用于快速诊断川崎病的分子生物标志物和分析方法技术

本发明专利技术涉及用于在临床环境中诊断川崎病（KD）的生物标志物组合和表征方法。特别地，本发明专利技术要求使用RNA/DNA分子生物标志物及其拷贝数（浓度）的组合来导出用于辅助诊断、预后、风险评估和治疗/监测的KD得分。更具体地，这些生物标志物表征试剂（如引物和聚合酶）将与测试系统（如Applied Biosystems QuantStudio 6）一起包装在试剂盒中，该测试系统测量生物标志物浓度以生成KD得分，该得分可用于将KD与其他发热儿科指征区分开来。发热儿科指征区分开来。发热儿科指征区分开来。

【技术实现步骤摘要】
用于快速诊断川崎病的分子生物标志物和分析方法


[0001]本专利技术涉及生物标志物组合和表征方法，用于在临床环境中诊断川崎病（KD）。具体而言，本专利技术声称使用RNA/DNA分子生物标志物及其拷贝数（浓度）的组合来得出KD得分，以辅助诊断、预后、风险评估和KD的治疗/监测。更具体地说，这些生物标志物表征试剂，如引物和聚合酶，将与测试系统，例如Applied Biosystems QuantStudio 6一起打包在套件中，该测试系统可以测量生物标志物的浓度，生成KD得分，以区分KD与其他发热性儿科症状。

技术介绍

[0002]川崎病（KD）是一种罕见的儿童急性炎症性疾病，与血管炎和持续发热有关。 KD是美国儿童获得性心脏病的主要原因，KD在发展中国家有明显增加的趋势。 如果不及时治疗，会发生严重的并发症，大约25%的儿童会患冠状动脉损伤。KD死亡率很低，然而，由于受损动脉的血管重构，狭窄性病变可能会晚期发展。长期结果研究表明，初期因KD患冠状动脉瘤的50%的儿童需要再血管化手术或有心肌梗死的高风险。
[0003]KD的病因目前尚不清楚。然而，广泛认为它是特定遗传易感个体对感染因子异常和持续的免疫反应。不幸的是，到目前为止还没有确定一致的感染因子，进一步增加了诊断困难。此外，还观察到不同的KD族群分布。 KD在东亚地区发病率最高，日本每150个儿童中就有1个受影响，它约占韩国儿童住院的1
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2%。在白种人人口中，KD显著较低，患病率为9
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17/10万人，而在5岁以下儿童中，日本的患病率为265/10万人。其他亚洲国家的平均患病率为51
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194/10万人。
[0004]目前，KD 的诊断主要依靠临床症状，目前没有可用的客观分子检测辅助诊断。由于 KD 具有许多儿童常见的自限性发热疾病的症状和特征，例如发热、皮疹、粘膜表现、淋巴结肿大和炎症等，因此临床诊断很困难。约 15% 至 36.2% 的 KD 病例被认为是不完全 KD，不显示完整的临床特征，根据美国心脏协会的标准，缺少四个以上的 KD 临床表现，这会严重影响诊断的准确性。对于表现为“不完全
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KD 且未达到全部临床标准的患者，及时诊断至关重要。在发热发作后十天内进行早期诊断和治疗，使用静脉免疫球蛋白 (IVIG) 可显著降低冠状动脉疾病的发生率，从而减少永久性心脏损伤和冠状动脉瘤的风险。
[0005]对于许多临床医生来说，及时识别、诊断和治疗通常是具有挑战性的。对于那些不熟悉或对复杂临床算法感到困惑的医生，根据持续发热和临床标准进行 KD 诊断的指南常常会延误诊断。此外，目前没有临床有用且易于获取的客观分子生物标志物测试，以帮助医生诊断 KD。因此，迫切需要一种基于血液生物标志物的客观检测方法，以帮助医生识别不符合全部临床标准但需要治疗以预防心血管损伤的 KD 患者。
[0006]我们通过GEO、文献和多重蛋白质平台等研究了与川崎病相关的潜在分子生物标志物（图1）。我们筛选出了61个候选基因，包括ABCC1、ADM、C10ORF59、C1S、CAMK4、CD274、CD55、CD59、CLEC4D、CR1、CRTAM、CTGF、FCGR1B、FKBP1A、FKBP5、FKBP6、FUT7、IFI30、LCN2、LGALS2、LILRA5、MAPK14、MMP8、MPO、MYD88、NKTR、NOTCH4、OLFM4、PCOLCE2、PPARG、PVRL2、
S100A12、S100A8、S100A9、SLC11A1、SLC11A2、TLR7、TREML4、VEGFA、HGF、ZBTB20、CASP5、CACNA1E、CLIC3、IFI27、KLHL2、PYROXD2、RTN1、S100P、SMOX、ZNF185、C11ORF82、PlGF、CXCL16、OSM、NPPB、TNFSF14、CXCL6、CKM、CKB、IL1R1。我们使用定量聚合酶链式反应（qPCR）平台和测定系统，例如Applied Biosystem QuantStudio、7500 实时PCR 系统或Bio
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Rad CFX系统，来测定这些生物标志物在样品中的RNA拷贝数。然后，基于这些关键生物标志物的RNA拷贝，我们开发了KD诊断模型和KD得分，能够将KD与其他发热患者区分开来。

