本发明专利技术提供了一种新的化合物，该化合物是１″，２″，３″，７″－四氢茶黄素－３，３＇－双没食子酸酯，其化学结构式如（２）所示。本发明专利技术所述化合物可通过茶黄素衍生物ＴＦ３经氢化还原得到，具有抑制逆转录酶和ＨＩＶ ｇｐ４１形成六股螺旋核心结构的活性，可阻止ＨＩＶ病毒进入宿主细胞，其对逆转录酶的活性和ＨＩＶ ｇｐ４１形成六股螺旋核心结构的抑制作用比ＴＦ３强。
【技术实现步骤摘要】
,2″,3″,7″-四氢茶黄素-3,3＇-双没食子酸酯及其制备方法和应用的制作方法
本专利技术涉及有机化学领域，具体涉及一种新的茶黄素类衍生物。
技术介绍
茶黄素是红茶中的主要成分，是一类具有苯并酚酮结构的物质，通过儿茶素苯并环化作用而形成。目前国内外大量研究证实茶黄素具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗菌及抗心血管疾病等作用，是一类极具开发潜力的天然产物。目前已发现并鉴定的茶黄素种类共有28种，其中其中茶黄素-3,3'-双没食子酸酯(Theaflavin-3,3'-digallate， TF3)是最主要的茶黄素之一 (Sa"g SM工am6eW■/ATz'a" S K" a/.,"c"v加'"所owg MW C/zemJ00《/2.'"9-必7)，其化学结构如式(1)所示。本专利技术人曾发现TF3具有抑制HIV-1入侵耙细胞的作用，其对HIV包膜介导的细胞-细胞融合的活性的IC50为7.13土1.56nM，对HIV包膜介导的病毒-细胞融合的IC5o为1.96士0.08nM;本专利技术人进一步通过对HIV进入阶段各药物靶点(包括gpl20与CD4结合，gpl20与辅助受体结合，gpl20构象改变等)的检测，发现TF3能特异性地作用于gp41，抑制gp41六股螺旋核心结构的形成，其IC50为4.30±0.33(iM Ct/w, 51., Z/wo, W a/. 77^o_/7av/" cfe〃V加fves WacA /ea ""c/oh (1)
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种茶黄素衍生物。本专利技术解决上述问题的技术方案是1"， 2", 3"， 7'-四氢茶黄素-3，3'-双没食子酸酯，其化学结构式如(2)所示。3OH (2)本专利技术所述化合物可通过茶黄素-3, 3'-双没食子酸酯经氢化还原得到，反应过程如式(3)所示，具体方法由以下步骤组成将茶黄素-3,3'-双没食子酸酯溶于四氢呋喃中，加入茶黄素-3， 3'-双没食子酸酯质量50%的钯碳催化剂，在室温和剧烈搅拌的条件下通入氢气反应7 10天，过滤除去催化剂，减压蒸去四氢呋喃后溶于95%乙醇，经反相柱层析，除去乙醇即可。(3)本专利技术化合物为淡黄色固体，是在保留茶黄素-3，3'-双没食子酸酯原有结构中的苯环及酚羟基基团的基础上，对其苯并酚酮结构中的七元酚酮环进行碳环氢化还原而来。由于茶黄素-3, 3'-双没食子酸酯的苯环结构可与HIV gp41靶穴中保守的疏水残基结合，其酚羟基呈弱碱性，可与靶穴中保守的正电荷残基K574结合，因此本专利技术化合物具有抑制HIV gp41形成六股螺旋核心结构的活性，可阻止HIV病毒进入宿主细胞；同时，本专利技术化合物还可抑制逆转录酶的活性。对茶黄素-3, 3'-双没食子酸酯苯并酚酮结构中的七元酚酮环进行碳环氢化还原后，其对HIVgp41形成六股螺旋核心结构的抑制作用得到增强，这是因为一方面将烯键还原后的稳定性比原有结构有所增强，而苯环和酚羟基仍然保持与HIV gp41的六股螺旋核心结构靶位相结合的活性，另一方面通过分子对接发现氢化还原后七元环的空间构型发生改变，使该化合物更能与HlVgp41靶穴相结合，因此本专利技术化合物稳定性更好，抗HIV活性更强。本专利技术化合物可用于制备抗艾滋病的药物。所述的药物可以是片剂，也可以是水凝胶剂，其中本专利技术化合物在所述药物中的质量百分比含量为1 20%。为了更好地理解本专利技术，下面将通过实验证明本专利技术化合物具有的技术效果。 一、本专利技术化合物的抑制逆转录酶的活性检测。1 、试齐ll: Enzchek Reverse Transcriptase Assay Kit。