人CR1基因的3'UTR，其与编码人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。在一些实施方案中，3'调控区包含人CR1基因的3'UTR和3'UTR下游的额外序列。
[0011]在一些实施方案中，核酸包含人基因组DNA序列，其包含从ATG到终止密码子的人
CR1编码序列，该编码序列具有5'和3'非翻译区(UTR)和插入内含子，以及直接位于5'UTR上游的至少4000bp的5'上游序列和直接位于3'UTR下游的至少150bp的序列；并且在一些这样的实施方案中，核酸插入到啮齿动物Cr2基因座和啮齿动物Cr1l基因座之间。
[0012]在一些实施方案中，核酸包含异源基因(即，不是人CR1的基因)的5'调控区，其与编码人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。在一些实施方案中，5'调控区是啮齿动物Gata
‑
1基因的5'调控区。在一些实施方案中，5'调控区包含啮齿动物Gata
‑
1基因的启动子区。在一些实施方案中，5'调控区包含紧邻啮齿动物Gata
‑
1基因的ATG密码子上游的至少14Kb的基因组序列。
[0013]在一些实施方案中，核酸包含异源基因(即，不是人CR1的基因)的3'调控区，其与编码人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。在一些实施方案中，3'调控区包含异源基因的3'UTR，例如，人β
‑
1球蛋白基因的3'UTR(包括多腺苷酸化序列)。
[0014]在一些实施方案中，核酸包含人CR1编码序列(ATG到终止密码子)(例如，以cDNA的形式)，其在5'端与直接位于啮齿动物Gata
‑
1基因(包括啮齿动物Gata1基因的启动子)的ATG上游的至少14Kb的核苷酸序列可操作地连接，并且在3'端与含有来自人β球蛋白基因的poly(A)信号的3'UTR序列可操作地连接，随后与直接位于啮齿动物Gata
‑
1基因的终止密码子下游的至少1.5Kb的核苷酸序列可操作地连接；并且在一些这样的实施方案中，核酸整合到啮齿动物的X染色体中(例如，除啮齿动物Gata
‑
1基因座以外的基因座)。
[0015]在一些实施方案中，经遗传修饰的啮齿动物在其基因组中可包含多个核酸，每个核酸包含编码人CR1多肽的核苷酸序列。在一些实施方案中，经遗传修饰的啮齿动物在其基因组中包含第一核酸，该第一核酸包含编码人CR1多肽的第一核苷酸序列，其中第一核酸插入到啮齿动物基因组中的啮齿动物Cr2基因座和Cr1l基因座之间；和第二核酸，该第二核酸包含编码人CR1多肽的第二核苷酸序列，其与啮齿动物Gata
‑
1基因的5'调控区可操作地连接，并且与包含人β
‑
1球蛋白基因的polyA信号的3'调控区可操作地连接，其中第二核酸整合到啮齿动物基因组的X染色体中。
[0016]在一些实施方案中，经遗传修饰的啮齿动物在其基因组中还包含用人C3基因序列替换内源啮齿动物C3基因座处的啮齿动物C3基因序列以形成经修饰的C3基因，其中啮齿动物C3基因序列包含内源啮齿动物C3基因的外显子，并且人C3基因序列包含人C3基因的外显子2至外显子41、或外显子1至外显子41。在一些实施方案中，经修饰的C3基因的表达处于人C3启动子的控制之下，或处于内源啮齿动物C3基因座的啮齿动物调节元件的控制之下。
[0017]在一些实施方案中，啮齿动物为雄性。在一些实施方案中，啮齿动物为雌性。
[0018]在一些实施方案中，啮齿动物对于外源引入并整合到基因组中的核酸是杂合的。在一些实施方案中，啮齿动物对于外源引入并整合到基因组中的核酸是纯合的。
[0019]在一些实施方案中，啮齿动物为小鼠。在一些实施方案中，啮齿动物为大鼠。
[0020]在一些实施方案中，啮齿动物在红细胞上表达人CR1多肽。在一些实施方案中，啮齿动物在嗜中性粒细胞(例如，来自血液、脾脏或肝脏的嗜中性粒细胞)上表达人CR1多肽。在一些实施方案中，啮齿动物在红细胞和嗜中性粒细胞上表达人CR1多肽。在一些实施方案中，啮齿动物在红细胞和/或嗜中性粒细胞、以及另外在巨噬细胞、单核细胞或循环树突细胞(cDC)中的一种或多种循环树突细胞上表达人CR1多肽。
[0021]在另一个方面，本文提供了从本文所述啮齿动物分离的细胞或组织，其中细胞或