技术实现思路

[0007]本专利技术披露了使用血液/血浆/血清蛋白生物标志物进行KD的诊断、风险评估和治疗/监测的方法。特别是，专利技术人发现并使用了一组基因生物标志物（RNA、DNA或蛋白质）来计算KD风险得分，可用于诊断、确定风险、监测KD治疗以及将KD与其他发热性疾病区分开来。生物标志物可以使用适当的检测系统（例如应用生物系统QuantStudio、7500实时PCR系统或Bio
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Rad CFX系统）的套件来确定，以确定RNA拷贝数以推导出可单独使用或与其他KD临床标准结合使用的KD得分以确定和确认KD诊断。
[0008]RNA/DNA生物标志物的浓度，例如但不限于ABCC1、ADM、C10ORF59、C1S、CAMK4、CD274、CD55、CD59、CLEC4D、CR1、CRTAM、CTGF、FCGR1B、FKBP1A、FKBP5、FKBP6、FUT7、IFI30、LCN2、LGALS2、LILRA5、MAPK14、MMP8、MPO、MYD88、NKTR、NOTCH4、OLFM4、PCOLCE2、PPARG、PVRL2、S100A12、S100A8、S100A9、SLC11A1、SLC11A2、TLR7、TREML4、VEGFA、HGF、ZBTB20、CASP5、CACNA1E、CLIC3、IFI27、KLHL2、PYROXD2、RTN1、S100P、SMOX、ZNF185、C11ORF82、PlGF、CXCL16、OSM、NPPB、TNFSF14、CXCL6、CKM、CKB、IL1R1，这些生物标志物在血液/血浆/血清中组合出现与KD的发展和诊断有关，利用定量PCR系统（例如应用生物系统QuantStudio、7500实时PCR系统或Bio
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Rad CFX系统）测量血液生物标志物拷贝数精确分离KD患者与其他发热患者（图1）。
[0009]本专利技术揭示了一种使用生物标志物的方法，可在本专利技术实践中使用，包括来自生物标志物的蛋白质生物标志物或RNA / DNA序列，包括但不限于IFI27，C19ORF59，CACNA1E，CASP5，CR1，CLIC3，CRTAM，FKBP5，HGF，IL1RL1，KLHL2，MAPK14，NKTR，SLC11A1，S100A12，S100A9，TLR7和ZHF185等。
[0010]在某些实施例中，使用这些生物标志物的组合组用于诊断KD。 KD诊断的生物标志物组可以包括至少2个生物标志物（一对）和最多18个生物标志物（9对基因）的完整组，如上所述。这将包括上述第1段描述的任何生物标志物的任何组合，其中至少包括2个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于测量选自以下生物标志物组的一种或多种川崎病生物标志物的量的检测试剂在制备用于确定受试者川崎病生物标志物水平呈现的试剂盒中的用途，其特征在于，所述川崎病生物标志物组包括IFI27、C19ORF59、CACNA1E、CASP5、CR1、CLIC3、CRTAM、FKBP5、HGF、IL1RL1、KLHL2、MAPK14、NKTR、SLC11A1、S100A12、S100A9、TLR7和ZHF185中的一种或多种，所述确定受试者川崎病生物标志物水平呈现的方法包括：a.评估来自受试者的样品中的一组川崎病生物标志物，所述样品为血液、血清或血浆，以确定样品中每个川崎病生物标志物的表达水平；b.基于组中每个川崎病生物标志物的水平来获得川崎病生物标志物的水平表示。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，测量每个川崎病生物标志物的寡核苷酸的全长或其核苷酸序列、RNA或DNA水平。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述生物标志物表达水平以循环阈值C(t)表示。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括C19ORF59和IFI27。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括C19ORF59、IFI27、S100A12和S100A9。6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括C19ORF59、IFI27、S100A12、S100A9、CLIC3和SLC11A1。7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括C19ORF59、IFI27、S100A12、S100A9、CLIC3、SLC11A1、CACNA1E和LGALS2。8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括C19ORF59、IFI27、S100A12、S100A9、CLIC3、SLC11A1、CACNA1E、LGALS2、ABCC1和CAMK4。9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，还包括提供川崎病生物标志物水平表示的报告。10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述川崎病生物标志物水平呈现导出川崎病得分，其中所述川崎病得分：a.从两个不同基因之间的循环阈值C(t)差异导出；b.通过几何均值、多元线性判别分析（LDA）或分布式梯度增强决策树（GBDT）机器学习，从所测量的血液生物标志物的值导出；或c.是每个生物标志物水平的倍数。11.一种诊断系统，包括试剂盒、试剂和从来自受试者的样品中产生川崎病得分的仪器，所述样品为血液、血清或血浆，其特征在于，包括：用于测量选自以下生物标志物组的一种或多种川崎病生物标志物的量的检测试剂，所述川崎病生物标志物组包括IFI27、C19ORF59、CACNA1E、CASP5、CR1、CLIC3、CRTAM、FKBP5、HGF、IL1RL1、KLHL2、MAPK14、NKTR、SLC11A1、S100A12、S100A9、TLR7和ZHF185中的一种或多种。12.根据权利要求11所述的诊断系统，其特征在于，进一步包括：a.用于测量川崎病生物标志物的平台系统；b.计算川崎病得分的计算表，以及c.确定患者是否患有川崎病的指示。13.根据权利要求11或12所述的诊断系统，其特征在于，所述组包括C19ORF59和IFI27。
14.根据权利要求11或12所述的诊断系统，其特征在于，所述组包括C19ORF...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈利民，
申请(专利权)人：天津云检医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：