2、实验方法1)将polyA和oigod(T)16混匀，室温放置60分钟。2 )用polymerization buffer 200倍稀释polyA和oligod(T) 16的反应物，即得reaction mixture， 将其转入96孔板，每孔加20W。3) 用1XHIVRT缓冲液将10单位的HIVRT稀释到0.8单位，将各浓度本专利技术化合物 lOpl和2.5^1 0.8单位的HIV RT混合。4) 毎孔中加入5m1本专利技术化合物化合物和hivrt的混合物，43°C反应一小时。5) 每孔加2 (xLof 200mMEDTA中止反应，4°C放置15分钟。6) 每孔加173pLPicoGreen Working Solution,闭光孵育3分钟。7) 用酶标仪测OD值，激发光485mn,发射光535nm。 抑制率按以下公式计算抑制率=(对照孔0D值-实验孔0D值)/对照孔0D值)X 100%，化合物的半效抑制浓度(IC;。)采用CalcuSyn软件计算。同时设TF3对照组。 2、实验结果结果如表l所示，本专利技术化合物能有效抑制HIV逆转录酶的活性，半数有效浓度(IC50) 为0.4469士0.066^g/ml，其抑制率随着剂量的加大而递增，可见本专利技术化合物具有较好的抗HIV 活性。表 1<table>table see original document page 5</column></row><table>二、本专利技术化合物抑制HIVgp41六股螺旋束结构形成活性的检测。(一)采用夹心ELISA法进行本专利技术化合物抑制HlVgp41六股螺旋束结构形成活性的检 1、实验方法(1 )用pH8.8的0.1M Tris-HCl缓冲液将单克隆抗体2pg/ml NC-1包被在96孔酶标板上， 每孔100W， 4"C过夜。每孔加入1%的脱脂牛奶(用pH7.2的PBS溶解)200nl进行封闭，37 。C孵育60分钟，洗板三次。(2) 将2pM N36 30nl与化合物各30^1混合，37。C孵育30分钟，再加入的l^M C34， 37'C孵育30分钟。(3) 将它们加入到已封闭好的酶标板中，37t:孵育60分钟，洗板三次。(4) 每孔加入100nll吗/ml的单克隆抗体NC-l， 37'C孵育60分钟，洗板三次。(5) 每孔加入100nll:5000的兔抗N36/C34复合物的多克隆抗体IgG， 37。C孵育60分 钟，洗板三次。(6) 每孔加入100nl 1:5000的辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG (SA-HRP)， 37'C孵育 60分钟，洗板三次。(7) 每孔加入100nl的显色底物3，3'，5,5'-四甲基联苯胺(TMB)终止，用酶标仪测定 在波长为450nm处的吸光度值(OD值)，570nm作为参考波长。抑制率按公式抑制率=(对照孔OD值-实验孔OD值)/对照孔OD值)xiooy。计算，化合物的半效抑制浓度(ICM)采用CalcuSyn软件计算。2、 实验分组本专利技术实验组所加化合物为本专利技术化合物，并使其在反应体系的终浓度分别为 1. 5625吗/ml、 3.125pg/ml、 6.25吗/ml、 12.5吗/ml和25昭/ml。TF3对照组所加化合物为TF3，并使其在反应体系的终浓度分别为1.5625fig/ml、 3.125吗/ml、 6.25ng/ml、 12.5吗/ml和25吗/ml。3、 实验结果结果表2所示，本专利技术化合物能有效抑制HIVgp41六股螺旋结构束的形成，具有较好的 抗HIV活本文档来自技高网...
【技术保护点】
１″，２″，３″，７″－－四氢茶黄素－３，３’－双没食子酸酯，其化学结构式如（２）所示。 ＊＊＊ （２）。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘叔文，杨洁，姜志宏，刘艳，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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