组织的基因组包含含有编码人CR1多肽的核苷酸序列的核酸。在一些实施方案中，啮齿动物细胞为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经遗传修饰的啮齿动物，所述啮齿动物在其基因组中包含含有编码人CR1多肽的核苷酸序列的核酸，其中所述啮齿动物显示出人CR1多肽的类人表达。2.根据权利要求1所述的啮齿动物，其中所述编码人CR1多肽的核苷酸序列是人基因组DNA序列。3.根据权利要求1所述的啮齿动物，其中所述编码人CR1多肽的核苷酸序列是cDNA序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的啮齿动物，其中所述核酸插入到所述啮齿动物基因组中的啮齿动物Cr2基因座和啮齿动物Cr1样(Cr1l)基因座之间。5.根据权利要求1至3中任一项所述的啮齿动物，其中所述核酸插入到所述啮齿动物基因组的X染色体中。6.根据权利要求1至5中任一项所述的啮齿动物，其中所述核酸包含人CR1基因的启动子，所述启动子与所述编码所述人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。7.根据权利要求1至6中任一项所述的啮齿动物，其中所述核酸包含人CR1基因的5'非翻译区(5'UTR)，所述5'非翻译区与所述编码所述人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。8.根据权利要求1至7中任一项所述的啮齿动物，其中所述核酸包含人CR1基因的3'UTR。9.根据权利要求1至5中任一项所述的啮齿动物，其中所述核酸包含啮齿动物Gata
‑
1基因的5'调控区，所述5'调控区与所述编码所述人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。10.根据权利要求9所述的啮齿动物，其中所述5'调控区包含所述啮齿动物Gata
‑
1基因的启动子区。11.根据权利要求10所述的啮齿动物，其中所述5'调控区包含紧邻所述啮齿动物Gata
‑
1基因的ATG密码子上游的至少14Kb的基因组序列。12.根据权利要求1至5或9至11中任一项所述的啮齿动物，其中所述核酸包含含有来自人β
‑
1球蛋白基因的多腺苷酸化序列的3'UTR，所述3'UTR与所述编码所述人CR1多肽的核苷酸序列可操作地连接。13.根据权利要求1所述的啮齿动物，其中所述核酸包含人基因组DNA序列，所述人基因组DNA序列包含从ATG到终止密码子的人CR1编码序列，所述编码序列具有5'和3'非翻译区(UTR)和插入内含子，以及直接位于5'UTR上游的至少4000bp的5'上游序列和直接位于3'UTR下游的至少150bp的序列；并且其中所述核酸插入到所述啮齿动物Cr2基因座和所述啮齿动物Cr1l基因座之间。14.根据权利要求1所述的啮齿动物，其中所述核酸包含从ATG到终止密码子的人CR1编码cDNA序列，所述编码cDNA序列在5'端与啮齿动物Gata
‑
1基因的直接位于ATG上游的至少14Kb的核苷酸序列可操作地连接，并且在3'端与人β球蛋白基因的3'UTR序列可操作地连接，并且其中所述核酸整合到所述啮齿动物的X染色体中。15.根据权利要求1至14中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物为雄性。16.根据权利要求1至14中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物为雌性。17.根据权利要求1至14中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物对于所述核酸是杂合的。18.根据权利要求1至14中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物对于所述核酸是
纯合的。19.根据权利要求1至18中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CR1多肽在所述啮齿动物中的红细胞和/或嗜中性粒细胞上表达。20.根据权利要求1至19中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物为小鼠或大鼠。21.一种经遗传修饰的啮齿动物，所述啮齿动物在其基因组中包含第一核酸，所述第一核酸包含编码人CR1多肽的第一核苷酸序列，其中所述第一核酸插入到所述啮齿动物基因组中的所述啮齿动物Cr2基因座和所述Cr1l基因座之间，和第二核酸，所述第二核酸包含与啮齿动物Gata
