一种冻干稳定剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体公开了一种冻干稳定剂及其制备方法与应用。本发明专利技术的冻干稳定剂，不含明胶、糊精和外源蛋白，包括A组分和B组分，A组分包括：蔗糖、M199、维生素C、NZ

【技术实现步骤摘要】
一种冻干稳定剂及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地说，涉及一种冻干稳定剂及其制备方法与应用。(禽用生物制品，如冻干活疫苗)

技术介绍

[0002]鸡新城疫、鸡传染性支气管炎是危害养鸡业的两类主要传染病，目前对其防控防护以免疫预防为主。当前生产和使用的疫苗主要有两大类，即活疫苗和灭活疫苗。其中活疫苗具有使用方便，副作用小，产生免疫力快，成本低等优点，从而得到广泛的应用。但活疫苗采用常规冷冻干燥工艺，需要于
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20℃条件下储存，运输需要冷链系统，耗时并耗费资源，常常因为保存或使用不当而受到环境影响，从而失去原有的生物活性，严重影响疫苗免疫效果，不利于在温湿度较高的地区和冷藏条件较差的地区进行积推广和应用。因此，开发禽用活疫苗稳定剂具有很重要的应用前景。

技术实现思路

[0003]针对现有技术的问题，本专利技术的目的之一是提供一种制备简便、成本低、对活疫苗(尤其是鸡传染性支气管炎活疫苗)的保护效果好的冻干稳定剂。
[0004]为了实现该目的，本专利技术的技术方案如下：
[0005]一种冻干稳定剂，其不含明胶、糊精和外源蛋白，包括A组分和B组分，A组分包括：蔗糖、M199、维生素C、NZ
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Amine AS、乳酸钙和谷氨酸钠；B组分包括：PVP、D
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山梨醇和吐温
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80；
[0006]其中，PVP、蔗糖、D
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山梨醇的质量比为(2
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4)：(1r/>‑
4)：(0.5
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2.5)。
[0007]本专利技术研究发现，现有技术中已有可对鸡新城疫病毒抗原、鸡法氏囊病毒抗原起到保护效果的稳定剂，但它们大多无法在鸡传染性支气管炎病毒抗原保护中发挥理想的效果。这是因为鸡传染性支气管炎病毒具有囊膜结构、且具有对温度敏感等方面的特殊性，故而无法通用一般的鸡新城疫病毒抗原、鸡法氏囊病毒抗原保护剂，且为研制传染性支气管炎活疫苗耐热保护剂增加了难度。
[0008]此外，在研发时还发现传染性支气管炎活苗在与新城疫活苗联合使用过程中，传染性支气管炎病毒组分的用量也会干扰新城疫病毒的免疫应答，进而为研发出可兼顾各方效果的鸡传染性支气管炎病毒和新城疫病毒抗原联合使用的耐热保护剂也增加了难度。
[0009]最终仅反复研究，本专利技术发现在摒弃本领域常用的明胶、糊精和外源蛋白(如牛血清白蛋白)后，再以特定组分配合，尤其是将PVP、蔗糖、D
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山梨醇以特定比例配合后形成的禽用冻干活疫苗稳定剂，其针对鸡传染性支气管炎活疫苗、鸡新城疫活疫苗和/或鸡法氏囊活疫苗具有良好的保护性能，能确保疫苗在2
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8℃有效保存，尤其解决了目前针对鸡传染性支气管炎活疫苗没有理想保护剂的问题，而且还减少了外源蛋白等引起的过敏等副作用。
[0010]本专利技术配方中，PVP是作为“支架”的大分子物质，其与特定比例的蔗糖合用，通过糖类间的特定氨键作用，以及对糖类的玻璃化温度的特定改变，增加了物理稳定性，防止活
性物质发生变性，可起到良好的低温、干燥保护剂作用，能防止和减少本专利技术保护对象冷冻过程结晶水的形成；再配合特定比例山梨醇的使用，可减少产品裂纹，易碎性，防止有效成分随水蒸气一起升华逸散，并对微生物有保护作用，可促进升华形成耐热骨架，阻断热传导和热辐射，进一步实现理想的保护剂效果。PVP、蔗糖、D
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山梨醇三者的特定配合，保证了本专利技术效果的实现。
[0011]本专利技术配方中还特别将特定的多种组分配合使用，以MEM199(M199培养基)、NZ
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Amine AS(氨基酸类)，升高成品的塌陷温度，阻止因塌陷而引起的蛋白质药物的破坏；以谷氨酸钠提高活疫苗冷冻干燥过程中存活率；以Vc的抗氧化活性主要在保护剂耐老化的过程中起作用，抑制氧化酶的活性，防止样品在冷冻干燥及储藏过程中氧化变质；以乳酸钙作为稳定剂；以吐温
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80在冻结和脱水过程中既降低冰、水界面张力所引起的冻结和脱水变形，又在复水过程中对活性组分起到润湿剂和重皱褶剂的作用。配合解决PVP和蔗糖联用时制品易发生萎缩导致冻干后的效价降低的问题，使最终的稳定剂效果理想。
[0012]优选，PVP、蔗糖、D
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山梨醇的质量比为(3
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4)：(2.5
‑
4)：(1.5