‑
1基因的5'调控区可操作地连接的编码人CR1多肽的第二核苷酸序列，其中所述第二核酸整合到啮齿动物基因组的X染色体中。22.根据权利要求21所述的啮齿动物，其中所述第一核酸包含人CR1基因的启动子，所述启动子与所述第一核苷酸序列可操作地连接。23.根据权利要求21或22所述的啮齿动物，其中所述第一核酸包含人CR1基因的5'UTR和/或3'UTR，所述5'UTR和/或3'UTR与所述第一核苷酸序列可操作地连接。24.根据权利要求21至23中任一项所述的啮齿动物，其中所述第一核苷酸序列是人基因组DNA序列。25.根据权利要求21至24中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物对于所述第一核酸是杂合的。26.根据权利要求21至24中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物对于所述第一核酸是纯合的。27.根据权利要求21至26中任一项所述的啮齿动物，其中所述第二核酸包含含有来自人β
‑
1球蛋白基因的多腺苷酸化序列的3'UTR，所述3'UTR与所述第二核苷酸序列可操作地连接。28.根据权利要求21至27中任一项所述的啮齿动物，其中所述第二核苷酸序列是cDNA序列。29.根据权利要求21至28中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物为雄性。30.根据权利要求21至28中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物为雌性。31.根据权利要求30所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物对于所述第二核酸是杂合的。32.根据权利要求30所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物对于所述第二核酸是纯合的。33.根据权利要求21至32中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CR1多肽在所述啮齿动物中的红细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞或cDC上表达。34.根据权利要求21至33中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物为小鼠或大鼠。35.根据权利要求1至34中任一项所述的啮齿动物，在所述啮齿动物的基因组中还包含用人C3基因序列替换内源啮齿动物C3基因座处的啮齿动物C3基因序列以形成经修饰的C3基因，其中所述啮齿动物C3基因序列包含所述内源啮齿动物C3基因的外显子，并且所述人C3基因序列包含所述人C3基因的外显子2至外显子41、或外显子1至外显子41。36.根据权利要求35所述的啮齿动物，其中所述经修饰的C3基因的表达处于人C3启动子的控制之下，或处于所述内源啮齿动物C3基因座处的啮齿动物调节元件的控制之下。37.根据权利要求35至36所述的啮齿动物，其中与表达人C3但不表达人CR1的啮齿动物相比，所述啮齿动物表现出改善的存活率和/或减轻的肾损伤。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的从啮齿动物分离的细胞或组织，所述细胞或组织的基因组包含所述含有编码人CR1多肽的核苷酸序列的核酸，其中任选地，所述细胞为卵。39.一种啮齿动物胚胎干(ES)细胞，在所述啮齿动物胚胎干细胞的基因组中包含含有编码人CR1多肽的核苷酸序列的核酸。40.根据权利要求39所述的啮齿动物ES细胞，其中所述核酸包含编码人CR1多肽的核苷酸序列，并且其中所述核酸插入到所述啮齿动物基因组中的所述啮齿动物Cr2基因座和所述啮齿动物Cr1l基因座之间。41.根据权利要求39所述的啮齿动物ES细胞，其中所述核酸包含包含编码人CR1多肽的核苷酸序列的核酸，所述核苷酸序列与啮齿动物Gata
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：