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2.5)，可获得更佳的保护效果。
[0013]本专利技术的冻干稳定剂中，A组分与B组分的体积比为1：1；
[0014]A组分按质量百分比计，包括：蔗糖2～8％、M199 0.5～1.5％、维生素C 0.3～0.7％、NZ
‑
Amine AS 2～6％、乳酸钙1～5％、谷氨酸钠2～8％，余量为水；
[0015]B组分按质量百分比计，包括：PVP 4～8％、D
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山梨醇1～5％、吐温
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80 0.005～0.015％，余量为水。
[0016]优选，A组分按质量百分比计，包括：蔗糖5～8％、M199 1～1.5％、维生素C 0.5～0.7％、NZ
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Amine AS 4～6％、乳酸钙3～5％、谷氨酸钠5～8％，余量为水；
[0017]B组分按质量百分比计，包括：PVP 6～8％、D
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山梨醇3～5％、吐温
‑
80 0.01～0.015％，余量为水。
[0018]更优选，A组分按质量百分比计，包括：蔗糖5％、M199 1％、维生素C 0.5％、NZ
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Amine AS 4％、乳酸钙3％、谷氨酸钠5％，余量为水；
[0019]B组分按质量百分比计，包括：PVP 6％、D
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山梨醇3％、吐温
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800.01％，余量为水；
[0020]或，A组分按质量百分比计，包括：蔗糖8％、M199 1.5％、维生素C 0.7％、NZ
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Amine AS 6％、乳酸钙5％、谷氨酸钠8％，余量为水；
[0021]B组分按质量百分比计，包括：PVP 8％、D
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山梨醇5％、吐温
‑
800.015％，余量为水。
[0022]本专利技术另提供一种制备上述冻干稳定剂的方法，其包括将A组分溶解在水中后，进行过滤除菌的步骤，以及将B组分溶解在水中后高温灭菌的步骤。
[0023]本专利技术的方法中，采用0.22μm过滤除菌(如采用0.22微米终端除菌过滤器)；高温灭菌条件为：116℃，30min。
[0024]本专利技术还提供一种冻干活疫苗，其包括上述冻干稳定剂。
[0025]本专利技术再提供一种上述冻干稳定剂，或上述方法制备得到的冻干稳定剂在疫苗冻干保护中的应用。
[0026]本专利技术的应用中，所述疫苗为禽用活疫苗，所述禽用活疫苗为单苗或联苗，优选为鸡传染性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种冻干稳定剂，其特征在于，不含明胶、糊精和外源蛋白，包括A组分和B组分，A组分包括：蔗糖、M199、维生素C、NZ
‑
AmineAS、乳酸钙和谷氨酸钠；B组分包括：PVP、D
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山梨醇和吐温
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80；其中，PVP、蔗糖、D
‑
山梨醇的质量比为(2
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4)：(1
‑
4)：(0.5
‑
2.5)。2.根据权利要求1所述的冻干稳定剂，其特征在于，PVP、蔗糖、D
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山梨醇的质量比为(3
‑
4)：(2.5
‑
4)：(1.5
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2.5)。3.根据权利要求1或2所述的冻干稳定剂，其特征在于，A组分与B组分的体积比为1：1；A组分按质量百分比计，包括：蔗糖2～8％、M199 0.5～1.5％、维生素C 0.3～0.7％、NZ
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Amine AS 2～6％、乳酸钙1～5％、谷氨酸钠2～8％，余量为水；B组分按质量百分比计，包括：PVP 4～8％、D
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山梨醇1～5％、吐温
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80 0.005～0.015％，余量为水。4.根据权利要求3所述的冻干稳定剂，其特征在于，A组分按质量百分比计，包括：蔗糖5～8％、M199 1～1.5％、维生素C 0.5～0.7％、NZ
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Amine AS 4～6％、乳酸钙3～5％、谷氨酸钠5～8％，余量为水；B组分按质量百分比计，包括：PVP 6～8％、D
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【专利技术属性】
技术研发人员：韩伟，周建民，孙瑶，张贺楠，李双男，李海鹰，王增福，吴宗学，
申请(专利权)人：乾元浩生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：